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2008年 第28卷 第2期    刊出日期：2008-02-25

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研究论文

糖皮质激素受体基因ER22/23EK多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系及与汉族人群的比较

姜文锡 程祖亨 牛文全 邱长春

2008, 28(2):  113-118. 

摘要 ( 465 )  

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目的 探讨糖皮质激素受体基因(GR)第2外显子ER22/23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法 选择新疆维族191名年龄＞90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65~70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对照组；同时随机调查移居新疆和田地区30年以上的（65~70岁）汉族老年人82人。采用序列特异引物PCR（PCR-SSP）、PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）和PCR-直接测序（PCR-sequencing）等技术对GR基因进行分型。结果 191名自然长寿老人和53名对照组中，ER22/23EK的等位基因(x2=0.9445, p=0.3311)和基因型频率(x2=0.9484, p=0.3301)无差异。新疆汉族老人GR基因ER22/23EK携带者显著高于维吾尔族老人，其WM、MM基因型(x2=15.1460, p=0.0005)和M等位基因频率(x2=19.0685, p<0.0001)均显著高于维吾尔族老人，而WW基因型和W等位基因频率则显著降低。结论 ER22/23EK的等位基因和基因型频率可能与维吾尔族自然长寿无关联，但有显著的种族差异。

全脑缺血-再灌注降低成年大鼠海马CA1区抑制性突触功能

许林峰 马文裴 赵宁辉 冯忠堂

2008, 28(2):  119-122. 

摘要 ( 377 )  

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目的 观察全脑缺血-再灌注对成年大鼠海马CA1区抑制性突触功能的影响。方法 成年雄性大鼠，随机分为：①假手术组(SH)、②缺血-再灌注3d组 (IR-3)、③缺血-再灌注7d组(IR-7)。用四动脉阻断法制作全脑缺血模型，使用全细胞电压钳技术记录海马脑片CA1区锥体细胞诱发的抑制性突触后电流（evoked Inhibitory Postsynaptic Currents, eIPSCs）。结果 与SH组相比：低刺激强度时，IR-3及IR-7组eIPSCs的幅值明显降低( p <0.05)；IR-7组eIPSCs的上升时间明显变短( p <0.05); IR-3组eIPSCs的配对抑制明显变大( p <0.05)。结论 全脑缺血-再灌注降低了大鼠海马CA1区抑制性突触功能。

SDF-1/CXCR4增强骨髓间质干细胞的造血支持作用

陈东平 张志坚 吴秀丽 林建华

2008, 28(2):  123-127. 

摘要 ( 490 )  

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目的 探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）/ CXCR4在骨髓间质干细胞（MSCs）支持CD34+造血干/祖细胞（HSPCs）扩增中的作用。方法 在长期培养基（LTC）中，以大鼠骨髓MSCs作为饲养层体外扩增骨髓CD34+细胞，每周分别加入SDF-1、SDF-1抗体或CXCR4抗体至5周。计算CD34+细胞数和集落形成细胞（CFC）数，以评价造血支持功能。为评估SDF-1/CXCR4对CD34+细胞增殖周期的影响，进行了杀伤试验以计算增殖指数。流式细胞术检测MSCs和CD34+细胞中SDF-1与CXCR4的表达；ELISA检测MSCs和CD34+细胞培养基中SDF-1的含量。结果 CD34+细胞数、CFC数和增殖指数在加入SDF-1后明显增加（P<0.01），加入SDF-1抗体或CXCR4抗体后明显减少(分别为P<0.05，P<0.01）。CD34+细胞表面表达CXCR4，MSCs不表达；MSCs细胞内表达SDF-1，CD34+细胞不表达。在MSCs培养基中检测到SDF-1，在CD34+细胞培养基中未发现。结论 SDF-1/CXCR4在骨髓MSCs支持HSPCs扩增中起重要作用。

RGZ对PPARgamma在裸小鼠移植瘤内表达的调控研究

吴良洪 程南生 杨帆 熊先泽 魏大鹏 夏庆杰

2008, 28(2):  128-132. 

摘要 ( 586 )  

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【摘要】目的：探讨RGZ对PPARgamma在裸小鼠移植瘤内表达的调控作用。方法：采用不同浓度和剂量的RGZ对荷瘤裸小鼠进行灌胃干预3W后处死，RT-PCR实时荧光定量检测目的基因PPAR-γ的△Ct值和表达拷贝数，测量各组瘤体体积TV和重量TW，计算相对肿瘤体积RTV、相对肿瘤增值率T/C%，并进行统计学分析。结果：胆管癌移植瘤随RGZ剂量增高，PPAR-γ的表达升高，相对肿瘤增值率T/C%减少。统计学处理，对照组与低剂量组比较，P＞0.05，无统计学意义；而与高剂量组比较，P＜0.001，有显著的统计学意义。结论：RGZ对PPAR-γ在裸小鼠移植瘤内能呈剂量依赖性地上调其表达，具有较强的调控作用。

胰岛素抵抗大鼠及恢复状态下PGC-1α和Mfn2表达的变化

曲东明 宋光耀 高宇 王敬 胡淑国 韩梅

2008, 28(2):  133-137. 

摘要 ( 492 )  

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目的 观察胰岛素抵抗（IR）及改善后骨骼肌过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)和线粒体融合蛋白2（Mfn2）的表达变化及线粒体形态和参数的变化。方法 成年Wistar大鼠随机分为对照组（NC）、高脂组（HF）和高脂罗格列酮干预组（HF+RSG）。喂养4周及8周时，清醒状态下用正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术评价IR；第8周时，实时定量PCR和Western blot检测骨骼肌PGC-1α和Mfn2的表达；透射电镜观察骨骼肌线粒体的形态；Image-Pro Plus 6分析线粒体的各项参数。结果 高脂喂养4周后HF组与HF+RSG组IR状态形成。继续喂养4周后，HF+RSG组由于服用罗格列酮IR状态改善明显。与NC组相比，HF组的PGC-1α和Mfn2均显著下降(P<0.05，下同)；与HF组相比，HF+RSG组上述两基因的表达均显著升高；而与NC组相比，HF+RSG组PGC-1α的表达没有明显差异，而Mfn2的表达仍较低。与其余两组相比，HF组线粒体的形态和各项参数也发生了明显的改变。结论 胰岛素抵抗状态的形成与PGC-1α和Mfn2的表达下降有关，也与线粒体的改变有关。

人乳腺癌MDR1基因稳定沉默细胞的筛选及其生物学特性

王明玉 宋丽华 宋现让 魏玲 孙桂云 王兴武 谭学芬

2008, 28(2):  138-143. 

摘要 ( 428 )  

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目的　筛选MDR1沉默的人乳腺癌细胞并比较其生物学特性。方法 采用BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expression System生产表达MDR1基因shRNA的慢病毒载体（Invitrogen公司） ，转导敏感人乳腺癌细胞MCF-7和耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM，杀稻瘟菌素（blasticidin）筛选获得MDR1稳定沉默细胞MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi。定量RT-PCR检测MDR1 mRNA表达，流式细胞术检测P-GP蛋白表达和功能，MTT法检测药物敏感性。结果　经10mg/L blasticidin筛选12d获得MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi细胞。MCF-7、MCF-7 /RNAi、MCF-7/ADM和MCF-7/ADM /RNAi细胞的MDR1 mRNA相对表达水平分别为1、0.13、17.14和2.01；P-GP表达分别为（1.5±0.3）％、（1.2±0.2）％、（89.4±3.6）％和（16.3±1.9）％；细胞内Rh123的潴留分别为（92.4±3.1）％、（90.6±4.0）％、（13.6±1.6）％、（72.4±2.8）％；IC50值分别为0.90、0.92、19.61和4.04mg/L。结论　应用慢病毒载体稳定沉默MDR1基因可有效逆转人乳腺癌细胞耐药性。

人造血增效因子（hHSF）C末端结构与其趋化活性的关系

罗丝 杨克恭 刘长征 邓艳春 苏林 孔燕 陈松森

2008, 28(2):  144-148. 

摘要 ( 412 )  

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目的 研究人造血增效因子hHSF C末端结构与其趋化活性的关系。 方法 用PCR方法合成编码3种hHSF C末端截短变异体DNA片段，分别重组到pET30a或pET42a中，并在E.coli BL21（DE3）中进行表达。hHSF 1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化，融合蛋白GST-hHSF1-53经亲和层析、肠激酶（EK）酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定，用飞行时间质谱法测定其相对分子质量，用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞（PMN）趋化活性。 结果 测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致， hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右，主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上，主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右，它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3，均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比，hHSF1-66（缺失3个氨基酸）对人PMN最大趋化活性（50nmol/L，CI）没有明显差异，hHSF1-59（缺失10个氨基酸）和hHSF1-53（缺失16个氨基酸，α 螺旋完全缺失）最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。 结论 hHSF C末端结构，特别是 α 螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。

Akt介导过氧化氢促新生大鼠心肌细胞肥大

高嵩丹 李宏伟 李爱玲 修瑞娟

2008, 28(2):  149-152. 

摘要 ( 543 )  

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目的 探讨Akt在过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法 用10μmol/L或50μmol/L浓度H2O2处理原代培养的新生大鼠心肌细胞，以细胞体积和蛋白含量反映心肌细胞肥大程度，观察Akt抑制剂对H2O2致心肌细胞肥大的作用；Western blot检测H2O2对Akt的激活效应。结果 10μmol/L或50μmol/L的H2O2培养心肌细胞48h后，细胞体积增大和蛋白含量增高；应用Akt抑制剂后减弱了H2O2刺激心肌细胞肥大的效应；H2O2使心肌细胞Akt磷酸化水平增高，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin和LY294002抑制了H2O2引起的Akt的活化。结论 Akt信号通路可能介导了低浓度H2O2所致的心肌细胞肥大。

羊栖菜多糖体外诱导人大肠癌细胞凋亡

陈金星 胡昔城 杨维 钱健

2008, 28(2):  153-159. 

摘要 ( 425 )  

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目的 研究羊栖菜多糖对人大肠癌lovo和RKO细胞增殖的作用及其意义。方法 用MTT法检测SFPS在体外抑制大肠癌细胞增殖的抑制率；扫描电镜、透射电镜和流式细胞术鉴定细胞凋亡。结果SFPS对lovo细胞和RKO细胞具有显著的生长抑制作用，并在一定范围内呈量效关系。在电镜下，可见细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集，凋亡小体形成。流式细胞术结果显示，G0/G1期的细胞比例有不同程度的增高，相应的S期细胞比例显著下降；而lovo细胞的细胞周期时相比例无明显改变。结论：SFPS在体外能够显著诱导lovo和RKO细胞凋亡，这可能是SFPS抑制人大肠癌细胞增殖的机制之一。

食管鳞癌中hTERT表达、DNA含量与细胞增殖周期的关系

张颖 郭建文 刘江惠 左连富 吴艳萍 薛娟

2008, 28(2):  160-163. 

摘要 ( 488 )  

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目的 探讨食管鳞癌中hTERT表达与细胞DNA含量、细胞增殖周期的关系。方法 采用免疫组化检测hTERT表达，流式细胞术检测hTERT和DNA含量及增殖指数。结果 ①癌组hTERT阳性率和FI值显著高于癌旁组 (P<0.01)；②癌组DI值和异倍体率均高于癌旁组(P<0.05)，癌组PI值显著高于癌旁组 (P>0.01) 。结论 hTERT过量表达、DNA含量增加和增殖指数升高与食管鳞癌的发生、发展密切相关。

吉林地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的基因分型

李坚 王艾琳 张晓梅 宿立娟

2008, 28(2):  164-166. 

摘要 ( 495 )  

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目的 对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带的ESBLs耐药基因进行分型，为临床合理应用抗生素提供理论依据。方法 收集住院患者标本中分离出的51株大肠埃希菌和32株肺炎克雷伯菌，经聚合酶链反应(PCR)对上述菌株所携带的ESBLs耐药基因进行分型。结果 产ESBLs大肠埃希菌中耐药质粒编码TEM型、SHV型和非TEM非SHV型超广谱β-内酰胺酶基因的百分率依次为80.4%, 7.8%和11.8%;而在肺炎克雷伯菌中的百分率依次为78.1%, 71.9%和25.0%.多数产ESBLs肺炎克雷伯菌同时产生一种以上的β-内酰胺酶。结论 获得了吉林地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的不同基因型，ESBLs基因型具有地区性差异。

顺铂诱导肾小管上皮细胞毒性及Bcl-2对抗细胞凋亡作用机理研究

冯乐平 乔 伟 ZHANG Dong

2008, 28(2):  167-171. 

摘要 ( 530 )  

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【摘要】 目的 通过转染不同畸变的Bcl-2基因，探讨顺铂诱导RPTC细胞凋亡的作用机理和Bcl-2基因抑制顺铂诱导细胞凋亡的作用途径。方法 应用不同亚细胞结构分布的Bcl-2基因体外转染肾小管上皮细胞（RPTC），根据共聚焦显微技术和免疫荧光技术分析Bcl-2（X）基因表达产物在RPTC细胞线粒体和内质网上的分布定位，以及采用Hoechst33258染色并进行细胞凋亡计数的统计情况，研究顺铂诱导细胞凋亡的信号传导途径。结果 通过基因转染发现，不同畸变组分的Bcl-2（Bcl-acta，Bcl-cb5）分别定位于RPTC细胞的线粒体、内质网上，Bcl-nt则同时定位于上述两种细胞器上。Bcl-cb5组可见更多的Bax被激活，同时可见较多的碎裂细胞核。统计发现，定位于线粒体上的Bcl-acta明显抑制顺铂对RPTC细胞诱导的细胞凋亡(P<0.05)。结论 顺铂可以明显诱导RPTC细胞凋亡，而且这种凋亡的信号传导途径主要通过线粒体途径进行。Bcl-2抑制顺铂诱导细胞凋亡也主要是通过线粒体途径而起作用。

三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞生物学特性的影响

葛繁梅 白庆咸 高延慧 刘延香

2008, 28(2):  172-176. 

摘要 ( 381 )  

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目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞生物学特性影响的分子机制。方法 用人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞作为体外实验对象。应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡峰、死亡受体DR4和DR5分子及黏附分子VLA4(CD49d)的表达；用聚合酶链反应测定靶细胞cxcr4基因表达；免疫组化染色和荧光显微镜检测DR4和DR5分子的表达情况。 结果 5μmol .L-1 的 As2O3可以明显上调RPMI8226细胞DR4、DR5分子的表达(P<0.01),明显下调cxcr4基因和VLA4分子表达；还可以诱导RPMI8226细胞凋亡、增加G1期细胞比例，出现明显凋亡峰。 结论 As2O3 诱导RPMI8226细胞凋亡，可能与死亡受体DR4、DR5分子过度表达有关；As2O3抑制靶细胞cxcr4基因和黏附分子VLA4的表达，从而影响细胞的增殖、迁移与归巢能力。

技术与方法

P19细胞心肌体外分化诱导条件的优化

岳晓珊 長岡正人 赤池敏宏 王钊

2008, 28(2):  177-180. 

摘要 ( 419 )  

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目的 分别考察P19细胞心肌分化诱导中的几种影响因素，优化P19细胞心肌分化的诱导条件。方法 使用悬滴法或96孔板悬浮培养法制备细胞聚集体（aggregates），二甲基亚砜（DMSO）为诱导剂诱导P19细胞的心肌分化。普通光学显微镜下观察跳动的心肌细胞的产生来确定诱导是否成功，免疫荧光染色确认心肌特异性蛋白Troponin T的表达，RT-PCR方法检测分化诱导后心肌细胞标志基因的表达情况。结果 使用96孔板悬浮培养法诱导细胞形成聚集体后转入贴壁培养阶段时细胞聚集体贴壁状态优于传统的悬滴法。DMSO的加入可以提高细胞形成聚集体后贴壁时细胞聚集体的完整性。1x107~2x108 L-1的接种浓度下心肌细胞分化诱导效率较高。在可观察到跳动的心肌细胞之前即可检测到Troponin T的表达。结论 通过对细胞形成聚集体的诱导方法、诱导剂、接种浓度等因素的优化可以提高P19细胞的心肌分化效率，为开发高效心肌分化诱导法提供了条件。

临床园地

盆腔脂肪增多症8例分析

李全 高瑞通 李雪梅

2008, 28(2):  181-184. 

摘要 ( 504 )  

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目的 旨在提高对盆腔脂肪增多症的认识。方法 回顾性分析盆腔脂肪增多症病例8例男性(1983年~2006年11月)的临床病理特点，以及治疗情况和预后。年龄为26~64岁(44±11) 岁, 入院前病程为2~240（95±82）月，随访时间为（15±33）月。接受外科手术治疗5例，手术联合糖皮质激素治疗1例，单用糖皮质激素治疗1例。结果 8例中合并腺性膀胱炎4例。临床主要表现为尿频、尿急（3例）、排尿困难（3例）、肉眼血尿（3例）、高血压（5例）。8例均存在肾功能不同程度下降[估算肌酐清除率(Ccr)为76±18mL/min]。8例泌尿系统影像学检查均有异常，直接或间接显示盆腔内脂肪增多，其中6例存在输尿管或者肾盂积水。盆腔组织病理学检查4例，均表现为血管脂肪组织。治疗后症状缓解，肾功能变化不明显。结论 盆腔脂肪增多症临床表现多不典型，可伴肾功能损害，诊断主要依赖影像学和病理学检查。

慢 性 胰 腺 炎 MR 诊断

张肇慧 滕坤 王阿樱 刘海明

2008, 28(2):  185-188. 

摘要 ( 488 )  

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　目的 探讨MRI多种成像技术对慢性胰腺炎诊断的准确性及其临床应用价值。方法 选择25例经手术病理、临床追踪和其他影像学方法证实的慢性胰腺炎MRI进行回顾性分析，其表现包括胰腺形态和体积改变、信号特征、动态增强扫描和MRCP所见。检查方法包括平扫冠状位T2WI，轴位T1WI，轴位T2WI，轴位T1WI FS（脂肪抑制）序列，MRCP（磁共振胰胆管水成像），动态增强前后的T1WI FS序列。结果 　胰腺体积弥漫性增大、T1WI FS病变区信号减低、动态增强扫描同步强化及串珠状扩张胰管穿透病变区是慢性胰腺炎的典型表现。结论 MRI能更早发现慢性胰腺炎，显示胰管的改变和假性囊肿，对慢性胰腺炎诊断具有重要价值。

研究短文

JNK磷酸化在哮喘大鼠肺内的动态变化

林立 李昌崇 苏苗赏 管小俊 张维溪 王晓丽 罗运春

2008, 28(2):  189-190. 

摘要 ( 565 )  

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摘要： 目的 探讨哮喘大鼠肺内磷酸化c-Jun氨基末端激酶（P-JNK）的动态变化及其意义。 方法 将SD大鼠随机分为对照组（C组）和哮喘组（A组），后者依末次激发后不同时相，分成哮喘0.5h、1h、2h、3h、6h、12h、24h组。光镜及电镜观察肺组织病理及超微结构变化，图像分析技术测定标准化支气管壁厚度（Wat）和标准化气道平滑肌厚度（Wam），免疫组化(IHC)、Western blotting检测肺内P－JNK蛋白表达。 结果 A组肺组织EOS炎性浸润较C组明显增加，基底膜增厚，肺泡隔内胶原纤维增生等；A组（选择A1h组）Wat、Wam均较C组增加（均P＜0.01）；A组肺内P－JNK蛋白动态表达：OVA激发后0.5h表达明显升高（P＜0.01），1h时保持较高水平磷酸化，2h时略有下降，3－6h回升并达高峰，12h下降，24h回复到基础水平(P＞0.05)。 结论 OVA激发后哮喘大鼠肺内P-JNK存在一个波动性升高到回复的过程，提示JNK磷酸化在哮喘气道炎症和气道重塑中起重要作用。

心肌缺血后处理减轻大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及超微结构损伤

方军 陈良龙 吴黎明 崔花花 张绍洁

2008, 28(2):  191-193. 

摘要 ( 434 )  

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与CIK细胞共培养降低K562/ADR来源DC细胞MDR-1基因表达

蒋东霞 徐虹 胡杰英 何琳 买玲 杨胜利 宋永平

2008, 28(2):  194-195. 

摘要 ( 383 )  

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梗阻性黄疸大鼠小肠组织IgA及白介素-6mRNA的表达

姜旭 李哲浩 翟晓芳 崔凤奎

2008, 28(2):  196-197. 

摘要 ( 545 )  

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目的 探讨梗阻性黄疸时小肠组织免疫球蛋白(Ig)A及白介素(IL）-6mRNA的表达及其意义。方法 健康Wistar雄性大鼠48只，分为假手术组及梗阻性黄疸组，取小肠组织以原位杂交法测IL-6mRNA+细胞数，以免疫组化法测定肠粘膜固有层内IgA+细胞，测定门静脉血内毒素含量。结果 梗阻性黄疸4、7、14d组肠粘膜固有层内IgA+细胞及IL-6mRNA+细胞均较假手术组减少（P<0.01），梗阻性黄疸4、7、14d组间相比，IgA+细胞数及IL-6mRNA+细胞数随胆道梗阻时间延长而减少（P<0.05）。门静脉血内毒素含量与肠粘膜固有层内IgA+细胞呈负相关（r=-0.906 P<0.01）；和IL-6mRNA+细胞呈负相关（r=-0.891 P<0.01）。结论梗阻性黄疸时小肠粘膜固有层内IgA及IL-6mRNA的表达减少，是削弱肠粘膜屏障功能的原因之一，是导致肠源性内毒素血症的一个重要原因。

短篇综述

RNA干扰用于抗HBV感染的研究进展

彭亮 曹虹

2008, 28(2):  198-200. 

摘要 ( 381 )  

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乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染可引起急性和慢性乙型肝炎，最终可能导致肝硬化、肝癌等严重后果。作为一种可以帮助生物抵抗外在感染的体内防御机制，近年来RNA干扰已成为人们进行抗感染和基因治疗研究的有力工具。本文对RNA干扰技术在抗HBV感染方面的研究进展综述如下。

单核苷酸多态性与复杂性皮肤病

王建锋 梁燕华 张学军 杨森

2008, 28(2):  201-205. 

摘要 ( 264 )  

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近年来国际HapMap计划的启动和深入以及高通量基因分型技术的不断发展，将单核苷酸多态性（SNP）在复杂性疾病研究中的应用推向了一个新的高潮。利用SNP具有数量多、分布广、密度大、突变率低等特点，进行全基因组连锁研究和关联分析，有助于解决复杂疾病人群多样性的难题，为寻找复杂性皮肤病的易感基因、风险单倍型、药物靶点和个体化治疗方案开辟了新的途径。本文就复杂性皮肤病的SNP相关研究简要作一综述。

协和大查房

多饮、多尿、生长发育停滞、甲状腺肿大

焦力 韩潇

2008, 28(2):  206-208. 

摘要 ( 460 )  

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