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2008年 第28卷 第3期    刊出日期：2008-03-25

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研究论文

低氧预适应鼠脑海马组织内与cPKCγ相互作用的ERK1/2磷酸化水平降低

张楠 韩松 李俊发

2008, 28(3):  209-212. 

摘要 ( 317 )  

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目的 探讨与经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)相互作用的细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)的磷酸化水平在鼠脑低氧预适应形成过程中的变化。方法 用成年雄性BALB/c小鼠制备整体低氧预适应模型，将小鼠随机分为正常对照(H0)、早期低氧预适应(H3)和延迟性低氧预适应(H6)三组。应用免疫共沉淀，蛋白印迹等方法检测胞质和膜相关成分中与cPKCγ相互作用的ERK1/2的磷酸化水平。结果 小鼠海马组织中ERK1/2能与cPKCγ免疫共沉淀，且与H0组相比，H3及H6组ERK1/2的204位酪氨酸磷酸化水平明显降低(p<0.05)。结论 小鼠海马组织中，cPKCγ与ERK1/2存在相互作用，且可能参与了脑低氧预适应的发生和发展

二氧化硫对大鼠缺血再灌注心脏的损伤作用

张素清 杜军保 金红芳 耿彬 李淑葵 张春雨 唐朝枢

2008, 28(3):  213-216. 

摘要 ( 347 )  

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目的 观察二氧化硫（SO2）在心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法：大鼠心脏分为：I/R组，SO2组及天冬氨酸异羟肟酸(hydroxamate, HDX)组。采用Langendorff离体心脏灌注模型。MacLab数据采集系统监测离体心脏功能。结果：SO2组心功能恢复率明显低于I/R组（p<0.05, p<0.01）；HDX组显著高于I/R组（p<0.05, p<0.01）。SO2组冠脉流液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、谷氨酸-草酰乙酸转移酶（GOT）活性、肌红蛋白（Mb）含量及心肌丙二醛（MDA）、共轭双烯键（CD）含量及GOT活性显著高于I/R组（p<0.05，p<0.01）；HDX组冠脉流液中上述指标明显低于I/R组（p<0.05，p<0.01）。SO2组心肌还原型谷胱甘肽（GSH）含量明显低于I/R组（p<0.05）；HDX组心肌GSH含量显著高于I/R组（p<0.01）。结论 SO2参与了大鼠心肌缺血再灌注损伤。增加心肌脂质过氧化及降低心肌还原型谷胱甘肽含量可能与SO2心肌损伤有关。

硫代bFGF寡核苷酸抑制HepG2和Hep2细胞的增殖

黄红亮 向军俭 唐勇 王宏 邓宁 靳英杰

2008, 28(3):  217-221. 

摘要 ( 323 )  

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目的 探讨硫代修饰对bFGF寡核苷酸抑制HepG2和Hep2细胞增殖的影响。方法 设计、合成bFGF寡核苷酸，聚乙烯亚胺(jetPEI)介导其转染入HepG2和Hep2细胞，荧光显微镜观察其在细胞中的定位，流式细胞仪分析转染效率，MTT法检测细胞增殖。结果 bFGF反/正义硫代寡核苷酸被jetPEI介导高效转染入细胞内，主要位于细胞核。反/正义硫代寡核苷酸均呈剂量时间依赖地抑制细胞增殖，相同剂量时正硫代寡核苷酸的抑制效率高于反义硫代寡核苷酸。相应非修饰反义寡核苷酸较其互补正义链能更有效抑制两种细胞增殖。核苷酸突变明显降低反义硫代寡核苷酸对细胞抑制，并不影响正义硫代寡核苷酸的细胞抑制率。反义硫代寡核苷酸明显降低细胞中bFGF表达。结论 硫代修饰bFGF反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸以反义机制抑制肿瘤细胞增殖，正义寡核苷酸则因硫代修饰于细胞内以非核酸特异性机制抑制肿瘤细胞增殖。

建立稳定抑制死亡相关蛋白激酶表达的细胞系

郭黠 汪亚君 张海涛

2008, 28(3):  222-226. 

摘要 ( 359 )  

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目的 筛选稳定抑制DAPK表达的PC12细胞系，并观察这些细胞系的生长特性。方法 设计、合成4条RNA干扰序列，连接到pDsRed1-N1-U6质粒载体上，扩增后提取质粒转染到PC12细胞，并同时转染1株空载质粒作为对照，然后通过G418筛选细胞克隆，建立稳定增殖细胞系，再通过Western blot筛选最为有效的干扰序列，最后用MTT，流式细胞术等检测转染细胞系的生长特性。结果 4条干扰序列均已成功转染并筛选出单克隆细胞系，Western blot实验结果证实，4条干扰序列中有3条对DAPK的表达有明显的抑制作用，其中以第2条干扰序列的抑制效果最为明显 结论 成功建立稳定增殖和抑制DAPK表达的PC12细胞系。

家兔慢性冬眠心肌MMP-2、MMP-9和TIMP-2表达与胶原重构

陈艳 孙伏清 李淑梅 张飞龙 陈良龙

2008, 28(3):  227-231. 

摘要 ( 299 )  

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目的　观察家兔慢性冬眠心肌（CHM）心肌间质胶原纤维变化及基质金属蛋白酶-2，9（MMP-2、MMP-9）及其抑制剂（TIMP-2）的表达。方法 27只家兔随机分为模型组（CHM，n=15）及假手术组（SHAM，n=12）。观察心肌间质胶原容积百分比（ICVF）、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维比例、计算Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例记分（CRS）；免疫组化染色及western blot观察MMP-2、MMP-9及TIMP-2表达。结果 与SHAM组相比，CHM组ICVF显著增加（P < 0.01）；Ⅰ/Ⅲ胶原比例增高；CRS显著增加（P < 0.01）；MMP-2及MMP-9的表达明显增多（P < 0.01）， TIMP-2的表达明显减少（P < 0.01）。结论　在CHM过程中， MMPs/TIMPs比例失平衡，可能是CHM间质胶原重构的机制之一。

TGF-β1诱导成肌纤维细胞形成在低氧性

李柏完 蒋永亮 戴爱国

2008, 28(3):  232-237. 

摘要 ( 291 )  

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目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用。 方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分成：对照组、低氧3、7、14和21d组，每组8只，测大鼠平均肺动脉压(mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI)；免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，原位杂交和免疫组化检测TGF-β1基因表达，透射电镜观察腺泡内血管壁细胞表型，细胞培养观察低氧和TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞是否发生表型转化。 结果 （1）低氧7d后大鼠mPAP升高 (P<0.05)。低氧14d后出现肺血管重塑、右心室肥大。（2）从低氧7d开始无肌型动脉、部分肌型动脉、肌型动脉的构成比分别是39%、46%和15% 与对照组60%、35%和5%比较差异显著（PX2＜0.005）。（3）腺泡内肺动脉管壁α-SMA的表达随着低氧时间的延长逐渐增多。低氧14d TGF-β1 mRNA表达增高（P<0.01）；TGF-β1蛋白在对照组呈弱阳性，低氧3d表达增强(P<0.01)，低氧7d达高峰(P<0.01)。（4）透射电镜证实成肌纤维细胞含有特异性的微丝和丰富的粗面内质网。（5）细胞培养表明低氧能够刺激成纤维细胞发生表型转化，TGF-β1能够促进成纤维细胞表型转化的发生。 结论 转化生长因子β1诱导成肌纤维细胞形成是低氧性肺血管重塑的重要原因之一。

磷酸化P27kip1的表达与非霍奇金淋巴瘤的恶性相关

何松 王燏婵 沈爱国 张冬梅 陆建新 赵玥铭 程纯

2008, 28(3):  238-242. 

摘要 ( 302 )  

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目的 探讨P27kip110位丝氨酸（Ser10）和187位苏氨酸（Thr187）磷酸化形式的蛋白表达水平与非霍奇金淋巴瘤（NHL）恶性程度的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测88例NHL及15例良性增生淋巴结中Ser10、Thr187磷酸化P27kip1和P27kip1 蛋白的表达，结合临床及病理资料进行统计分析。结果 两种磷酸化位点的P27kip1蛋白在良性增生淋巴结（不包括生发中心）中的阳性率明显低于NHL，随着肿瘤侵袭性的增加，两种磷酸化位点的P27kip1蛋白表达水平增高，与增殖指标Ki-67呈正相关。Thr187磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip蛋白表达水平呈正相关，Ser10磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip1蛋白表达水平表现为负相关。结论 磷酸化的P27kip1与NHL的恶性程度有关，联合检测磷酸化P27kip1与P27kip1蛋白的表达水平可为NHL的临床诊断和治疗提供参考。

同型半胱氨酸经甲基化修饰下调去卵巢大鼠主动脉雌激素受体α基因的表达

刘军须 张敬各

2008, 28(3):  243-246. 

摘要 ( 443 )  

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目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠雌激素受体α (ERα) 基因表达和其启动子CpG岛甲基化的影响。方法 高效液相色谱仪检测血浆Hcy水平；RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP) 分别检测ERα mRNA表达水平及基因启动子CpG岛的甲基化状态。结果 去卵巢和给予甲硫氨酸饮食均可升高大鼠血浆Hcy水平。去卵巢和Hcy均可使大鼠ERα mRNA表达减少，但5'-Aza 可使细胞ERα mRNA表达增多。假手术组大鼠主动脉ERα基因启动子有2例 (20%) 存在甲基化，去卵巢组有3例 (30%) 存在甲基化，而去卵巢＋Hcy组有6例 (60%) 存在甲基化；对照组细胞ERα启动子CpG岛完全去甲基化，Hcy组细胞甲基化增强，5'-Aza使细胞去甲基化。结论 Hcy可经甲基化修饰方式下调去卵巢大鼠主动脉ERα mRNA表达。

重组γ-神经胶质成熟因子诱导体外神经干细胞分化为星形胶质细胞

廖晓萍 陈杖榴 李慎涛

2008, 28(3):  247-251. 

摘要 ( 353 )  

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目的　探索γ-神经胶质成熟因子（GMFG）能否促进大鼠神经干细胞增殖并分化成神经胶质细胞。方法　无菌分离大鼠胚胎脑组织进行原代培养和传代培养，将第三代含有神经球的培养基制成细胞悬液，经nestin免疫荧光染色检测呈阳性后，分4组培养，1组、2组每天分别加入5 μg/L、10 μg/L重组GMFG，3组加入10%胎牛血清（FBS），对照组为培养基。结果　对照组细胞培养4 d后见少数细胞增殖并长出细长的分支；FBS组细胞培养3 d后大量增殖并分化，形态学上为原浆型星形胶质细胞，呈扁平片状贴在培养皿表面；GMFG组细胞培养2 d后大量增殖并分化，形态学上为纤维型星形胶质细胞，5 μg/L组细胞分化不如10 μg/L组细胞分化明显。结论　GMFG能诱导神经干细胞在体外增殖并分化为星形胶质细胞。

肥胖人群中瘦素受体基因Lys656Asn多态性与血三酰甘油水平的相关性

鲁瑾 邹大进

2008, 28(3):  252-255. 

摘要 ( 396 )  

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目的 研究瘦素受体（LepR）基因Lys656Asn多态性与血三酰甘油水平的相关性。 方法 聚合酶链反应－单链构象多态性(PCR-SSCP)方法测定无亲缘关系，且有完整临床资料的232例上海地区中国人群的LepR基因Lys656Asn多态性的基因型(包括130例单纯性肥胖患者及102例正常对照者)。 结果 肥胖组和对照组两组LepR基因Lys656Asn基因型的频率分布无显著差异。在肥胖组中，Lys656Asn变异与血三酰甘油水平相关，携带G等位基因的肥胖患者血三酰甘油水平较高(1.74±0.91 比较 0.95±0.32, P<0.05)。Logistic回归分析显示，该多态性与血三酰甘油水平独立相关(P<0.05)。 结论 LepR基因Lys656Asn多态性与上海地区中国肥胖人群血三酰甘油水平相关。

狼疮肾炎小鼠肾脏的比较蛋白质组学研究

施孟如 林全 吕建新

2008, 28(3):  256-259. 

摘要 ( 312 )  

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目的 探讨狼疮肾炎(LN)小鼠肾脏和正常小鼠肾脏蛋白质组的差异。方法 应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肾组织总蛋白质，凝胶用银染显色，扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。结果 同组实验重复3次，其中正常对照组3张图找到蛋白质点平均573±52个，匹配率为83％；LN组找到蛋白质点平均658±43个, 匹配率为87％。经软件分析，LN组和对照组比较表达增加大于2倍的点有119个；降低大于0.5倍的点有140个。结论 LN小鼠肾脏蛋白质表达发生了显著变化，这可能和LN的发生发展有着密切关系。

罗格列酮和二甲双胍对小鼠脂肪组织转录因子FoxO3a蛋白表达的影响

李玉秀 曾静波 孙琦 王姮

2008, 28(3):  260-263. 

摘要 ( 323 )  

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目的 观察KKAy小鼠脂肪组织FoxO3a的表达及罗格列酮和二甲双胍处理后该蛋白表达的变化。方法 对照组为16周龄C57BL小鼠7 只, 实验组KKAy糖尿病小鼠组21只，随机分为3组，一组为糖尿病对照组，一组给予罗格列酮，一组给予二甲双胍处理，为期4周。取附睾脂肪垫，用Western blot方法检测Foxo3a的蛋白表达。结果：KKAy糖尿病小鼠脂肪组织FoxO3a表达明显高于对照组，分别为1.76 ± 0.19 和1.15 ± 0.10(P<0.001)，罗格列酮组FoxO3a表达为1.43 ± 0.24，显著低于糖尿病组（P<0.05），与对照组相近；二甲双胍组FoxO3a表达为1.57 ± 0.23与糖尿病对照无差别。结论 罗格列酮改善胰岛素抵抗可能与FoxO通路有关；二甲双胍改善血糖和胰岛素抵抗可能与此无关。

技术与方法

体外构建胚胎干细胞生长分化的三维研究模型

魏国峰 李向东 张维疆 曲鹏

2008, 28(3):  264-268. 

摘要 ( 366 )  

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目的 以液态胶原为支架，小鼠胚胎干细胞（ESCs）为细胞模型，构建ESCs-胶原复合体，旨在尝试建立一种能够实现干细胞生长、分化的三维培养体系。方法 提取鼠尾胶原，观察ESC在自制胶原条带内增殖的形态特征，并测定葡萄糖/乳酸活性。以ESCs源心肌细胞为目的细胞，利用免疫组化、RT-PCR及电镜技术评价胶原条带内ESCs进行自发性分化的能力。结果 ESCs在胶原条带所提供的三维培养体系内生长、增殖状态良好，且彼此间能够建立细胞连接。胶原条带内部分ESCs能够自发性分化为心肌细胞。该心肌细胞均可表达心肌蛋白cTn-T，心肌转录因子NKX2.5 及肌球蛋白轻链MLC-2v mRNA，且肌小节结构发育成熟。结论 以液态I型胶原为主体的支架材料可以为ESCs提供良好的生长基质，促进其组织化发育。该实验初步明确了体外构建干细胞生长分化三维模型的可行性。

临床园地

超声引导技术在肌间沟臂丛神经两点阻滞中的应用

崔旭蕾 徐仲煌 陈绍辉 任洪智 罗爱伦 黄宇光

2008, 28(3):  269-271. 

摘要 ( 317 )  

相关文章 | 计量指标

目的 比较超声引导定位法与神经刺激器引导定位法用于肌间沟臂丛神经阻滞的效果。方法 拟行上肢手术的患者90例随机分为3组（n=30）,对照组：神经刺激器定位单点阻滞组；US组：超声引导与神经刺激器确认相结合定位单点阻滞组；UD组：超声引导与神经刺激器确认相结合定位两点阻滞组。各组均给予0.5%的罗哌卡因30ml，其中 UD组被阻滞的两支目标神经各给予15ml。结果 UD组阻滞平均起效的时间 明显短于US组和对照组。UD组感觉神经阻滞完善率明显高于US组和对照组。结论 超声引导下行肌间沟臂丛神经阻滞起效快，并发症少；超声引导下两点阻滞法可明显改善阻滞效果。

研究短文

重组人促红素对大鼠低氧／复氧心室肌的保护作用

印媛君 叶挺梅 高琴 夏强

2008, 28(3):  272-274. 

摘要 ( 246 )  

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人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞表达GABA受体mRNA

许燕 段萍 吴素霞 韩雪飞 鄢文海 邢莹

2008, 28(3):  275-277. 

摘要 ( 251 )  

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JNK激酶抑制剂抑制大鼠肾脏缺血再灌注诱导的肾小管上皮细胞凋亡

王艳 夏安周 姬怀雪 邢淑华

2008, 28(3):  278-279. 

摘要 ( 276 )  

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氯贝丁酯抑制大鼠海马神经元HMG还原酶表达和胆固醇外流

张淑坤 姜玲玲 王素玲 杨荣慧 侯艳宁

2008, 28(3):  280-281. 

摘要 ( 290 )  

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医学教育

医学院校专业化教师队伍建设的途径

林萍 管远志

2008, 28(3):  282-285. 

摘要 ( 259 )  

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教师的专业化发展已成为高校师资队伍建设的关键，高校教师队伍的整体素质决定学校教育的发展水平。本文从教师专业素质内涵出发，比较了国内外高校教师构成现状，探讨了加强医学院校教师队伍可持续发展的途径。

短篇综述

T-bet/GATA3与疾病

张春霞 任少敏

2008, 28(3):  286-288. 

摘要 ( 278 )  

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近年来转录因子T-bet/GATA3一直是免疫学研究领域的热点之一，随着研究的深入，T-bet/GATA3在一些疾病的发生、发展过程中所起的作用也逐渐被认识,本文就T-bet/GATA3与疾病间的关系进行综述。

粒细胞集落刺激因子在干细胞移植中的应用进展

金世柱 韩明子 裴凤华

2008, 28(3):  289-293. 

摘要 ( 313 )  

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粒细胞集落刺激因子（G-CSF）是一种促粒细胞增殖的细胞因子，主要应用于各种原因引起的粒细胞减少症。近年来大量国内外的基础及临床研究表明,G-CSF能够动员骨髓间充质及外周血中的造血干细胞，这在干细胞移植领域中为干细胞的释放、富集、动员、促进迁移、诱导分化等一系列问题的解决提供了一种新的解决思路。本文旨在对G-CSF在干细胞移植领域中的新进展做一综述

胚胎干细胞增殖分化相关基因

姜开军 王菊 周宗瑶

2008, 28(3):  294-296. 

摘要 ( 370 )  

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胚胎干细胞是从早期胚胎内细胞团中分离得到的，可以长久维持对称性自我更新的未分化状态，也可以分化成几乎机体所有类型的细胞。多种基因参与了胚胎干细胞增殖分化的调节。现对胚胎干细胞增殖分化相关基因进行综述。

协和大查房

发热、肝脾大、嗜酸细胞增多

吴欢 葛瑛 刘晓清 邓国华

2008, 28(3):  297-304. 

摘要 ( 268 )  

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