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2011年 第31卷 第11期    刊出日期：2011-11-05

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研究论文

ACE、AGT基因联合多态性与高血压合并脑梗塞的相关性

杜明艳 丁文军 杜会山 封靖

2011, 31(11):  1189-1193. 

摘要 ( 1708 )   PDF (492KB) ( 1129 )  

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目的 探讨北京地区汉族人群血管紧张素转化酶（ACE）基因插入/缺失（I/D）多态性与血管紧张素原（AGT）基因CD235Met-Thr变异(M235T)与高血压合并脑梗塞发生的关系。方法 分别用PCR法、突变基因分离聚合酶链反应（MS-PCR）法检测664例高血压合并脑梗塞患者(CI)、678例单纯高血压患者(EH)和716例对照者(C)的ACE基因I/D多态性及AGT基因M235T多态性，分析两个基因多态性分布与高血压合并脑梗塞发病的相关性。结果 CI组ACE-DD和AGT-TT基因型频率（分别为0.309和0.643）均显著高于C组（分别为0.203和0.543，P<0.001）和EH组（分别为0.217和0.569，P<0.01）。CI组与C组比较，ACE-DD、AGT-TT联合基因型OR值（2.547，95%CI : 1.919~3.382）明显高于ACE-DD单基因型（1.759，95%CI : 1.376~2.248）和AGT-TT单基因型（1.515, 95%CI : 1.220~1.880)。结论ACE-DD和AGT-TT基因型与北京地区汉族人群单纯高血压发病无相关性，但与高血压合并脑梗塞发病显著相关，并且ACE-DD和AGT-TT联合基因型是高血压合并脑梗塞发病的危险因素。

脑梗死后骨髓极小胚胎样干细胞的动员及募集作用

郭慧娟 郑敏 王健

2011, 31(11):  1194-1199. 

摘要 ( 1601 )   PDF (1298KB) ( 912 )  

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摘要：目的 探讨G-GSF和AMD3100对小鼠急性脑梗死后骨髓来源的极小胚胎样干细胞（VSEL-SCs）的动员、募集及其作用机制。方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，腹腔内分别注射G-GSF、CXCR4特异性拮抗剂(AMD3100)及G-CSF联合AMD3100，观察术后神经功能评分，流式细胞分析计数各组动员到外周血中的VSEL-SCs数量；ELISA方法分析术后血浆及缺血侧脑组织中SDF-1水平的动态变化，免疫组化观察缺血半暗带的SDF-l阳性细胞。结果 术后神经功能评分，与对照组相比，G-CSF组评分明显降低（P<0.05），AMD3100组无统计学意义；各组动员到外周血的VSEL-SCs含量均高于对照组，具有统计学意义；血浆SDF-1的浓度，G-CSF组在72h、108h时高于对照组(P<0.05），但在24h、72h、108h时均低于AMD3100组和G-CSF+AMD3100组（P<0.05），血浆SDF-1浓度水平与动员到外周血的VSELs数量成正相关；脑组织的SDF-1浓度，G-CSF组、G-CSF+AMD3100组均高于对照组（P<0.05），AMD3100组与对照组相比无统计学意义；脑组织免疫组化中，G-CSF组和G-CSF+AMD3100组SDF-1阳性细胞多于对照组。结论 G-GSF和AMD3100能使大量的VSEL-SCs从骨髓动员到外周血中，G-CSF对缺血脑组织的保护作用，可能在于能够使缺血半暗带的SDF-1表达增加，并通过CXCR4/SDF-1轴的趋化作用，使募集到梗死区域的CXCR4+细胞增多来实现的。

阿托伐他汀干预减轻缺血复合冷应激诱导的大鼠心肌损伤

黄茶花 谢遥 黄晓 鲍晓明 王耀晟 程晓曙

2011, 31(11):  1200-1204. 

摘要 ( 1197 )   PDF (448KB) ( 659 )  

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摘要：目的 分析缺血复合冷应激对大鼠心肌的影响，探讨阿托伐他汀干预对这种复合应激下心肌的作用及可能机制。方法 以永久性左冠状动脉前降支结扎术+4℃冷刺激（8小时/天，4天）建立心肌缺血复合冷应激大鼠模型，复合应激前3天及后4天给以阿托伐他汀灌胃（20mg.kg-1.d-1）。超声心动图评价心功能，TTC染色法测定心肌梗死面积，western blotting法检测心肌p-PI3K、p-GSK3β、Bim、Caspase3蛋白表达。结果 心肌缺血复合冷应激使心功能恶化、梗死面积增大(P<0.01)；阿托伐他汀干预后心功能改善、梗死面积缩小(P<0.01), p-PI3K、p-GSK3β表达上调(P<0.01)，Bim、Caspase3表达下降(P<0.01)。结论 心肌缺血复合冷应激加重心肌损伤，阿托伐他汀干预能部分减弱此作用，其机制可能与激活PI3K/Akt/GSK3β通路及下调Bim表达有关。

骨髓间充质干细胞增殖及分化过程中Notch信号的表达变化

牛萍

2011, 31(11):  1205-1209. 

摘要 ( 1237 )   PDF (932KB) ( 771 )  

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目的　研究Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖与分化的调控作用。方法　用密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞，观察其增殖及传代情况，并进行成骨、成软骨及成心肌细胞诱导,Western blot检测细胞增殖及分化过程中Notch信号蛋白的表达。结果　骨髓间充质干细胞呈梭形、旋涡样生长，增殖及传代能力强，可在体外形成钙结节，分化为软骨细胞，免疫组化示心肌细胞标志物的表达。Western blot示在增殖过程中可见Notch信号蛋白的表达，为1.0±0.13,当分化为骨细胞及心肌细胞时，其表达上调，分别为1.2±0.14及 1.7±0.17，与增殖的干细胞相比，有明显差异(*P <0.05)。结论　Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖及分化起重要的调控作用。

体外扩增γδ T细胞的肿瘤组织趋向性

康宁 殷珊珊 汤龙 崔莲仙 何维

2011, 31(11):  1210-1216. 

摘要 ( 1318 )   PDF (1211KB) ( 717 )  

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摘要 目的 旨在考察体外扩增的γδ T细胞向结直肠癌细胞迁移的能力。方法 采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），并利用固相化抗T细胞受体（T cell receptor，TCR）γδ抗体进行两周的体外扩增。对扩增的γδ T进行免疫荧光染色和流式细胞仪分析或流式细胞仪分选。采用Bioplex 200流体芯片系统分析细胞因子和趋化因子的表达情况。采用transwell小室进行趋化试验。结果 体外扩增的γδ T细胞主要表达CCR5和CXCR3两种趋化因子受体。四种结直肠癌细胞系和十种结直肠癌肿瘤组织中存在CCR5和CXCR3配体的表达。体外扩增的γδ T细胞在TCR激活的情况下可以大量产生Th1和Th2型细胞因子，进一步募集γδ T细胞。特别是其产生的干扰素γ（Interferon γ，IFN-γ）能够提高结直肠癌细胞CXCR3配体的表达量，从而进一步促进γδ T细胞的趋近。结论 我们的研究结果为γδ T细胞过继免疫治疗结直肠癌提供了重要指征。

心肌锚定重复序列蛋白基因心脏特异敲除小鼠模型构建与鉴定

许家林 李艳凤 朱大海

2011, 31(11):  1217-1222. 

摘要 ( 1438 )   PDF (911KB) ( 804 )  

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摘要: 目的 构建心肌锚定重复序列蛋白（CARP）基因心脏特异敲除小鼠模型，为研究CARP基因与心脏疾病奠定基础。方法 构建CARP基因条件打靶载体PL253-CARP-LoxP电转入小鼠胚胎干细胞（ES）细胞，G418和GANC药物筛选得到阳性细胞克隆，Southern blot确定CARP条件打靶载体转染成功。胚胎注射阳性克隆ES细胞入小鼠囊胚，获得嵌合体小鼠与心脏特异启动子α-MHC调节Cre小鼠（α-MHC-Cre）杂交，得到CARP基因心脏特异敲除小鼠（CARP-KO）。结果 基因型鉴定获得6只嵌合体小鼠，与α-MHC-Cre小鼠杂交获得CARP-KO小鼠，半定量PCR和Western blot确定CARP基因在CARP-KO小鼠心脏缺失。该小鼠早期胚胎发育和个体生长、心脏发育正常，但心脏肥厚标志基因β-MHC和ANF显著升高。结论：成功构建CARP基因心脏特异敲除小鼠，该基因缺失对小鼠胚胎早期发育、生长和心脏发育没有显著影响。

Sirt1增强人慢性粒系白血病K562细胞耐药性

毛蓓蓓 宋崴 吕湘 陈厚早 刘德培

2011, 31(11):  1223-1228. 

摘要 ( 1878 )   PDF (857KB) ( 823 )  

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目的 研究Ⅲ类去乙酰化酶Sirt1对人慢性粒系白血病K562细胞耐药性的影响及其机制。方法 分别将酶活性缺失突变型Sirt1（H363Y）和Sirt1 shRNA的表达质粒转染K562细胞后，用G418筛选出稳定表达酶活性缺失突变型Sirt1或 Sirt1 shRNA的K562细胞。用H2O2和 etoposide处理筛选出来的稳定细胞株，Western Blot检测凋亡标志物caspase3的剪切及Bax的表达，同时检测DNA损伤的标志物H2A.X磷酸化；在MCF-7和293A中过表达野生型Sirt1，检测H2O2和 etoposide处理后H2A.X的磷酸化。结果 在K562细胞中，酶活性缺失突变型Sirt1（H363Y）的表达和Sirt1的干扰均能促进H2O2和 etoposide诱导的caspase3的剪切及Bax的表达并同时显著抑制H2O2和 etoposide诱导的H2A.X磷酸化；在MCF-7和293A细胞中，野生型Sirt1的过表达能明显增强H2O2和 etoposide诱导的H2A.X的磷酸化。结论 Sirt1能保护K562细胞对抗DNA损伤药物诱导的凋亡，增强DNA损伤修复的信号。

脑缺血/再灌注致神经元退行性变进程中自由基水平和SOD2表达相关

袁野 杨俊卿 周岐新

2011, 31(11):  1229-1233. 

摘要 ( 1242 )   PDF (622KB) ( 643 )  

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目的 探讨脑缺血/再灌注(I/R)致神经元退行性变所涉及的自由基和SOD2表达的时程变化及其相互关系。方法 抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20 min建立I/R损伤模型。组织学检测神经元损伤；Morris水迷宫检测学习记忆能力；分光光度计法检测SOD2活性和丙二醛(MDA)含量；Western blot检测SOD2蛋白表达。结果 与假手术组相比，I/R组小鼠学习记忆能力显著降低，海马MDA含量进行性显著升高（P<0.05）；I/R术后5、15、30和60 d组海马SOD2活性（14.69+2.49 U/mg.pro，14.15+2.41 U/mg.pro，15.07+2.67 U/mg.pro，15.55+2.64 U/mg.pro）和蛋白表达（9.20+1.23，5.40+1.03，4.90+0.92，5.60+0.59）均显著低于假手术组（P<0.05）；海马出现进行性神经元核固缩加重和神经元丢失。结论 I/R致小鼠神经元退行性变与SOD2蛋白表达和活性保持低水平状态而氧化应激进行性增强有关。

佳木斯市医疗机构全面禁烟政策的实施状况调查

胡大伟 万霞

2011, 31(11):  1234-1237. 

摘要 ( 1055 )   PDF (428KB) ( 619 )  

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目的 研究佳木斯市医疗机构全面禁止吸烟政策的落实情况。方法 通过多阶段抽样的方法，抽取佳木斯市14个医疗机构。采用个人访谈、现场观察和拦截调查三者相结合的方法，收集佳木斯市医疗机构内全面禁烟的活动和禁烟规定、机构内人群的吸烟和二手烟暴露等相关信息。结果 佳木斯市虽然没有出台市级禁烟条例，但是针对佳木斯市医疗卫生机构内部开展了一系列的控烟活动。通过个人访谈发现，绝大多数机构的领导公开表示过对控烟的支持并制定了了全面无烟的政策。在204个现场观察点中，有人吸烟的比例占9.80%，有烟头的比例占23.04%，有禁烟标识的场所占28.43%。在拦截调查中，吸烟者在机构内吸烟的比例占28.30%，看到机构内有人吸烟的比例占15.23%，知晓机构内有全面禁止吸烟规定的比例为63.79%。结论 佳木斯市针对2011年底医疗机构全面禁烟取得了一定的成效，但是仍然没有达到全面无烟的要求，未来应从立法和机构内的动员两方面继续开展控烟工作。

PAI-1启动子区4G/5G基因多态性、ACE插入/缺失多态性与脑卒中的相关研究

国雪

2011, 31(11):  1238-1241. 

摘要 ( 1512 )   PDF (388KB) ( 763 )  

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【摘要】 目的: 探讨纤溶酶原激活物抑制物-1( PAI-1)启动子区基因多态性和血管紧张素转换酶（ACE）插入/缺失多态性与脑卒中的关系。方法：PCR技术检测203例脑卒中患者和139名健康对照者PAI-1基因启动子区4G/5G多态性、ACE基因插入/缺失多态性，同时应用比色法测定血清ACE活性,发色底物法测定PA I - 1活性。结果： 脑梗死(CI)组血浆PAI-1、ACE活性明显高于对照组，脑出血(CH)组血浆PAI-1、ACE活性与对照组相比无明显变化。CI组PAI-I基因4G纯合子、ACE D/I基因DD纯合子比例明显高于对照组，CH组PAI-I基因4G纯合子、ACE D/I基因DD纯合子比例与对照组相比无明显差异。PAI-I基因4G/4G基因型与ACE基因 DD基因型对CI发病可相互协同作用。结论： PAI-1基因4G/4G基因型和ACE基因D/D基因型均可能是CI发病的危险因素，且具有协同作用。

干预离子通道联合密度梯度离心富集胎儿有核红细胞的研究

刘芳 张丽娜 徐向红 程宁 白亚娜

2011, 31(11):  1242-1246. 

摘要 ( 1181 )   PDF (700KB) ( 669 )  

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摘要:目的 探讨干预膜表面K-Cl 同向转运体（KCC）离子通道联合密度梯度离心对富集脐血中胎儿有核红细胞（NRBC）的效果。方法 应用KCC特异激活剂尿素（Urea）干预细胞膜，建立最大限度缩小细胞体积的干预条件；应用最佳干预条件干预脐血后进行不同密度介质下离心富集NRBC，用流式细胞仪计数观察胎儿NRBC的富集效果。结果 比较传统1.077淋巴细胞分离液离心后的单个核层流式细胞仪计数NRBC8.6%，干预脐血后用1.065密度介质离心后下层白膜层达69.9%，未干预组中用1.099密度介质离心的单个核层达55.9%，分别提高富集量8倍和6.5倍。结论 尿素干预联合密度梯度离心能有效提高NRBC的富集率。 关键词:胎儿有核红细胞；离子通道；尿素；干预；流式细胞仪

姜黄素预处理对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关因子表达的影响

高建芝 李东亮 王永玲 张金盈

2011, 31(11):  1247-1250. 

摘要 ( 1297 )   PDF (640KB) ( 680 )  

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【摘要】 目的 探讨姜黄素预处理对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法 30只SD雄性大鼠随机分为姜黄素预处理组、心肌缺血2h组及假手术组，采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型。用TUNEL法观察各组大鼠的心肌细胞凋亡情况；采用RT-PCR检测各组大鼠心肌细胞bcl-2及caspase-3 mRNA的表达水平，并探讨它们之间的关系。结果 与心肌缺血组相比，姜黄素预处理组bcl-2 mRNA的表达水平明显升高，心肌细胞凋亡数与bcl-2 mRNA表达量之间成明显的负相关(r=-0.93, P<0.05)；姜黄素预处理组caspase-3 mRNA的表达水平降低，心肌细胞凋亡数与caspase-3 mRNA表达量值之间成明显的正相关(r=0.89, P<0.05)。结论 姜黄素对心肌缺血大鼠模型心肌梗死有明显保护作用，其作用机制可能与调节心肌细胞凋亡相关因子作用有关。

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/VP1的构建及免疫效果研究

李嘉 王永祥 金玉怀 李剑 温婵 闫立景 张永红

2011, 31(11):  1251-1255. 

摘要 ( 1667 )   PDF (565KB) ( 671 )  

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目的 构建柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3，CVB3)VP1基因重组腺病毒疫苗Ad/VP1，并观察其对小鼠的免疫效果。方法 利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/VP1，并检测目的蛋白的表达。BALB/c小鼠随机分为Ad/VP1、Ad和PBS 3组，肌肉注射免疫，共免疫2次，每次间隔16d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3 VP1 IgG和中和抗体滴度；CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性；用致死量CVB3攻击小鼠后，检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果 成功构建、包装了重组腺病毒Ad/VP1，并在293细胞中检测到VP1蛋白的表达。免疫小鼠后，Ad/VP1组血清CVB3 VP1 IgG滴度、中和抗体水平明显高于PBS和Ad对照组(P<0.01)，CTL杀伤活性和对小鼠的保护率也高于对照组(P<0.05)，血清病毒滴度低于两对照组(P<0.05)。结论 重组腺病毒疫苗Ad/VP1能显著提高小鼠的细胞和体液免疫应答及免疫保护作用。

Noggin基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制

黄佳祎 郭丹 吴迪 李红丽

2011, 31(11):  1256-1260. 

摘要 ( 1711 )   PDF (958KB) ( 678 )  

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摘要：目的 观察过表达Noggin基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力的影响，并初步探讨其机制。方法 以Noggin重组腺病毒感染乳腺癌细胞株MDA-MB-231，MTT法检测Noggin对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响，划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验检测其运动和侵袭能力的改变，定量RT-PCR和总蛋白Western blot检测CXCR4和MMP-1基因的表达改变。结果 过表达Noggin基因的MDA-MB-231细胞增殖能力增强，差异有统计学意义（P<0.05）；划痕修复实验提示过表达Noggin基因的MDA-MB-231细胞划痕愈合延迟；Transwell细胞侵袭试验提示与空病毒组相比(135±7)，Noggin组穿膜细胞数明显降低(79±4)，差异具有统计学意义（P<0.05）。定量PCR和总蛋白Western blot显示过表达Noggin后，MDA-MB-231细胞中CXCR4和MMP-1基因表达下调。结论 Noggin蛋白可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的运动和迁移。其机制可能与下调CXCR4和MMP-1基因的表达相关。

骨形态发生蛋白-7基因变异与新疆维吾尔族老年人原发性高血压相关

严治涛 李南方 郭艳英 姚晓光 王红梅

2011, 31(11):  1261-1266. 

摘要 ( 1769 )   PDF (576KB) ( 1000 )  

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目的 探讨骨形态发生蛋白-7（BMP7）基因变异与新疆维吾尔族人高血压的关系。 方法 测序筛查BMP7基因功能区变异位点，选取代表性变异应用TaqMan-PCR技术在1446例维吾尔族人中进行基因型鉴定并开展病例-对照关联研究。 结果 在BMP7基因功能区共发现5个新的和8个已知的变异位点。BMP7基因rs60254222、rs17480735变异符合Hardy-Weinberg平衡。在高血压及对照组中rs17480735变异的GG、GA和AA基因型频率分布有差异（P<0.05）。年龄≥50岁人群中携带rs17480735变异GG型人群收缩压、舒张压、平均动脉压水平均低于GA+AA基因型组（P<0.05）。应用Logistic 回归分析校正性别、年龄、体重指数、吸烟及饮酒等影响因素后显示，在年龄≥50岁人群中rs17480735变异与高血压相关（P<0.05）。结论 BMP7基因变异位点rs17480735可能与新疆维吾尔族年龄≥50岁人群高血压相关。

激活的巨噬细胞心肌移植改善大鼠心肌梗死后心室重塑作用

李贺

2011, 31(11):  1267-1272. 

摘要 ( 129 )   PDF (1365KB) ( 582 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探讨苯妥英钠和巨噬细胞介导的旁分泌机制对心肌梗死后血管新生和心室重塑的影响。方法 贴壁法培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞，并以苯妥英钠进行预刺激。建立Wistar大鼠心肌缺血再灌注模型，分为对照（AMI）组、苯妥英钠（PHT）组、单纯巨噬细胞移植（MΦ）组、苯妥英钠预刺激的巨噬细胞移植（MΦ-PHT）组及假手术组。术后第7天和第28天，分别取大鼠心室进行组织学分析测定膨展指数、纤维面积、非梗死区心肌细胞横截面积（CSA）、梗死区小动脉密度和毛细血管密度，术后7天采用Western blot分析梗死区血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）蛋白表达水平。结果 与AMI组比较， PHT组、MΦ组和MΦ-PHT组术后第28天膨展指数、纤维面积和非梗死区CSA均显著减少（P <0.05），而小动脉密度显著增加（P <0.05）；术后28天MΦ-PHT组纤维面积显著小于MΦ组（P＜0.05）；MΦ-PHT组较MΦ组术后第7天和第28天小动脉密度和毛细血管密度有增加趋势；MΦ-PHT组较MΦ组术后第7天梗死区VEGF、b-FGF蛋白表达水平均显著增强（P <0.05）。结论 苯妥英钠可能通过激活巨噬细胞介导旁分泌效应，上调与血管新生密切相关的生长因子的蛋白表达水平，促进组织血管新生，改善心肌梗死后心室重塑。

催产素诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

王海萍 王浩宇 吕洋 张雷 陈炜 邵素霞

2011, 31(11):  1273-1277. 

摘要 ( 124 )   PDF (1152KB) ( 585 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

[摘要] 目的 探索催产素（Oxytocin，OT）体外诱导骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells， MSCs）向心肌细胞分化的可行性。方法 取SD大鼠四肢骨骨髓，分离培养MSCs，应用OT定向诱导，相差显微镜观察细胞形态学变化，应用免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜技术检测结蛋白（desmin），α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）、心肌特异性肌钙蛋白（C-TnT）的表达；在诱导后7d、21d和28d，3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA-4和心肌特异性肌凝蛋白重链α-MHC的表达情况。结果 体外分离培养的细胞生长稳定，增殖较快，主要为纺锤形和成纤维细胞状。:诱导后1周，细胞以梭形、柱状为主，部分细胞有分支, 核卵圆形、居中, 类似心肌细胞形态，排列方向渐趋一致。诱导后4周，细胞形态变长、增大，多呈杆状，紧密平行排列生长。分化后细胞desmin、α-sarcomeric actin 和C-TnT均呈现阳性表达。激光共聚焦扫描显微镜观察：可见细胞质内desmin的表达呈红色，cTnT的表达呈绿色，当两者同时被观察时可见其共表达的部位变成黄色。RT-PCR结果显示，GATA-4于诱导后7d弱表达，21d表达增强，28d表达减弱。α-MHC在诱导后7d不表达，21d弱表达，28d表达明显。 结论 骨髓间充质干细胞在OT诱导下可定向分化为心肌样细胞。

技术与方法

简易高效分离培养鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立

韩松 曲彦明 李俊发

2011, 31(11):  1278-1282. 

摘要 ( 216 )   PDF (1601KB) ( 702 )  

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摘要：目的　建立一种建议高效分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的方法。方法　实验用健康雄性Wistar大鼠（200～250g），无菌条件下开胸并取胸主动脉，去除血管外膜，制备长约1.0～1.5mm动脉环。将血管环垂直置于干燥的培养皿中，并向血管环内加入含有10%胎牛血清的DMEM/ F12培养液、静止培养；24h血管环贴壁后，加入培养液；3～4d 内皮细胞长出，弃血管环，并经0.25%胰酶消化传代。应用形态学、免疫细胞化学及流式细胞分析等方法，鉴定血管内皮细胞标志物，即vWF的表达情况。结果　培养3～4d 时有细胞自主动脉环内迁移出并贴壁生长，细胞汇合后呈现典型的“铺路石”样内皮细胞特征；免疫组化和流式细胞分析结果示，vWF表达阳性率可高达( 98.3±0.2)%。结论　本实验采用改良的植块培养方法，不需要胶原及内皮细胞生长补充物，较传统酶消化法更为经济、高效，且简便易行，适用于细小血管内皮细胞的分离与培养。

临床园地

长期过高的自体动静脉内瘘流量对心功能的影响

刘倍 叶文玲 石涛

2011, 31(11):  1283-1284. 

摘要 ( 172 )   PDF (211KB) ( 620 )  

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自体动静脉内瘘（AVF）是慢性肾衰竭血液透析病人首选的血管通路，充足合适的AVF血流量是保证血液透析充分性的基本条件。通路血流量过低预示通路功能不良，导致透析不充分，但过高的通路流量则会增加心脏负荷，最终导致充血性心力衰竭。尽管AVF与心功能的关系备受学者的关注，但因检测手段的限制，国内研究较少，而且多用间接的血管超声和心脏超声判断分析其可能的关系。本文介绍2例使用AVF规律血液透析5年以上，经内瘘流量监测，发现血流量明显升高，结合在线监测的心脏功能与超声心动图，分析长期高AVF流量对心脏功能的可能影响。

研究短文

25例阴性结石的研究

欧阳健明 杨锦

2011, 31(11):  1285-1286. 

摘要 ( 100 )   PDF (270KB) ( 592 )  

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目的 分析泌尿系结石中阴性结石的组分及尿微晶性质，期望为临床上预防与治疗阴性结石提供重要的依据。方法 采用X射线衍射(XRD)和傅立叶变换红外光谱(FT-IR)对手术取出的25例阴性结石联合进行分析；同时采用纳米粒度仪研究了结石患者尿微晶的Zeta电位，并与30例健康对照者进行了比较。结果 25例阴性结石中，以尿酸为主要组分的有24例(其中6例含有少量的草酸钙)，1例为尿酸铵结石。阴性结石患者的尿pH值均比较低，平均值为5.25±0.26，而健康对照者的尿pH平均值为6.06±0.41；其尿液微晶Zeta电位(平均值-5.04±3.48 mV)，高于健康对照者(平均值-10.27±1.35 mV)。结论 阴性结石患者的尿pH低于健康对照者，但不存在明显差异(P>0.05)；其尿液微晶的Zeta电位(-5.04±3.48 mV)高于健康对照者(-10.27±1.35 mV)，差异明显(P<0.05)。

缺氧诱导因子在非小细胞肺癌中的表达及与微血管生成的关系

李兴芳 严俊 严俊

2011, 31(11):  1287-1288. 

摘要 ( 109 )   PDF (500KB) ( 609 )  

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目的 探讨非小细胞肺癌中缺氧诱导因子1α( HIF－1α)的表达及其与微血管密度的相关性。方法 应用免疫组化技术检测55例非小细胞肺癌(NSCLC)及其癌旁组织中缺氧诱导因子HIF - 1α的表达, 用CD105标记血管内皮细胞并计数微血管密度(MVD)。结果 NSCLC组织中HIF-1α的阳性率为63. 6%，MVD为23.12 ±7.22，均高于癌旁正常组织( P < 0. 05)，且与肿瘤的转移和分期的增高呈正相关（P < 0. 05）。结论　HIF-1α参与肿瘤的发展,促进NSCLC 血管生成及转移。

短篇综述

X-盒结合蛋白1的生理及病理生理学作用

张霞丽

2011, 31(11):  1289-1292. 

摘要 ( 506 )   PDF (356KB) ( 724 )  

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X-盒结合蛋白1（X- box binding protein,XBP-1）是未折叠蛋白反应的重要组分，有剪接型XBP-1(XBP-1S)和非剪接型XBP-1(XBP-1U) 两种形式，前者活性远远高于后者。当细胞处于内质网应激状态时，XBP-1由ATF6诱导，经IRE1非传统剪接，转录有功能的XBP-1S，活化未折叠蛋白反应。XBP-1是一种重要的转录因子，对细胞生长和分化具有重要调控作用，并与人类多种疾病的发生和发展相关。

皮肤黑素的代谢及其影响因素

王娟 王娟

2011, 31(11):  1293-1297. 

摘要 ( 359 )   PDF (475KB) ( 907 )  

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人类皮肤颜色的各种差异与黑素细胞中黑素小体的数目、大小、类型和分布有着直接的关系。黑素的合成及其在细胞内的转运是非常复杂而精确的过程,该过程决定皮肤色素的分布与沉着。有诸多因素影响着黑素的代谢，目前研究较多的有酪氨酸酶、过氧化物酶、微量元素、紫外线、结构蛋白Pmel 17和蛋白受体2等。

医学教育

标准化病人和医学生们一起成长

杨萍

2011, 31(11):  1298-1300. 

摘要 ( 151 )   PDF (416KB) ( 630 )  

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“标准化病人”(standardized patients，SP)是指从事非医技工作的正常人或病人，经过培训能熟练掌握检体诊断的全部操作步骤、技巧和评分标准，能模拟某些临床疾病症状和体征，并熟知问诊技巧，可以给操作者评分和对操作技巧进行反馈。同时起到病人、教师和评估者的多重作用。标准化病人一般用于临床问诊、查体和诊断学考试中。