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2011年 第31卷 第1期    刊出日期：2011-01-05

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研究论文

经颅重频磁刺激增强大鼠大脑中动脉梗塞再灌注损伤后神经重塑

徐涛;邢岩;崔丽英

2011, 31(1):  1-5. 

摘要 ( 1595 )   PDF (922KB) ( 594 )  

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目的 通过观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后7d，大鼠神经功能、生长相关蛋白-43(GAP-43)、突触素(SYN)表达的变化，探讨经颅重频磁刺激（rTMS）对缺血性损伤后脑组织可塑性的影响。方法 制作大鼠右侧大脑中动脉梗塞再灌注模型，连续7d给予不同频率和强度的rTMS，同时设立假刺激组和假手术组进行对照。观察大鼠神经功能的变化，并应用免疫组化和Western blot技术检测脑组织GAP-43、SYN的表达。结果 rTMS组大鼠神经功能缺损评分较对照组明显降低，病灶侧脑组织内GAP-43、SYN蛋白水平较对照组显著增高。高频高强rTMS组与其他组差异显著(P<0.05)。结论 连续rTMS可以增强神经重塑作用，促进神经功能恢复。

复发性外阴阴道念珠菌病患者及性伴侣带菌情况分析

宗利丽;王彩丽;曾俊;王玉凤;赵欣;毛婷

2011, 31(1):  6-8. 

摘要 ( 1940 )   PDF (425KB) ( 649 )  

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目的 研究复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）复发相关因素。方法 选择55例RVVC患者以及45位患者性伴侣，取阴道、肛门、口腔及龟头分泌物分离念珠菌，采用ITS1区单链构型多态性（SSCP）分析和大亚基rRNA基因D1/D2区序列分析相结合的方法进行菌种鉴定，应用微卫星CAI位点的SSCP和基因扫描分析相结合的方法进行白色念珠菌的基因型测定。结果 RVVC患者阴道、肛门、口腔及其性伴龟头分泌物念珠菌培养阳性率分别为100.0%(55/55)、61.8%(34/55)、1.8%(1/55)和60.0%(27/45)，各部位念珠菌感染均以白色念珠菌为主，且所占比率无明显差异。同一患者阴道与肛门、阴道与性伴龟头分泌物白色念珠菌基因型符合率分别为86.2%和54.5%；结论 肠道及性伴侣龟头携带的念珠菌可能是RVVC复发重要因素之一。

基于时间序列分析方法的胆囊炎发病率预测

马亮亮;田富鹏

2011, 31(1):  9-12. 

摘要 ( 1774 )   PDF (585KB) ( 787 )  

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目的 探讨时间序列分析方法在时间序列资料中的应用，建立海西州地区胆囊炎发病率的预测模型。方法 在时间序列分析方法理论的基础上，通过时间序列模型对海西州地区的胆囊炎发病率进行实证研究，建立了相应的ARMA模型和ARCH模型并进行预测和评价。结果 ARCH模型的预测结果较ARMA模型理想，适合描述海西州地区胆囊炎发病率的变动趋势。结论 ARMA(4,2)-ARCH(2)模型可作为海西州地区胆囊炎发病率的预测模型。

GnRH-A促进雌兔FSH与LH分泌及卵巢发育的作用

巩转娣;魏锁成;韦敏

2011, 31(1):  13-18. 

摘要 ( 2394 )   PDF (1236KB) ( 767 )  

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目的 探讨GnRH类似物（GnRH-A）对FSH与LH分泌及卵巢发育的影响，及GnRH-A调节生育的机理。方法 24只雌兔均分为EGⅠ、EGⅡ、EG Ⅲ和CG(n=6)，实验组分别于颈背侧皮下注射（0.1、0.1和0.05g /L）1.0mL GnRH-A抗原，EGⅡ和EG Ⅲ于20 d 加强注射1次。ELISA法测定血清FSH和LH含量。于70 d无菌切取卵巢，光镜和电镜观察。结果 40 d时EG-Ⅱ和EG-Ⅲ血清FSH和LH浓度均达到峰值，明显高于EG-Ⅰ和CG的FSH和LH（P＜0.01），且EG-Ⅱ高于EG-Ⅲ（P＜0.05）。EG-Ⅱ和EG-Ⅲ卵巢皮质变厚, 卵泡纵径和横径均增大，且与剂量相关。实验组卵巢卵泡数增加，生长加快。细胞核、线粒体和线粒体嵴变大，细胞质中的皮质颗粒和分泌物增多，透明带和微绒毛变大。结论 GnRH-A能促进FSH和LH的合成及卵巢与卵泡的发育，加强注射效果更明显。

厄罗替尼联合塞来昔布阻断EGFR和COX-2抑制肺癌A549细胞增殖

白小燕;牟晓燕;姜淑娟;王亚丽;刘庆亮

2011, 31(1):  19-24. 

摘要 ( 1800 )   PDF (1235KB) ( 711 )  

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目的 探讨厄罗替尼联合塞来昔布对肺腺癌A549细胞株凋亡和EGFR、COX-2表达的影响。方法 厄罗替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48h后，倒置相差显微镜观察细胞形态；四甲基偶氮唑盐（MTT）测定细胞抑制率；Hoechst33258法和TUNEL法检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期；免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达。结果 厄罗替尼联合塞来昔布，相比单药组A549细胞明显出现大量颗粒和空泡，细胞变圆开始脱落；二者联合作用时抑制作用更强（P<0．05)，厄罗替尼与塞来昔布均能诱导细胞凋亡，联合作用后细胞凋亡率更高（P<0．05),并使细胞发生明显的G1期阻滞（P<0．05)，进一步下调了EGFR和COX-2蛋白的表达（P<0．05)。结论 厄罗替尼与塞来昔布联合应用具有协同介导细胞凋亡，阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径有关。

福辛普利和缬沙坦抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞klotho基因表达下调

林书典;周巧玲;詹锋

2011, 31(1):  25-31. 

摘要 ( 1505 )   PDF (1328KB) ( 614 )  

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目的 探讨福辛普利（Fos）和缬沙坦（Val）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）抑制NRK-52E细胞klotho基因表达的干预作用及klotho与转化生长因子-β1（TGF-β1）的关系。方法 将大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）分为对照组，AngⅡ（10-7mol/L）组，及AngⅡ分别再加Fos（10-5mol/L）组，Val（10-5mol/L）组， 和Fos＋Val组，培养24h后，用反转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测klotho和TGF-β1 mRNA表达；用免疫组织化学法和Western Blot检测klotho和TGF-β1蛋白表达。对klotho和TGF-β1蛋白表达进行直线相关分析。结果 1．AngⅡ诱导NRK-52E中TGF-β1 mRNA表达上调，同时使klotho mRNA表达下调，经Fos或Val或Fos＋Val干预后，TGF-β1 mRNA表达明显受抑制，而klotho mRNA显著上调表达（P＜0.05）。2．Fos，Val和Fos＋Val均明显上调AngⅡ诱导的klotho蛋白低表达（P＜0.05），同时抑制TGF-β1蛋白高表达（P＜0.05）。3． klotho和TGF-β1 蛋白表达呈直线负相关（r=-0.717，P＜0.05）。结论 福辛普利和缬沙坦可上调AngⅡ诱导的klotho基因低表达，抑制TGF-β1高表达，klotho基因表达增强可能与TGF-β1表达下调有关。

小剂量VCR联合Endostar抑制PLA-802细胞系VEGF表达

杨清平;周知;吕波;陶勇;李胜难;罗小红;殷清华

2011, 31(1):  32-36. 

摘要 ( 1713 )   PDF (643KB) ( 687 )  

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目的 探讨小剂量长春新碱（VCR）联合恩度（Endostar，Endo）对横纹肌肉瘤细胞生长的影响及其机制。方法 体外培养PLA-802细胞株，用小剂量Endo、VCR单独或联合处理细胞。用MTT和流式细胞仪检测细胞的生长和细胞周期；用RT-PCR和Western blot 检测药物处理后细胞内VEGF mRNA和蛋白水平；用ELISA检测上清液中VEGF水平。结果 单独应用VCR（0.5和2.0 μg/ml）和单独应用Endo（2.0μg/ml）均能够抑制PLA-802细胞的增殖，并促进细胞的凋亡，抑制细胞内VEGF的表达和生成。而两者联合应用时，上述作用得到明显增强。结论 小剂量VCR与Endo联合应用协同抑制PLA-802细胞中VEGF的生成和表达和诱导细胞凋亡。

2个亨廷顿舞蹈病家系动态突变及mtDNA D环高变区的检测

李新伟;刘建新;黄月丽;陈晓蕾;陈辉;李晓文

2011, 31(1):  37-40. 

摘要 ( 1667 )   PDF (1409KB) ( 698 )  

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目的 探讨mtDNA D环高变区突变与亨廷顿舞蹈病的关系。方法 PCR-DNA测序法检测2个HD家系（CAG）n重复序列、mtDNA D环高变区大片段缺失或插入突变。结果 2家系正常人（CAG）n≤18次，患者n≥40次，mtDNA D环未见大片段缺失和插入。结论 检测IT15基因(CAG)n可准确、快速诊断HD；mtDNA调控区大片段重组可能不是HD发病机制中的重要因素。

microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

文通;魏云峰;王梦洪;汪泱;曾俊义;彭小平;李宾公

2011, 31(1):  41-46. 

摘要 ( 1830 )   PDF (1481KB) ( 768 )  

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目的 研究microRNA-1（miRNA-1）能否诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌样细胞分化。方法 构建大鼠miRNA-1表达载体，分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs，实时定量RT-PCR（qRT-PCR）检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6天后：RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达，免疫荧光检测心肌特异蛋白I（cTnI）的表达。结果90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44；未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后，miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6天后，GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。

高脂血症大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12B的表达

朱顺星;刘海鸥;刘春;王旭;黄晓冬

2011, 31(1):  47-52. 

摘要 ( 1561 )   PDF (1415KB) ( 702 )  

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目的 观察高脂饲料喂养的大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达。方法 模型组和对照组SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后，测定血清总胆固（TC)及甘油三酯（TG)；病理学观察心脏、主动脉和肝脏；用RT-PCR检测心脏、主动脉和肝脏中HSPA12B mRNA水平，用免疫组织化学法检测其蛋白表达。结果 模型组总胆固醇和甘油三酯分别达15.46±4.66、0.69±0.20较对照组明显升高（P<0.05）；病理学观察发现模型组形成高脂性心脏病变及肝脏脂肪变性；模型组心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12B mRNA的表达显著高于对照组（P<0.01）；模型组HSPA12B呈较强阳性表达（P<0.05）。 结论 高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症，并引起心脏、主动脉和肝脏中HSPA12B的表达升高。

DNA修复酶HOGG1在食管鳞癌的表达和临床意义

张翔;胡江文;袁方良;高冲;成静;钱晓彬;吴莺;高大庆

2011, 31(1):  53-57. 

摘要 ( 1587 )   PDF (766KB) ( 584 )  

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目的 探讨食管鳞状上皮癌组织中DNA损伤修复酶HOGG1表达与8-oxoG氧化损伤的关系，及其表达改变的临床意义。方法 免疫组化和western blot检测鳞癌和癌旁组织中HOGG1的表达和8-oxoG氧化损伤，TUNEL试剂盒检测组织的凋亡指数。相关性统计分析鳞癌组织HOGG1低表达与上述两项指标之间的相关性；χ2 检验与秩和检验统计鳞癌组织中HOGG1低表达与临床病理特征之间的关系。 结果 HOGG1在食管鳞癌患者的组织中均有不同程度的表达，并且存在个体差异，鳞癌组织中HOGG1表达明显低于其癌旁组织（P＜0.05），8-oxoG的氧化损伤程度明显高于癌旁组织（P＜0.05），鳞癌组织中HOGG1的低表达与该组织8-oxoG氧化损伤程度、细胞凋亡指数呈负相关，与鳞癌的静脉侵犯、淋巴结转移有关，与患者的年龄、性别、鳞癌组织的病理分化程度无关。结论 HOGG1可作为食管鳞癌术后的检测指标，指导患者术后个体化治疗方案的制定。

浆液性与黏液性卵巢囊腺癌线粒体超微结构及体视学

谭树芬;杨宏英;李树清

2011, 31(1):  58-61. 

摘要 ( 1723 )   PDF (822KB) ( 665 )  

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目的 观察黏液性卵巢囊腺癌（MC）及浆液性卵巢囊腺癌(SC)细胞线粒体超微结构及体视学特点的改变，探讨两种腺癌线粒体体视学改变的临床意义及其可能机制。方法 用电镜观察超微结构，并用体视学检测线粒体的体密度（Vvm）、外膜面密度（Sv，μm－1）、表面积体积比(Rsv, μm－1)及其相互关系。结果 癌变后的卵巢囊腺癌细胞线粒体明显增多，线粒体肿胀、嵴断裂明显。MC细胞Vvm 和Sv分别为0.07 ± 0.06和0.06±0.04，显著低于正常的0.14 ± 0.07和0.09 ± 0 .05（P＜0.05），但线粒体Rsv则明显升高（0.89±0.04，P＜0.05）。SC细胞线粒体Vvm和Sv明显升高（分别为0.27 ± 0.12 和0.12 ±0.06，P＜0.01），而线粒体Rsv则明显降低（0.58±0.49，P＜0.05）。结论 MC与SC的线粒体体视学改变不同，前者以减少为主而后者则以增大为主。

α-adducin G460T和AGT M235T基因多态性与原发性高血压发病风险相关

钟发德;张莉娜;徐进;张月苗;费丽娟;陈东妮

2011, 31(1):  62-67. 

摘要 ( 1801 )   PDF (647KB) ( 712 )  

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目的 探讨α-adducin G460T、AGT M235T基因多态性与宁波汉族人群原发性高血压(EH)的关系。 方法 以社区为基础的病例对照研究，用突变分离聚合酶链反应(MS-PCR)及PCR-RFLP技术分别检测305例EH患者和305例血压正常者的α-adducin G460T、AGT M235T基因多态性，并测定各组人群的生化指标。 结果 α-adducin G460T多态基因型(24.60%、52.78%和22.62% VS 28.53%、48.85%和22.62%)和G、T等位基因频率(50.98%和49.02% VS 52.95%和47.05%)无统计学差异；AGT M235T多态基因型(18.69%、52.46%和28.85% VS 9.51%、41.64%和48.85%，P＜0.01)和M、T等位基因频率(44.92%和55.08% VS 30.33%和69.67%，P＜0.01)；同时分析AGT基因M235T基因型与α-adducin基因G460T基因型联合作用时，它们患高血压方面除与α-adducin GG基因型无协同作用外，与其它基因型都有协同作用(P＜0.05)；携带AGT M235T多态TT基因型的个体发生EH的风险增加2.35倍(95%CI=1.69～3.28, P＜0.01)。结论 AGT M235T基因多态性位点TT基因型可能增加EH发病风险；未发现α-adducin G460T基因多态性位点与EH发病风险有统计相关性。

赖氨大黄酸通过激活JNK诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡

甄永占;林雅军;骆广玲;赵毓芳;高俊玲

2011, 31(1):  68-72. 

摘要 ( 1917 )   PDF (753KB) ( 661 )  

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目的：研究赖氨大黄酸 (RHL)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响，并探讨其作用机理。方法：用MTT法检测细胞增殖；用流式细胞仪检测细胞凋亡，用Western blot 检测凋亡相关蛋白及JNK蛋白与蛋白磷酸化水平。结果：RHL 能有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，并能诱导其凋亡，随药物浓度的增加，细胞凋亡率也逐渐升高；RHL能够激活Caspase-3、Caspase-7和PARP，并激活磷酸化的JNK表达，磷酸化的JNK表达增加在RHL的诱导凋亡中起主要作用。结论：RHL通过激活JNK-Caspase-PARP信号通路抑制HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡，赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的问题，有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。

肝细胞黏附分子诱导肾癌786-0细胞系凋亡

张巧琳;罗春丽;颜令;吴小候

2011, 31(1):  73-77. 

摘要 ( 1575 )   PDF (1145KB) ( 602 )  

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目的 探讨肝细胞黏附分子(HEPACAM)基因转染肾癌细胞对其凋亡的影响。方法 将携带HEPACAM基因的重组质粒转染786-0细胞，RT-PCR鉴定HEPACAM基因在786-0中的表达； Hoechst染色结合荧光显微镜观察细胞形态改变；FCM检测细胞周期及细胞凋亡情况；Western印迹法检测BAX、BCL-2、CYCLIN D1 蛋白表达变化。结果 上调HEPACAM基因表达可诱导786-0细胞凋亡阻止细胞周期于G0/G1期，并可上调BAX及下调BCL-2和CYCLIN D1蛋白水平表达。结论 外源导入HEPACAM基因可诱导肾癌细胞凋亡并阻止细胞周期于G0/G1期。

技术与方法

shRNA表达载体的改建及鉴定

陈娴;谢渊;赵艳;周建奖

2011, 31(1):  78-83. 

摘要 ( 166 )   PDF (904KB) ( 835 )  

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目的 通过改建pSilencer3.1-H1载体快速有效筛选重组shRNA表达载体，并可使线性化载体环化，长期保存。方法 制备含有单一限制性内切酶NotⅠ识别序列的双链DNA插入片段，与BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的shRNA表达载体pSilencer3.1-H1连接，构建载体pSilencer3.1-H1/NotⅠ，再用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pSilencer3.1-H1/NotⅠ，将含靶向目的基因JAK2 siRNA表达框的DNA模板与其连接，构建pSilencer3.1-H1/JAK2 的shRNA表达载体，提取质粒DNA，用NotⅠ进行单酶切，快速选择阳性克隆，选取不能被NotⅠ切开的质粒进行测序鉴定。随后将pSilencer3.1-H1/JAK2转染胃癌细胞株，用Western blot 检测JAK2蛋白的表达。结果 通过测序证实pSilencer3.1-H1 /NotⅠ和含JAK2 siRNA表达框的表达载体成功构建，将其转染胃癌细胞株AGS后，抑制了JAK2蛋白的表达。结论 通过对pSilencer3.1-H1表达载体的改建可以快速有效的筛选shRNA表达载体。

一种HCV靶向性M1GS核酶的构建及其体外活性

张文军;刘碧瑜;周玉珍;林桂先;张欣;李红枝

2011, 31(1):  84-88. 

摘要 ( 1550 )   PDF (758KB) ( 642 )  

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目的 构建对HCV基因组具有特异切割作用的新型靶向性核酶—M1GS。方法 针对HCV基因组的保守区（5ˊUTR）设计并合成一段引导序列，通过PCR扩增直接将该引导序列连接于大肠杆菌核糖核酸酶P的催化亚基（M1 RNA）的3ˊ末端，从而构建一类靶向性M1GS核酶。 结果 体外切割实验表明，所构建的核酶（M1GS-HCV/C67）对HCV 5ˊUTR具有明显的切割作用，切割的位点在靶序列67nt-68nt之间，属于特异性切割。结论 本文构建了一种对HCV 5’UTR具有靶向切割活性的M1GS核酶，为胞内反义效应及动物模型内抗病毒效应的评价提供了实验材料，为新型抗HCV药物的研究奠定了基础。

研究短文

氯吡格雷下调高同型半胱氨酸血症兔主动脉MCP-1及IL-8的表达

夏大梅;姜雅秋;郭晓林

2011, 31(1):  89-90. 

摘要 ( 1365 )   PDF (623KB) ( 679 )  

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阿托伐他汀对肺纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1表达的影响

刘斌;张玉华;魏路清;李振华

2011, 31(1):  91-92. 

摘要 ( 1360 )   PDF (342KB) ( 604 )  

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短篇综述

miRNA与缺血性疾病中的血管新生

吴珏;刘芬;汪泱

2011, 31(1):  93-96. 

摘要 ( 1620 )   PDF (500KB) ( 788 )  

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MicroRNAs (miRNAs)是存在于真核生物中一类长度约为20～24个nt的非编码小分子单链RNA,可调控多种基因的表达。研究发现, 缺血性损伤组织中一系列的miRNAs表达发生了明显变化，且其改变可显著影响缺血组织的血管新生。

TLR接头蛋白研究进展

董秋萍;李涛;熊自忠

2011, 31(1):  97-100. 

摘要 ( 193 )   PDF (492KB) ( 1341 )  

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Toll样受体(TLR)是近年来备受关注的一类病原体识别受体，能选择性的识别侵入机体的病原微生物所携带的病原相关分子模式(PAMPs)，继而激活信号级联放大产生免疫应答。目前研究发现，TLR识别相应配体后，由一类包含TLR结构域的接头蛋白MYD88、MAL、TRIF、TRAM和SARM，通过MYD88依赖途径或MYD88非依赖/TRIF途径进行信号转导。

Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶与临床

王红晖;万玉民;李莹辉

2011, 31(1):  101-103. 

摘要 ( 1663 )   PDF (361KB) ( 574 )  

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Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶及其相互作用分子在与临床相关的生物学过程中发挥着重要作用。近年来发现，Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶与临床心血管疾病、呼吸系统疾病和骨软骨疾病的发生，肿瘤进展以及药学研究等密切相关。本文就Ⅱ类HDACs与临床的关系进行了综述。

肿瘤恶病质的机制及可能的治疗

周开国;何桂珍

2011, 31(1):  104-107. 

摘要 ( 2145 )   PDF (563KB) ( 1205 )  

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恶病质是宿主和肿瘤相互作用的结果，主要表现为短期内消瘦，营养不良等。宿主和肿瘤分泌的炎症因子和恶病质特异因子是引起恶病质的主要原因。单纯的高能饮食不能改善病情，近来应用免疫营养、传统医学和药物干预等防治手段能减轻恶病质体重下降和延长生存期，有可喜的应用前景。

协和大查房

发热3个月，少语、肌张力增高2个月

严健华;郑可;沙悦;曾学军

2011, 31(1):  108-112. 

摘要 ( 1660 )   PDF (834KB) ( 579 )  

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