当期目录

2012年 第32卷 第6期    刊出日期：2012-06-05

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肝移植专题

多途径扩展肝移植供肝来源

朱志军

2012, 32(6):  593-597. 

摘要 ( 1032 )   PDF (583KB) ( 795 )  

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成人活体肝移植中小体积供肝问题及处理

李宏宇 李波 魏永刚

2012, 32(6):  598-602. 

摘要 ( 1071 )   PDF (459KB) ( 742 )  

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得益于前期成功经验及技术的改进，采用右半肝作为移植物的成人间活体肝移植术取得了良好的手术效果。但在将小体积供肝(GBWR<0.8)运用于成人间右半供肝活体肝移植术时，小肝综合征仍是导致术后患者死亡，移植失败的重要危险因素。本文旨在通过回顾历史、分析现状、综述文献并结合临床经验，对小体积供肝的安全性进行综述性分析，对于部分经过选择的一般状况良好的受体，植入小体积供肝(0.8>GBWR>0.6)可取得良好移植效果。

成人间体外劈离式肝移植中肝静脉分配方式的临床观察

魏林 朱志军

2012, 32(6):  603-607. 

摘要 ( 1136 )   PDF (872KB) ( 637 )  

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目的：分析成人间劈离式肝移植中肝静脉不同分配方式的利弊，探讨合理的临床分配方案。方法：回顾2007年1月至2011年10月间我院完成的12例成人间劈离式肝移植病例的肝静脉分配及重建方式，观察患者术后的肝静脉血管并发症及相关预后。结果：12例病人中使用右半肝的6例病人采取了4种静脉分配和重建方式：肝右+肝中+腔静脉1例；肝右+5、8段静脉重建+腔静脉2例；肝右+5、8段静脉重建2例；肝右+1/2肝中+腔静脉1例。相应的6例左半肝移植物亦得到4种肝静脉分配和重建方式：肝左+4段静脉重建1例；肝左+肝中静脉2例；肝左+肝中+腔静脉2例；肝左+1/2肝中静脉1例。术后1例左半肝采用肝左+4段静脉重建，患者因4段重建血管阻塞导致小肝综合征，最终死亡，其余11例病人未出现肝静脉相关并发症。结论：成人间劈离式肝移植的肝静脉分配和重建可有多种方式，在临床操作中应在满足移植物功能性肝体积足够的前提下，结合患者病情和外科操作的需要制定合理的个体化方案。

研究论文

新型HER2 适配体的筛选及鉴定

刘喆 杨先达

2012, 32(6):  608-612. 

摘要 ( 2053 )   PDF (636KB) ( 826 )  

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摘要：目的 研发能特异性结合人表皮生长因子受体2（Human Epithelia Growth Factor Receptor2，HER2）的DNA适配体，为开发针对HER2的新型肿瘤靶向诊疗技术打下基础。方法 体外合成全长86碱基并含有40个随机寡核苷酸的单链DNA文库，以HER2表位肽为靶标，利用指数富集的配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX），从单链DNA文库中筛选能够选择性结合HER2多肽的核酸适配体；流式细胞术检测富集进度、适配体与HER2蛋白及HER2阳性细胞的结合特性；Mfold软件预测二级结构。结果 经多轮筛选获得了能够识别HER2多肽的DNA适配体HA5，其能够选择性地结合HER2蛋白及HER2阳性的乳腺癌细胞，而不结合胰酶和HER2阴性细胞。结论 DNA适配体HA5能选择性地识别HER2阳性的乳腺癌细胞，在研发针对HER2的新型肿瘤靶向诊疗技术方面具有应用潜能。

2009甲型H1N1疫苗株与普通季节性H1N1疫苗株在呼吸道细胞中感染效率的比较

王玉国 洪晓栩 何丽芳 杨宁 王丽丽 赵琼英 蒋澄宇

2012, 32(6):  613-617. 

摘要 ( 1118 )   PDF (696KB) ( 711 )  

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摘要：目的 探讨2009甲型H1N1疫苗株与季节性H1N1疫苗株在人呼吸道细胞中感染效率的差异。方法 用间接免疫荧光法检测H1N1病毒感染A549、CNE-2Z、H1650、Hep-2和MRC-5细胞的效率；用间接免疫荧光法检测抑制因子对H1N1病毒侵入细胞的影响。结果 （1）2009甲型H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率：H1650>A549>CNE-2Z>MRC-5>Hep-2；季节性H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率A549>CNE-2Z>H1650>MRC-5>Hep-2；（2）2009甲型H1N1疫苗株和季节性H1N1疫苗株均依赖于内吞作用进入细胞。结论 在A549细胞中，季节性H1N1疫苗株的感染效率明显高于甲型H1N1疫苗株；在H1650细胞中，甲型H1N1疫苗株的感染效率明显高于季节性H1N1疫苗株。

HCV核心蛋白对HepG2 细胞microRNA表达谱的影响

吴燕 张莉萍 曹炬 黄世峰 文阳安

2012, 32(6):  618-622. 

摘要 ( 1270 )   PDF (705KB) ( 721 )  

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摘要：目的 分析HCV核心蛋白（HCV-Core）对HepG2细胞microRNA表达谱的影响。方法 将构建好的重组真核表达质粒pCDNA3.1（+）/HCV-Core用脂质体转染HepG2细胞，经G418筛选得到稳定转染HCV-Core的HepG2细胞，命名为HepG2-HCV Core细胞株。然后用反转录聚合酶链反应（RT-PCR），细胞免疫荧光和Western blot对HCV核心蛋白在HepG2细胞里mRNA和蛋白水平的表达情况进行验证。利用博奥生物公司的miRNA Array基因芯片，分析稳定表达HCV核心蛋白的HepG2细胞和转染空质粒pCDNA3.1（+）的HepG2细胞二者microRNA表达谱的差异，最后用Taqman探针荧光定量PCR法进行验证。 结果 感染HCV-Core后，HepG2细胞表达有差异的microRNA有8种，用Taqman探针荧光定量PCR法进行分析，发现HCV核心蛋白可以上调miR-29、 miR-146a、miR-149、miR-192、miR-221、miR-222和miR-193b；下调miR-196a。结论 HCV核心蛋白可以诱导肝细胞microRNA表达谱发生改变，在肝癌发生发展过程中发挥重要作用。

人脂肪来源的间充质干细胞诱导人乳腺癌MCF7细胞上皮间质转化

徐琦璘 赵春华 王椋

2012, 32(6):  623-627. 

摘要 ( 192 )   PDF (1409KB) ( 964 )  

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目的 探讨人脂肪来源的间充质干细胞（haMSC）在乳腺肿瘤微环境中对乳腺癌细胞的影响。方法 采用transwell体系间接共培养乳腺癌细胞系（MCF7）和人脂肪来源间充质干细胞，对共培养后的肿瘤细胞进行细胞形态，EMT相关marker，以及肿瘤特性的检测。结果 与对照组相比，共培养之后的MCF7细胞发生上皮间质转化。与haMSC共培养能明显促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移，但对细胞周期和增殖能力没有明确的影响。结论 人脂肪来源的间充质干细胞可诱导乳腺癌细胞上皮间质转化。

利用microRNA-基因芯片联合Real-Time PCR方法鉴定肝内及肝外胆管癌表达下调的microRNAs

刘长征 何小东 于岚 刘卫 陈松森 李静静 蔡磊

2012, 32(6):  628-633. 

摘要 ( 120 )   PDF (1131KB) ( 689 )  

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目的 筛选并鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达下调的miRNAs，进行初步的功能研究。方法 利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达下调或共同表达下调的miRNAs，选择Real-Time PCR方法进行验证；根据肝内及肝外胆管癌不同的下调miRNAs表达谱，选择差异明显且具有代表性的miRNAs进行初步的功能研究，即利用miRNA特异模拟物转染胆管癌细胞系QBC939，利用MTT试剂盒分析细胞增殖变化，研究表达下调miRNAs与胆管癌细胞增殖的关系。结果 表达分析显示，肝外胆管癌组织表达特异表达下调的miRNAs共25个，肝内胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共15个，在肝内及肝外胆管癌组织均表达下调的miRNAs共6个。在胆管癌细胞系QBC939中过表达分别miR-181a、miR-596、miR-492以及miR-602可以明显抑制细胞增殖。结论 肝内及肝外胆管癌具有不同的miRNAs表达谱，表达下调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖。

尘螨变应原Der f2和Der p2基因的DNA改组及生物信息学分析

马玉成 李朝品 姜玉新 朱涛

2012, 32(6):  634-638. 

摘要 ( 212 )   PDF (1226KB) ( 802 )  

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目的 构建尘螨变应原Der f2和Der p2嵌合基因文库，并进行生物信息学分析。方法 PCR分别扩增尘螨Ⅱ类变应原Der f2和Der p2基因，扩增产物等量混合后DNaseⅠ随机酶解；胶回收50bp-100bp之间的片段，连续进行3轮无引物PCR扩增，随后以Der f2基因的特异性引物进行有引物PCR扩增，扩增片段连接于pUCm-T载体，转化E. coli DH-5α后，随机挑取60个单菌落测序，应用DNAMAN软件进行序列比对分析和NetMHCII 2.2 Server软件进行辅助性T细胞（helper T cell）抗原表位的预测。结果 获得了10个基因片段发生明显交换的重组子，且生物信息学分析结果显示其编码蛋白不仅具有Der f2和Der p2所共有的Th细胞表位同时也出现了新的Th细胞表位。结论 成功应用DNA改组技术获得了Der f2和Der p2嵌合基因疫苗库，为后期筛选和制备高免疫原性和低变应原性的高效尘螨哮喘疫苗奠定了基础。

体外三维培养骨髓间充质干细胞诱导分化为肝细胞及其极化特征

卫金花 曲强 杨阳 何小东 刘卫

2012, 32(6):  639-643. 

摘要 ( 141 )   PDF (1042KB) ( 693 )  

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摘要：目的 探讨体外三维诱导培养体系下人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化及极化特征。方法 从成人骨髓中分离出骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cell, BMSC),利用胶原蛋白三维培养体系进行体外诱导培养.用HE染色法观察分化肝细胞的形态及结构特征,用免疫组化法检测肝细胞特异性蛋白的表达,用免疫荧光法检测极化蛋白BSEP和SRBI的表达特征。结果 成人BMSC在体外胶原蛋白三维诱导培养体系中呈多层排列生长,形成细胞间紧密连接及管状结构。BMSC分化来源肝细胞特异性表达ALB及AFP。肝细胞极化蛋白BSEP和SRBI在肝细胞呈特征性分布。结论 BMSC在体外胶原三维培养体系中可诱导分化为肝细胞,并形成肝组织特征性的极化结构。

小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

林瑞竹 赵春华 徐琦璘

2012, 32(6):  644-649. 

摘要 ( 164 )   PDF (1883KB) ( 654 )  

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目的 探讨体外诱导获取均一的神经干细胞群(neural stem cell，NSCs)的有效方法，并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法 首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮细胞(neuroepithelial progenitor cells，NPCs)。其次将NPCs采用添加表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)和成纤维细胞生长因子-2 (fibroblast growth factor -2，FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后，再贴壁培养，诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成，同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色，以在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5d出现大量Sox1+的神经上皮细胞（NPCs）；NPCs悬浮培养后可进一步诱导可得到形态均一的NSC细胞群。2代、6代NSCs神经干细胞标志定量PCR检测结果为：Pax6、Nestin、Mash1、BLBP 高表达。第8代NSCs免疫组荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2、Pax6阳性。结论 成功诱导mESC生成均一的神经干细胞群，并且可以在体外连续稳定的传代。

MicroRNA-26a的表达对急性髓系白血病细胞增殖的影响

谭丽 刘文丹 谭获

2012, 32(6):  650-655. 

摘要 ( 119 )   PDF (1055KB) ( 623 )  

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【摘要】 目的 构建has-miR-26a重组慢病毒的表达载体, 并观察其对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响。方法 构建人MicroRNA-26a慢病毒表达载体(LV-miR-26a-GFP) 并感染人急性髓系白血病细胞系NB4；实验分为未感染组、感染组 （感染LV-miR-26a-GFP) 、阴性对照组(感染LV-GFP);利用real-time PCR 检测miR-26a在NB4细胞内的表达水平, western blot检测其靶基因PTEN的表达; 采用CCK-8法绘制细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果 成功构建miR-26a重组慢病毒的表达载体, 感染白血病细胞NB4后, 能够成功过表达miR-26a。与感染LV-GFP阴性对照组和未感染组相比, LV-miR-26a-GFP感染组细胞的增殖能力显著增强( P < 0.01)。在NB4细胞中过表达miR-26a后, 其靶基因PTEN的表达明显被抑制。结论 MicroRNA-26a的表达可增强急性髓系白血病细胞的增殖能力，促进白血病细胞的增殖。

HPGD基因新缺失突变致儿童原发性肥大性骨关节病一例报道及文献复习

刘霜 邱正庆 孟岩 仇佳晶

2012, 32(6):  656-659. 

摘要 ( 308 )   PDF (938KB) ( 706 )  

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摘要：目的 通过对1例临床疑似原发性肥大骨关节病的患者进行HPGD基因分析并确诊，提高对该疾病的认识。方法 根据患儿症状，体征及骨骼系统放射学检查进行临床诊断，提取患儿及其父亲外周血DNA,PCR扩增HPGD基因编码氨基酸的7个外显子片段，测序检测突变，并通过文献复习进行总结。结果 患儿女性，5岁，具有手指及足趾末端指节肥大，手足多汗，前额皮肤增厚等典型临床表现。PCR扩增片段直接测序示患儿HPGD外显子3发生c.308_309delCT（p.Thr103Thrfs4X）纯合改变，此突变为国内外首次报道。结论 原发性肥大骨关节病为一种少见的常染色体隐性遗传疾病，典型的临床及影像学表现有助于诊断，HPGD基因突变分析是确诊的主要方法，本文在国内首次报道了基因诊断明确的患者一例，为进一步指导治疗和产前诊断提供了依据。

一种新复合杂合突变导致21-羟化酶缺陷症

陈晨 聂敏 卢琳 陆召麟 孙梅励 杨秀萍

2012, 32(6):  660-663. 

摘要 ( 122 )   PDF (653KB) ( 714 )  

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摘要：目的 通过对一例单纯男性化型21-羟化酶缺陷症（21-OHD）患者的临床特点及基因突变研究，探讨21-OHD基因突变的类型和特点及临床表型与基因突变类型之间的关系。方法 收集患者的临床资料，提取患者外周血白细胞DNA，用PCR方法扩增CYP21A2基因的10个外显子及内含子边界，测序鉴定该患者CYP21A2基因突变位点，进一步分析突变位点与临床表型的关系。结果 患者的临床表现主要为外阴发育异常。基因测序结果显示为复合杂合突变，其一个等位基因为c.515 T>A，p.I172N，另一个等位基因为c.593 T>G，p.L198X，此种复合杂合突变主要引起单纯男性化表现。p.L198X是至今尚未见报道的一种新突变。结论 本研究通过对患者CYP21A2基因突变分析,发现了CYP21A2基因一种新的突变p.L198X,丰富了CYP21A2基因突变数据库。同时从分子遗传学方面证实了对患者的诊断，患者基因型能很好地解释其临床表现。

NEK2基因沉默促进卵巢癌细胞SKOV3凋亡

范婷婷 唐良萏

2012, 32(6):  664-668. 

摘要 ( 115 )   PDF (760KB) ( 648 )  

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摘要：目的 研究siRNA干扰NEK2表达对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 设计合成3条对NEK2的siRNA，转染进SKOV3细胞，采用Real-time PCR和Western blotting技术筛选出抑制效率最高的Nek2-siRNA序列，进行后续实验；分别采用MTT和流式细胞学技术检测细胞增殖和凋亡，用Western blotting检测BAD、BCL-2和CASPASE-3的表达。结果 （1）RNA干扰序列2对SKOV3细胞NEK2的抑制效果最明显；（2）与空白组和阴性对照组相比， Nek2-siRNA转染48h后，SKOV3细胞增殖能力下降，发生凋亡的细胞增加（P＜0.01）；（3）与空白组和阴性对照组相比，Nek2-siRNA转染48h后，SKOV3细胞中 BAD和CASPASE-3的蛋白表达上调，而BCL-2的蛋白表达下调（P＜0.01）。结论 Nek2-siRNA可能通过沉默NEK2的表达，促进卵巢癌细胞SKVO3的凋亡。这为卵巢癌的治疗提供了基础理论和新的靶点。

术前单用静脉铁剂对胃肠肿瘤相关性贫血的治疗作用

马志强 葛军娜 于健春 康维明 叶欣

2012, 32(6):  669-672. 

摘要 ( 129 )   PDF (387KB) ( 692 )  

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目的 评估术前单用静脉铁剂对升高胃肠肿瘤合并贫血患者的治疗作用。方法 收集2010年6月-2012年2月北京协和医院基本外科住院并接受手术治疗的胃肠肿瘤合并术前贫血的患者，对贫血合并缺铁的患者给予静脉铁剂治疗，在手术当日晨起或铁剂治疗后第14天晨起复查血常规、血清铁、铁蛋白水平、转铁蛋白、肝肾功能的检查，记录围手术期患者接受输血剂量，与同期住院合并贫血患者的围手术期输血量进行比较。结果 共有121例患者入组。术前静脉铁剂的应用能迅速的提高血色素水平，升高红细胞数量，改善红细胞的MCV、MCHC和MCH指标。静脉铁剂治疗后短期内血清铁以及血清铁蛋白水平显著升高（P<0.05），与治疗前相比均有统计学差异。与治疗前血色素水平<100g/L相比，治疗前血色素水平≥100g/L的患者对静脉铁剂的反应较差。铁剂治疗组与同期未行铁剂治疗的胃肠肿瘤并贫血患者围手术期平均输血量差别比较明显（P<0.05） 结论 在胃肠肿瘤合并贫血患者中，单用静脉铁剂能安全、快速提高患者的血色素水平以及机体缺铁状态，并降低贫血患者围手术期输血量。静脉铁剂的疗效可能受贫血程度影响。

强心苷类化合物对肺癌细胞A549和H1975的不同生长抑制作用

王超 郑直

2012, 32(6):  673-677. 

摘要 ( 293 )   PDF (811KB) ( 696 )  

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目的：研究3种强心苷药物地高辛、吉妥辛、狄吉妥辛对体外培养的人肺腺癌细胞株A549和H1975的抑制作用。方法：应用3种强心苷药物处理A549和H1975，MTS法检测两种细胞对3种药物的敏感度；流式细胞仪检测A549和H1975的细胞凋亡率和增殖情况变化。结果：细胞经3种强心苷类药物处理48h后，测得H1975半数抑制浓度在0.1μmol/L左右,而A549半数抑制浓度则均大于10μmol/L。流式细胞术检测到在一定浓度药物作用下，能诱导 两种细胞凋亡和抑制增殖。而且H1975的凋亡和增殖抑制现象具有明显剂量依赖性。结论：强心苷类药物对人肺癌细胞A549和H1975具有诱导凋亡和抑制增殖的作用。但是由于A549和H1975的遗传背景不同，二者在凋亡程度和增殖抑制程度有较大差别。

ACE2在高血压大鼠左心室重构中的作用及缬沙坦干预的实验研究

房灿 孙经武 刘成霞 刘冉冉

2012, 32(6):  678-681. 

摘要 ( 132 )   PDF (655KB) ( 623 )  

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【摘要】：目的：观察血管紧张素转换酶2(ACE2)在自发性高血压大鼠(SHR)左心室中的表达以及缬沙坦干预后对ACE2表达水平的影响。方法：24只12周龄雄性SHR随机分为SHR组、缬沙坦组，12只同龄雄性血压正常的Wistar大鼠作为正常对照组。10周后处死，测定心脏重量指数（HWI）、左心室重量指数（LVWI）；酶联免疫法测定血浆中AngⅡ的浓度；碱水解法测定心肌中羟脯氨酸的含量；逆转录-聚合酶链反应检测心肌中ACE2的表达。结果：与正常对照组比较, SHR组LVWI、血浆中AngⅡ的浓度以及心肌羟脯氨酸的含量均增高(P<0.05)，心肌组织中ACE2的表达显著降低 (P<0.05)；与SHR组比较,缬沙坦组LVWI、血浆中AngⅡ的浓度以及心肌羟脯氨酸的含量均降低(P<0.05)，心肌组织中ACE2表达显著增高 (P<0.05)。结论：缬沙坦可逆转高血压左心室重构，机制可能与增加心肌中ACE2的表达有关。

细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力

米蕊芳 潘春晓 卞晓翠 田文嘉 宋利强

2012, 32(6):  682-686. 

摘要 ( 106 )   PDF (899KB) ( 612 )  

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摘要：目的 研究细胞融合在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法 用聚乙二醇细胞融合的方法将黑色素瘤细胞融合，并通过流式分选获得稳定的融合细胞。体外培养及细胞计数检测融合细胞的增殖速度。Affymatrix基因芯片分析黑色素瘤细胞融合前后差异表达的基因,并用Ingenuity Pathways Analysis (IPA)软件进行基因功能分析。Western blot方法检测细胞蛋白表达。结果 PEG化学融合法成功获得稳定的黑色素瘤融合细胞。融合细胞的体外增殖速度明显减慢。进一步的基因芯片及基因功能分析显示黑色素瘤融合细胞与增殖相关的PI3K-AKT通路明显下调。融合细胞phospho-S6蛋白表达明显降低。 结论 细胞融合通过PI3K-AKT通路降低黑色素瘤细胞增殖能力。

罗格列酮抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生和基质金属蛋白酶-2的表达

周晓莉 雷寒

2012, 32(6):  687-692. 

摘要 ( 111 )   PDF (874KB) ( 660 )  

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摘要：目的 探讨PPARγ配体罗格列酮对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生及MMP-2和TIMP-2表达的影响。方法 实验分为给药组（罗格列酮3 mg/kg?d）和对照组（生理盐水），每组n =5。用球囊血管内膜剥脱法建立大鼠颈动脉再狭窄模型。HE染色检测血管内膜与中膜的厚度比和面积比。RT-PCR和Western blotting法检测血管组织MMP-2和TIMP-2的mRNA和蛋白质的表达。结果 罗格列酮明显抑制球囊损伤后血管新生内膜增生，与对照组相比，术后所有时间点上内膜与中膜的厚度比及面积比均显著减少（P <0.001）。罗格列酮组与对照组比较显著抑制球囊损伤后各时间点血管中基质金属蛋白酶-2的mRNA和蛋白的表达，术后1、7、14、28d蛋白表达由对照组的0.605 0.007、1.000 0.002、0.890 0.014和0.290 0.028降至0.310 0.014、0.525 0.021、0.405 0.007和0.081 0.004（P <0.001)。但罗格列酮对MMP-2抑制剂TIMP-2的mRNA和蛋白表达无影响。结论 罗格列酮抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生，其机制可能与MMP-2的表达下调及MMP-2/TIMP-2表达失衡有关。

乳腺癌前哨淋巴结数目的影响因素分析

郭春光 刘骞 解亦斌 王翔

2012, 32(6):  693-696. 

摘要 ( 223 )   PDF (366KB) ( 784 )  

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摘要：目的 分析影响乳腺癌前哨淋巴结数目的相关因素，探讨最佳的前哨淋巴结活检值。方法 回顾性分析2007年1月至2011年12月中国医学科学院肿瘤医院乳腺癌前哨淋巴结活检病例578例。采用Logistic回归模型分析前哨淋巴结数目与临床病理特征的相关性。结果 全组女性，平均年龄49.9（21~90）岁。总共获得2222枚前哨淋巴结，平均每例3.8枚（1~15）。淋巴结转移率17.8%（103/578），转移组和无转移组淋巴结数目无差异。单因素分析显示，术式、显像方法和体质指数影响前哨淋巴结数目（P<0.05）。多因素分析中，单纯乳房切除、联合显像、BMI≤30者前哨淋巴结较多（P<0.05）。前哨淋巴结限于5枚时，转移病例检出率100%。18.7%（108/578）病例不必继续送检淋巴结， 298枚淋巴结免于切除。结论 乳腺癌前哨淋巴结活检数量受到显像方法、乳腺术式和体质指数的影响，5枚前哨淋巴结可能是一个比较合适的参考标准。

技术与方法

无融合标签人胱抑素C重组蛋白的制备

陈特 刘宇思 谌海兰 陈曦 王虹 张雪梅 胥文春

2012, 32(6):  697-701. 

摘要 ( 138 )   PDF (680KB) ( 715 )  

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目的：构建人胱抑素C（Cystatin C，CysC）基因的原表达质粒pCold TF-CysC，表达TF-CysC融合蛋白，并制备去标签蛋白的CysC。 方法：用人CysC的全长编码基因插入原核表达载体pCold TF并测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导、镍柱纯化后获得带有His标签的重组蛋白TF-CysC。利用GST-HRV 3C蛋白酶酶切去除该融合蛋白的TF标签，再经分子筛一步法同时去除TF标签、3C蛋白酶获得CysC，SDS-PAGE鉴定其纯度。用所获无标签CysC免疫新西兰大白兔，制备抗血清，并用间接ELISA及Western blot鉴定。结果: 测序获得序列与Genbank中人CysC序列一致，实现了CysC可溶性高表达。纯化的无蛋白标签的CysC纯度大于95%，分子量约为13.3 kD，与预期相符。免疫家兔后，获得的抗血清效价达到1：4×106以上，并能特异性识别商用CysC蛋白。该蛋白稳定性良好，在4℃保存一个月未见明显下降。结论：成功应用原核表达系统获得去融合蛋白标签的CysC，为进一步建立CysC的免疫检测方法奠定了基础。

振动反应成像技术在弥漫性肺实质病的应用初探

金贝贝 许文兵

2012, 32(6):  702-706. 

摘要 ( 104 )   PDF (646KB) ( 686 )  

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摘要:目的 初步探讨振动反应成像（VRI）检查在弥漫性肺实质疾病中的图像特点，进而总结其临床应用价值 方法 选择2010年7月至2011年2月期间在北京协和医院呼吸科住院的胸部影像学表现为双下肺索条、网格、蜂窝影的弥漫性肺实质疾病（DPLD）的病人35例做为试验组，同期招募健康成年人33例作为对照组。VRI设备采用VRIxp系统，按照研究步骤（问诊、查体、VRI检查等）采集两组人员临床及VRI信息。采用非参数检验以及t检验等统计学方法，对DPLD组及正常对照组的VRI图像特点，包括振动能量曲线、图像动态发展、MEF面积、左肺QLD值、干湿罗音监测等方面进行分析。结果 DPLD组振动曲线评分2(1~3)，动态图像发展评分3(2~4)，健康对照组振动曲线评分0(0~1)，动态图像发展评分0(0~1)，两组比较有显著差异（P<0.05）,其中DPLD组观察动态图像发展，可见吸气相能量团显著向中下移心而双上肺能量缺失。DPLD组MEF面积(71.13±4.94)千像素,左肺QLD值（54.31±11.34）%；健康对照组MEF面积(71.61±3.42)千像素,左肺QLD值（56.70±6.02）%，两组比较无显著差异（P>0.05）；DPLD组VRI监测的干湿罗音与听诊符合度为89%。结论 影像学以双下肺索条、网格、蜂窝样改变为主的DPLD患者，VRI图像有自己的特点，且与正常人存在差异，希望今后VRI检查可用于早期探测间质性肺疾病的发生。

临床园地

异位妊娠246例临床探讨与分析

周正 王鑫 沈旭娜

2012, 32(6):  707-708. 

摘要 ( 88 )   PDF (227KB) ( 783 )  

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摘要 目的 探讨异位妊娠的主要病因及各种治疗方法对异位妊娠治疗的临床价值，提高对异位妊娠的认识。方法 回顾分析2010年1月至12月一年间所收治的246例异位妊娠病例的临床资料，其中药物保守治疗的136例，其中33例转手术治疗。手术治疗共141例，55例腹腔镜下病灶切除或输卵管造口。结果 本研究246例异位妊娠患者，有人流或药流病史的190例，占77.24%，腹腔镜下病灶切除或输卵管造口术55例，占手术比例的41.78%结论人流或药流若并发感染可造成慢性输卵管炎盆腔炎等增加异位妊娠的发病率，因此降低人工流产对预防异位妊娠的发生极为重要。腹腔镜技术损伤小，恢复快，住院时间短，用药少，外观好在治疗异位妊娠中已发挥越来越重要的作用。

先天性心脏病合并感染性心内膜炎的临床及预后分析

王辉 倪超 田庄 郭立琳 朱文玲

2012, 32(6):  709-712. 

摘要 ( 135 )   PDF (372KB) ( 622 )  

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目的：总结成人分流型先天性心脏病（CHD）合并感染性心内膜炎（IE）患者的临床特点和治疗效果，明确影响此类患者预后的因素。方法：共入选2001年1月至2010年12月我院收治的分流型CHD合并IE患者51例（均符合DUKE诊断标准），回顾性记录并分析其临床资料。结果：合并于分流型CHD的IE占全部IE患者的20.6%，其中室间隔缺损和动脉导管未闭是最常见的CHD。链球菌属（47.1%）仍是最常见的致病菌。27例患者（52.9%）出现并发症，主要为瓣膜损害和系统性栓塞。38例患者（58.8%）接受了手术治疗，其中21例为早期手术（即于感染性心内膜炎活动期进行）。CHD合并IE的死亡率为19.6%。多元回归分析显示，严重心力衰竭[OR 0.293（0.045-0.347），p =0.012]和中枢神经系统并发症 [OR 0.308（0.074-0.63），p =0.014]是总死亡率的预测因子，而手术治疗是死亡率降低的独立预测因子[OR 0.238（0.009-0.183），p =0.031]。结论：发生IE的分流型CHD中以未修补的室间隔缺损和动脉导管未闭多见；CHD合并IE时有较高的死亡率；出现严重心力衰竭和中枢神经系统并发症提示预后不良；手术治疗可显著降低此类患者的死亡率。

研究短文

成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化及原代培养

邓佳慧 肖军花 王嘉陵

2012, 32(6):  713-714. 

摘要 ( 1502 )   PDF (530KB) ( 1690 )  

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摘要: 目的 探讨成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及细胞生长曲线特点。方法 采用肺组织块直接贴壁、胰蛋白酶消化、肺组织块和胰蛋白酶消化法混合三种方法培养成年小鼠肺成纤维细胞；采用差时贴壁和差速离心法纯化细胞；光镜观察细胞生长形态学特点和免疫组化法检测vimentin和α-SMA表达水平鉴定成纤维细胞；采用MTT法检测肺成纤维细胞生长曲线特点。结果 分离纯化培养出的原代肺成纤维细胞呈长梭形、条索状，融合成片，单层细胞长满，呈漩涡状、栅栏状、放射状排列。vimentin表达阳性、α-SMA表达弱阳性的成纤维细胞在 95％以上。细胞接种48 h进入指数生长期，120 h时达到高峰。结论 三种方法均能成功分离纯化培养出高纯度的成年小鼠肺成纤维细胞，为利用成年小鼠肺成纤维细胞作为研究对象提供了可靠可行的技术方法。

草苁蓉提取物抑制HSC—T6细胞体外增殖及胶原合成

李成浩 金永日 金海燕 朴熙绪

2012, 32(6):  715-716. 

摘要 ( 137 )   PDF (367KB) ( 690 )  

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蛋氨酸预防兔对乙酰氨基酚的肝中毒

李仲娟

2012, 32(6):  717-718. 

摘要 ( 106 )   PDF (332KB) ( 880 )  

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短篇综述

高原疾病相关易感基因研究进展

巩江

2012, 32(6):  719-723. 

摘要 ( 120 )   PDF (531KB) ( 868 )  

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基因多态性可能是高原病的发病机制之一，而易感性差异则是其外在表现。了解高原疾病候选易感基因，为高原病防治提供参考。

医学教育

结合科研课题的PBL教学模式在组织学技术课程中的应用

张静 吴靖芳 任君旭 张江兰 张文静 吕洋 王志勇

2012, 32(6):  724726-724726. 

摘要 ( 139 )   PDF (357KB) ( 674 )  

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《组织学技术》是一门实践性较强的课程，有助于医学生掌握相关的研究方法。结合科研课题的PBL教学模式的应用能全面提高学生的科研能力，并能完成科研课题的部分内容，具有双赢的效果。此种模式的应用对培养高素质医学人才有重要意义。