基础医学与临床 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (2): 138-143.
王明玉 宋丽华 宋现让 魏玲 孙桂云 王兴武 谭学芬
Ming-yu WANG, Li-hua SONG, Xian-rang SONG, Ling WEI, Gui-yun SUN, Xing-wu WANG, Xue-fen TAN
摘要: 目的 筛选MDR1沉默的人乳腺癌细胞并比较其生物学特性。方法 采用BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expression System生产表达MDR1基因shRNA的慢病毒载体(Invitrogen公司) ,转导敏感人乳腺癌细胞MCF-7和耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM,杀稻瘟菌素(blasticidin)筛选获得MDR1稳定沉默细胞MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi。定量RT-PCR检测MDR1 mRNA表达,流式细胞术检测P-GP蛋白表达和功能,MTT法检测药物敏感性。结果 经10mg/L blasticidin筛选12d获得MCF-7/RNAi和MCF-7/ADM/RNAi细胞。MCF-7、MCF-7 /RNAi、MCF-7/ADM和MCF-7/ADM /RNAi细胞的MDR1 mRNA相对表达水平分别为1、0.13、17.14和2.01;P-GP表达分别为(1.5±0.3)%、(1.2±0.2)%、(89.4±3.6)%和(16.3±1.9)%;细胞内Rh123的潴留分别为(92.4±3.1)%、(90.6±4.0)%、(13.6±1.6)%、(72.4±2.8)%;IC50值分别为0.90、0.92、19.61和4.04mg/L。结论 应用慢病毒载体稳定沉默MDR1基因可有效逆转人乳腺癌细胞耐药性。