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2010年 第30卷 第12期    刊出日期：2010-12-05

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研究论文

脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞EBV-LMP1的表达

柯霞;杨玉成;洪苏玲

2010, 30(12):  1245-1251. 

摘要 ( 1728 )   PDF (769KB) ( 1013 )  

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目的 探讨l 0- 23脱氧核酶(1 0-23DR z)对鼻咽癌生长的抑制作用。 方法 设计合成针对EBV-LMP1的l0-23DRz，并对其进行硫代磷酸化修饰，同时针对该位点设计突变型DR z和反义寡核苷酸，经脂质体转染C666-1细胞中观察其对LMP1基因表达的抑制效应；建立裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤，瘤体内注射脱氧核酶及其类似物，观察其对LMP1基因及肿瘤生长的抑制效应。 结果 有效转染后，脱氧核酶在细胞内抑制LMP1基因表达；成功建立裸鼠移植瘤模型后，脱氧核酶能高效抑制LMP1基因表达，并能抑制肿瘤生长，其作用较突变型脱氧核酶和反义寡核苷酸强（P<0.05）。 结论 脱氧核酶在鼻咽癌细胞中及移植瘤模型中都能高效抑制LMP1的表达，可能成为一种高度特异性的、高效的基因治疗剂。

黄芩苷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖和新生内膜肥厚

呼海娟;韩梅;孙荣华;刘彬;温进坤

2010, 30(12):  1252-1256. 

摘要 ( 1853 )   PDF (699KB) ( 976 )  

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目的 探讨黄芩苷对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和内皮损伤诱导的新生内膜形成的影响及其机制。方法 采用细胞培养、MTT分析、Western blot及免疫组织化学等方法研究黄芩苷的作用机制。结果 黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制血小板源生长因子（PDGF）诱导的VSMC增殖，降低增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化。整体实验显示，黄芩苷可预防球囊损伤诱导的血管新生内膜肥厚，明显降低内膜/中膜面积（I/M）比值（P<0.01）；PCNA、细胞间黏附分子（ICAM-1）和血管黏附分子（VCAM-1）蛋白的表达也明显减少（P<0.01）。结论 黄芩苷通过抑制VSMC增殖而阻止球囊损伤诱导的大鼠血管内膜增生。

Nrf2在EGCG诱导结肠肿瘤组织UGT1A及其同工酶表达中的作用

袁俊华;李延青;杨晓云

2010, 30(12):  1257-1262. 

摘要 ( 1962 )   PDF (825KB) ( 1158 )  

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目的 探讨核因子E2p45相关因子2（Nrf2）在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对结肠原位种植肿瘤中诱导尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)及其同工酶表达中的作用机制。方法 运用RNAi技术建立Nrf2基因低表达的结肠癌细胞系HT-29，常规培养至对数生长期，在BALB/cA nude小鼠中建立皮下肿瘤模型，用皮下肿瘤构建裸鼠结肠原位肿瘤模型。分别用低、中、高剂量EGCG作用4周，实验结束后，剥离结肠原位肿瘤组织，用免疫组化检测其中Nrf2蛋白表达和RT-PCR法检测Nrf2、UGT1A、UGT1A8和UGT1A10基因的mRNA表达水平。结果 与对照组比较，不同剂量EGCG组的动物体重、对肿瘤生长的抑制率和Nrf2的蛋白水平均无显著性差异，Nrf2、UGT1A、UGT1A8 和 UGT1A10的mRNA水平无显著性差异。结论 Nrf2在EGCG诱导裸鼠结肠原位种植肿瘤UGT1A及其同工酶的表达中发挥着重要作用。

人诱导性多能干细胞定向分化为神经干细胞的实验研究

冯年花;谢安;娄远蕾;阮琼芳;郭菲;汪泱

2010, 30(12):  1263-1267. 

摘要 ( 2040 )   PDF (788KB) ( 1488 )  

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目的 观察人诱导性多能干细胞（iPS细胞）定向分化为神经干细胞（NSCs）的潜能。方法 用维甲酸（RA）诱导人iPS细胞向NSCs分化。倒置显微镜下观察iPS细胞的形态变化，RT-PCR检测NANOG, OCT4, SOX2的表达；免疫组织化学方法检测NESTIN、SOX2、β-TUBULIN Ш和GFAP的表达。结果RA诱导后第4天，贴壁的拟胚体出现了早期神经祖细胞特有的神经管样结构并不断增多，细胞表达神经巢蛋白NESTIN，而对照组未观察到神经管样结构。神经管样结构内的细胞能分化为β-TUBULIN Ш阳性的神经元，但GFAP阳性的星形胶质细胞少见。结论 人iPS细胞具有定向分化为NSCs的潜能，并能模拟神经发育过程。

P73α增加骨髓间充质干细胞对DNA损伤物质顺铂的敏感性

梁伟;路春华;李静;赵春华;章静波

2010, 30(12):  1268-1373. 

摘要 ( 1828 )   PDF (856KB) ( 1059 )  

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目的 探讨体外培养的骨髓间充质干细胞中P73α蛋白与细胞抗DNA损伤特性之间的关系。方法 XTT实验检测外源过表达P73α蛋白骨髓间充质干细胞的损伤敏感性和损伤诱导的凋亡。结果 反转录病毒能介导hMSCs中外源性P73α的表达，过表达P73α导致细胞对化疗药物顺铂敏感性的显著增加，P73α转染细胞中增加的化疗敏感性是由于细胞凋亡的增加。此外， cisplatin和P73α能共同活化细胞中促凋亡因子Bax和P21。结论 P73蛋白是人骨髓间充质干细胞化疗敏感性的重要决定因子。

国内首例Costello 综合征患儿HRAS基因突变分析

张寒冰;邱正庆;王薇;赵时敏;仇佳晶;魏珉

2010, 30(12):  1274-1277. 

摘要 ( 2586 )   PDF (750KB) ( 1175 )  

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目的 通过对1例临床疑似Costello 综合征的患者进行HRAS基因分析并确诊。方法 提取患者及其父母的基因组DNA，PCR扩增HRAS基因的第2～5个编码外显子并直接测序。Pubmed检索Costello综合征的临床表现、实验室检查和治疗干预方法。结果 在HRAS基因第2外显子34位碱基序列处发现一个已知错义突变c.34G>A，p.Gly12Ser。患者父母DNA未检测到相同突变。结论 Costello 综合征是一种罕见的常染色体显性遗传病，患者有特征性面容、极度喂养困难史和生长发育落后等，确诊有赖于HRAS基因突变分析。

细胞因子信号传导抑制蛋白－1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

孙琦;向若兰;杨燕丽;冯凯;张文龙;杨国华;宋爱玲

2010, 30(12):  1278-1283. 

摘要 ( 1796 )   PDF (653KB) ( 1030 )  

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目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞，探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因，构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中，构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h，RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后，未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后，未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。

胃癌及其癌前病变相关新基因GP1的生物信息学分析

郑洁;王丽娜;于恩燕;吕世军

2010, 30(12):  1284-1287. 

摘要 ( 1835 )   PDF (330KB) ( 883 )  

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目的 利用生物信息学方法对新克隆的GP1的基因和蛋白序列进行分析，推测其在胃癌发生、发展过程中的作用。方法 以人类基因组数据库为基础，利用Megablast工具和SAGE数据库对GP1进行染色体定位和组织表达分布分析；BLAST程序进行GP1的基因结构分析和相似序列搜索；ORF finder程序对GP1编码蛋白进行序列预测；应用ProParam、TMPRED等软件分析GP1编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位及结构域等信息。结果 GP1基因全长1362bp，其最长开放读码框为801bp，编码267个氨基酸，相似性搜索发现GP1基因片段与人AF083246基因片段具有很高的相似性(100％)。在GP1蛋白上有一个与真核起始因子5C（eIF5C）具有低度同源性的结构域。SAGE结果显示GP1在多种组织中都有表达。RT-PCR验证了基因的组织表达谱。结论 生物信息学的分析表明GP1是一个胃癌相关基因，可能在胃癌的发生发展过程中起到一定的作用。

脂联素基因SNP-11377和SNP-4522单倍型与代谢综合征相关

李奕平;杨曼;熊煜欣;李显丽;徐波;姚宇峰;张瑛

2010, 30(12):  1288-1292. 

摘要 ( 1644 )   PDF (400KB) ( 966 )  

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目的 探讨昆明地区汉族脂联素基因多态性与代谢综合征的相关性。 方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测脂联素基因SNP-11391、SNP-11377、SNP-4522、SNP+45和SNP+331的基因型，分析以上5个多态性位点与代谢综合征的相关性。 结果 ⑴脂联素基因SNP-11391和SNP+331不是昆明地区汉族的多态性位点；⑵在代谢综合征组中，SNP-11377G－SNP-4522T单倍型频率低于对照组（P﹤0.05），而SNP-11377C－SNP-4522T和SNP-11377G－SNP-4522C单倍型频率高于对照组（P﹤0.05和P﹤0.01）。 结论 在昆明地区汉族群体中，SNP-11377G－SNP-4522T单倍型可能降低患代谢综合征风险，而SNP-11377C－SNP-4522T和SNP-11377G－SNP-4522C单倍型可能增高患代谢综合征风险。

辛伐他汀降低脂质肾损害大鼠肾组织中骨调素表达

陈利群;甘华;吕智美

2010, 30(12):  1293-1298. 

摘要 ( 1752 )   PDF (769KB) ( 899 )  

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目的 观察高脂血症肾损害大鼠肾组织中骨调素（OPN）和单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）表达变化及辛伐他汀对其表达的影响。方法 将雄性wistar大鼠随机分为对照组，高脂组，辛伐他汀治疗组，每组10只。观察12周。实验监测尿蛋白量、血脂、肾功能及肾组织病理学改变；免疫组化技术检测肾组织MCP-1表达，用RT-PCR、免疫印迹检测OPN mRNA和蛋白表达。 结果 实验结束时，高脂模型组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白显著高于对照组（P＜0.01）；辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白明显低于高脂组（P＜0.01），而 HDL-C则明显高于高脂组（P＜0.01）；高脂组大鼠肾小球系膜细胞增生，系膜区增宽，小管间质炎性细胞浸润，而辛伐他汀组病理改变较高脂组有所减轻；高脂组和辛伐他汀组大鼠肾组织中MCP-1、OPN mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.01）；而辛伐他汀组大鼠肾组织中上述指标的表达较高脂组有明显下调（P＜0.05）；肾组织中OPN蛋白表达与其MCP-1表达和尿蛋白量呈高度正相关。结论 辛伐他汀可能通过降低大鼠肾组织中OPN和MCP-1的表达，从而减轻小管间质巨噬细胞浸润，从而降低了高脂血症肾损害。

云南乳腺肿瘤发生与线粒体DNA控制区体细胞突变的相关性

杨越;贺军栋;郭学君;车艳华;张勇;孔庆鹏;张亚平;李立

2010, 30(12):  1299-1302. 

摘要 ( 1636 )   PDF (991KB) ( 902 )  

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目的 研究线粒体DNA（mtDNA）控制区（CR）中体细胞突变（SM）与云南乳腺肿瘤发生发展的相关性。方法 对来自云南昆明的28例恶性乳腺肿瘤患者的肿瘤组织及外周血和13例良性乳腺肿瘤患者mtDNA控制区中的第一高变区（HVS-I）及第二高变区（HVS-II）区段进行PCR扩增及DNA测序，比较其突变分布差异。结果 28例恶性乳腺肿瘤患者mtDNA的控制区HVS-I、HVS-II共发现8个体细胞突变，突变频率为28.6%，包括309+CC（样本BC6）、309+C（样本BC20、样本BC26）、279Y（样本BC16）、297R（样本BC16）、214R（样本BC21）、190Y（样本BC61）和204Y（样本BC64）；而13例良性乳腺肿瘤患者中则发现2个体细胞突变，突变频率为15.4%，包括16292Y（样本BCA10）和309+CC（样本BCA12）。结论 mtDNA控制区的体细胞突变可能在云南乳腺肿瘤的发生发展中起重要作用。

SARS-CoV相关重组B细胞线性多表位肽的表达及鉴定

周建华;曾玉红;崔莲仙;康宁;何维

2010, 30(12):  1303-1308. 

摘要 ( 1842 )   PDF (446KB) ( 989 )  

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目的 利用已筛选到的线性B细胞表位组合得到重组多表位肽，并验证其用作表位肽疫苗的可行性。方法 用搭桥PCR和人工合成DNA方法获得多表位肽编码基因片段，构建原核表达载体表达多表位肽。ELISA法测其与SARS病人血清的交叉反应性及其用于免疫动物获得的多克隆抗血清的效价。Western blot检测抗原抗体结合特异性。中和试验检测中和SARS-CoV效果。结果 成功获得PEP1和PEP2编码基因片段并表达重组多表位肽rPEP1和rPEP2。纯化的rPEP1和rPEP2与病人血清的交叉反应率分别为88.7%和97.2%；与免疫动物血清具有结合特异性，结合效价分别为1×106和5×105；中和SARS-CoV的效率分别为70%和80%。结论 成功获得交叉反应性好、免疫原性强的重组多表位肽rPEP1和rPEP2，为制备多表位肽疫苗提供了实验依据。

慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF的表达升高

段玉香;石秋艳;姜进克

2010, 30(12):  1309-1312. 

摘要 ( 1813 )   PDF (519KB) ( 995 )  

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目的　观察慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF蛋白表达情况，探讨慢性酒精中毒脑损伤可能的发病机制。方法　清洁级8周龄雄性SD大鼠45只，随机分为对照组和酒精组，采用逐步增加浓度自由饮方法建立慢性酒精中毒大鼠动物模型。应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能，采用HE染色法观察海马神经元病理形态学改变，TUNEL法、免疫组化法检测凋亡神经元数量及caspase-8、AIF蛋白的表达。结果　酒精组可见海马神经元数目缺失及细胞变性和损伤，其凋亡神经元数和caspase-8、AIF蛋白表达阳性细胞数均高于对照组（p<0.01）。结论　慢性酒精中毒大鼠海马存在明显神经元凋亡，伴有caspase-8、AIF蛋白表达增加，通过胱冬酶(caspase)依赖性和非依赖性两种通路发生细胞凋亡可能是其病理基础之一。

静脉移植人脐血细胞促进家兔急性心肌梗死血管再生

潘玮;周波;汪弢;卿丽琼;张国刚;杨天伦;余国龙

2010, 30(12):  1313-1317. 

摘要 ( 1747 )   PDF (608KB) ( 832 )  

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目的 探讨静脉移植人脐血细胞(HUCBCs)对家兔急性心肌梗死(AMI)血管再生的影响。方法 家兔随机分为，(1)假手术组:冠状动脉左前降支穿线不结扎；(2)模型组及(3)细胞移植组:结扎左前降支建立急性心肌梗死模型，各组均 15只。造模后24h，细胞移植组经耳缘静脉注入含2×107个人脐血单个核细胞的细胞悬液0.5mL；假手术组、模型组同法注入等量生理盐水。移植后1、2和4周超声检测心功能；免疫组化检测心肌BrdU阳性细胞及VIII因子染色检测血管新生；RT-PCR检测心肌组织VEGFmRNA表达。结果 移植组心功能明显改善，左室短轴缩短率及左室射血分数均明显升高(P＜0.05)；移植组心梗区毛细血管密度显著增加(P＜0.01)，BrdU阳性细胞分布于其梗死周边区域；移植后心肌组织VEGFmRNA表达显著上调(P＜0.01)。结论 促进血管再生是脐血细胞移植治疗急性心肌梗死的主要机制之一。

A549细胞和Hep-2细胞表面糖链类型鉴定及其与H5N1型禽流感病毒结合的特性

黄丽;郭显蓉;屠宴会;宋德禄;杨浩;尹洪超

2010, 30(12):  1318-1324. 

摘要 ( 1804 )   PDF (1247KB) ( 903 )  

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目的 研究H5N1病毒对A549细胞和Hep-2细胞的黏附和进入特性。方法 用凝集素染色技术和流式细胞术检测A549细胞和Hep-2细胞表面SAa2,3Gal 和SAa2,6Gal的表达；用间接免疫荧光法检测H5N1病毒进入细胞情况；用Western blot法分析病毒进入A549细胞和Hep-2细胞的效率。结果 A549细胞和Hep-2细胞表面有大量SAa2,3Gal，但SAa2,6Gal含量却很少。Hep-2细胞表面SAa2,3Gal受体的表达水平高于A549细胞。H5N1病毒能够进入A549细胞和Hep-2细胞，而且H5N1病毒对A549细胞的亲嗜性更强。与A549细胞相比，Hep-2细胞对H5N1病毒诱导的细胞死亡更敏感。结论 细胞表面唾液酸-a2,3-半乳糖的表达与H5N1病毒的黏附一致。然而，唾液酸受体可能不是介导病毒进入的唯一因素。

前列腺癌空间分布特点的临床分析

严维刚;李汉忠;周毅;崔全才

2010, 30(12):  1325-1328. 

摘要 ( 1717 )   PDF (341KB) ( 907 )  

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目的 通过定位模板经直肠超声引导下经会阴11区穿刺活检，探讨前列腺癌在前列腺组织中的空间分布特点。 方法 2004年5月～2007年12月，215例前列腺癌患者通过11区经会阴前列腺穿刺活检证实，年龄37～87岁（平均71.8岁），PSA1.2～100ng/mL（中位数21.0 ng/mL），分析其在不同前列腺特异性抗原（PSA）水平前列腺癌病灶在11个区域及前后分布特点。结果 110例PSA>20ng/mL前列腺癌患者第1～10区平均检出率为61.2％和第11区的66.4％，无差异。105例PSA ≤20ng/mL患者第1～10区检出率平均值为35.7％，显著低于第11区的47.6%（P<0.001）。PSA>20ng/mL者前列腺前半部分和后半部分的检出率分别为96.5%和90.9%， PSA≤20ng/mL者检出率均为75.2%，无差异。结论 前列腺癌病灶在前后分布上无显著性区别。在PSA<20ng/mL前列腺癌患者，尖部发生率显著高于其他部位。

胃肠间质瘤患者中Imatinib血药浓度与治疗疗效的相关性研究

孙乃萍;李健;高静;沈琳

2010, 30(12):  1329-1333. 

摘要 ( 1593 )   PDF (365KB) ( 924 )  

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目的 检测中国晚期胃肠间质瘤(GIST)患者中伊马替尼(Imatinib)血药浓度，并分析血药浓度与治疗疗效的相关性。方法 收集112例接受Imatinib治疗超过28d的GIST患者的117份血浆样本，用HPLC-MS/MS法检测血浆中Imatinib浓度。分析Imatinib血药浓度与治疗疗效的相关性。结果 高剂量组(600 mg/d)患者的血药浓度较低剂量组(400 mg/d)明显升高(P<0.001)。服药时间为1～2年患者的血药浓度(平均值1268 ng/mL)较服药时间小于1年患者(平均值1845 ng/mL)明显降低(P＜0.05)。随着血药浓度的增加有效率也随之增加：血药浓度低、中及高水平组的有效率分别为50%、67.5%与66.7%。结论 Imatinib血药浓度与服药剂量及服药时间明显相关；Imatinib治疗有效率随着血药浓度的增高呈增加趋势。

研究短文

链格孢霉过敏原提取液的致敏蛋白组分

曹乃清;张宏誉

2010, 30(12):  1334-1335. 

摘要 ( 175 )   PDF (307KB) ( 764 )  

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一氧化氮减轻大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤

孔小燕;门秀丽;董淑云;李宏杰;赵利军;段国贤;张连元

2010, 30(12):  1336-1337. 

摘要 ( 151 )   PDF (265KB) ( 768 )  

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短篇综述

侵袭性念珠菌病实验室诊断现状的分析与思考

胡冬梅;车小燕

2010, 30(12):  1338-1341. 

摘要 ( 182 )   PDF (303KB) ( 844 )  

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侵袭性念珠菌病是第四位医院血源感染性疾病，迄今缺乏理想的诊断方法。尽管以念珠菌抗原、抗体和核酸为靶标的检测方法的研究取得了很大的进展，但由于敏感性、特异性、标准化以及实验设计等原因，难以解决临床实际问题。高度保守、含量丰富的诊断标志物可能是解决这一问题的良好出路。

Wnt/β-catenin信号途径与肾脏疾病

闫喆;段惠军

2010, 30(12):  1342-1345. 

摘要 ( 195 )   PDF (379KB) ( 918 )  

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Wnt/β-catenin信号途径参与了肾脏发育及肾肿瘤、肾纤维化、多囊肾、急性肾衰竭、糖尿病肾病等肾脏病的发病。该途径控制输尿管芽的发育并调节间充质细胞的肾形态发生过程；其表达异常参与了多种肾肿瘤的发病；Wnt/β-catenin信号的异常激活诱导肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞等肾脏固有细胞增殖或凋亡，导致多种慢性肾脏病的发生与发展。因而，Wnt/β-catenin信号途径在肾脏发育与疾病中的作用日益受到重视。

miRNAs与肝细胞癌的研究进展

李艳春;文继舫

2010, 30(12):  1346-1348. 

摘要 ( 146 )   PDF (270KB) ( 1145 )  

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最近发现一类小分子物质——microRNAs在肝细胞癌中异常表达，其中部分已被证实与肝细胞癌的发生发展密切有关。有些microRNAs与肝细胞癌的分型有关，提示，microRNAs在肝细胞癌的诊断和预后判断中有着潜在的作用；有些microRNAs被证实为肝细胞癌发生的独立危险因素，为临床早期筛查和风险评估提供了分子标记，也为个体化治疗提供了分子依据。

干扰肌动蛋白细胞骨架对NF-κB活性影响的研究进展

郭维康;刘文虎;张东亮

2010, 30(12):  1349-1351. 

摘要 ( 174 )   PDF (281KB) ( 1054 )  

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本文介绍了肌动蛋白细胞骨架的构成、功能以及NF-κB信号传导通路的激活途径，重点阐述了通过改变肌动蛋白细胞骨架途径来影响NF-κB活性的机制。

协和大查房

间断发热5月

姜楠;郭涛

2010, 30(12):  1352-1356. 

摘要 ( 124 )   PDF (697KB) ( 982 )  

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