摘要: 目的 探讨体外诱导获取均一的神经干细胞群(neural stem cell,NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法 首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮细胞(neuroepithelial progenitor cells,NPCs)。其次将NPCs采用添加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和成纤维细胞生长因子-2 (fibroblast growth factor -2,FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后,再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,以在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5d出现大量Sox1+的神经上皮细胞(NPCs);NPCs悬浮培养后可进一步诱导可得到形态均一的NSC细胞群。2代、6代NSCs神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP 高表达。第8代NSCs免疫组荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2、Pax6阳性。结论 成功诱导mESC生成均一的神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。