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2019年 第39卷 第7期    刊出日期：2019-07-05

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研究论文

巨胞饮内吞途径介导蒲公英汤剂体进入细胞

李之清 王志清 张艳丽 蒋澄宇

2019, 39(7):  925-931. 

摘要 ( 450 )   PDF (4058KB) ( 728 )  

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目的 探究细胞摄取蒲公英汤剂体的机制。方法 在人肺腺癌细胞系A549细胞模型上，用内吞通路的特异性化学抑制剂，以及敲减内吞通路中关键蛋白的手段，通过流式细胞计量术和激光共聚焦显微镜检测，评估荧光标记的蒲公英汤剂体进入细胞的机制。结果 亲溶酶体物质能显著抑制蒲公英汤剂体进入细胞（P<0.01）；巨胞饮抑制剂细胞松弛素D和阿米洛利能显著降低蒲公英汤剂体的胞内摄入（P<0.001），且呈现剂量依赖性，敲减Rac1和PAK1也有效地抑制其进入细胞（P<0.05）。结论 蒲公英汤剂体通过内吞进入细胞且主要由巨胞饮介导。

人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达

李向茸 马瑞仙 李倩 王兴陇 李生军 张海霞 冯若飞

2019, 39(7):  932-936. 

摘要 ( 409 )   PDF (762KB) ( 285 )  

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目的 构建人跨膜蛋白39A基因（TMEM39A）的原核表达载体，优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法 以HEK293细胞的总RNA为模板，反转录PCR扩增TMEM39A，构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A，并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达，然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达，分析其可溶性和抗原性。结果 重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A（登录号：BC021277.2）的核苷酸序列同源性为99.9 %，氨基酸序列同源性为100 %。重组蛋白GST-TMEM39A在69 ku和60 ku处出现两条特异性条带，采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25 ℃、A600nm值为0.6、IPTG浓度为0.05 mmol/L诱导6 h；在此基础上进行大量表达，并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论 成功构建了TMEM39A的原核表达载体，确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达，为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础，并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。

高糖致心肌细胞肥大的长链非编码RNA表达谱分析

孟哲颖 胡兵 陈翠 曹洪丽 王静怡 申锷

2019, 39(7):  937-942. 

摘要 ( 258 )   PDF (1226KB) ( 304 )  

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目的 探讨高糖诱导心肌细胞肥大中长链非编码RNA（lncRNAs）表达及其可能参与的生物学功能分析。 方法 原代培养心肌细胞，高糖处理48 h致心肌细胞肥大，分对照组（Con）和高糖组（HG），用高通量测序检测长链非编码RNA（lncRNAs）的表达情况。 结果 1）糖尿病致心肌细胞肥大中共筛选到14个差异表达lncRNAs，5个上调分别为ENSMUST00000195674, ENSMUST00000183707, ENSMUST00000195992, MSTRG.8385.2, MSTRG.9749.1，9个下调分别为ENSMUST00000195426, ENSMUST00000186944, ENSMUST00000182639, ENSMUST00000181094, ENSMUST00000125001, ENSMUST00000210380, MSTRG.8302.1, MSTRG.11564.1, MSTRG.13750.1。2）其中ENSMUST00000182639, ENSMUST00000181094, ENSMUST00000195674, MSTRG.8302.1可能通过调控Igf1来参与PI3K-Akt signaling pathway；AMPK signaling pathway；mTOR signaling pathway; Rap1 signaling pathway; HIF-1 signaling pathway; FoxO signaling pathway; Hypertrophic cardiomyopathy (HCM); Dilated cardiomyopathy (DCM); Oxidative phosphorylation等信号通路。 结论 高糖致心肌细胞肥大中lncRNAs呈现显著差异性表达，并可能通过相应的信号通路参与高糖尿致心肌细胞肥大的病理生理过程。

米诺环素增加情绪有关脑区ΔFosB的表达来减轻LPS诱导的小鼠神经炎性反应

李岚岚 修建波 沈岩 许琪

2019, 39(7):  943-948. 

摘要 ( 285 )   PDF (7266KB) ( 189 )  

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目的 探究转录因子ΔFosB在米诺环素减轻脂多糖（LPS）诱导的神经炎性反应中的作用。方法 成年C57BL/6小鼠连续3d经腹膜内注射0.9%氯化钠溶液或米诺环素(50 mg/kg)，第三天再分别注射0.9%氯化钠溶液或脂多糖(LPS, 0.83mg/kg)，注射后6或24 h取样。免疫组化观察特定脑区小胶质细胞形态和ΔFosB的表达，以分析米诺环素对LPS导致神经炎性反应的抑制作用和ΔFosB的表达分布。用Image-Pro Premier 3D分析图像，用GraphPad Prism进行统计学分析。结果 米诺环素可以有效减少蓝斑（LC）中LPS导致的小胶质细胞胞体面积的增加（P < 0.05），减少中枢的炎性反应。同时，米诺环素增加了抑郁症相关脑区LC（P < 0.001)，臂旁核(LPB，P < 0.05)和下丘脑室旁核（PVN，P < 0.05)中ΔFosB的表达。 结论 米诺环素可能通过增加情绪有关脑区LC，LPB，PVN中ΔFosB的表达来减轻脂多糖诱导的神经炎性反应。

三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达

林群 刘丽铭 代辉 张艳君 张业

2019, 39(7):  949-953. 

摘要 ( 346 )   PDF (916KB) ( 318 )  

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目的 研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。 方法 在MDA-MB-231细胞系中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1，在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量；ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子的结合能力；荧光素酶双报告基因检测PRMT1和C/EBPα对c-myc启动子的调控作用。 结果 过表达C/EBPα、敲低PRMT1后，c-myc表达明显下降；C/EBPα蛋白3个甲基化位点35位、156位和165位精氨酸突变为苯丙氨酸后（3RF），C/EBPα对c-myc启动子的转录抑制明显减弱。而3个位点同时突变成赖氨酸后（3RK），PRMT1对c-myc的调控作用消失。 结论 在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中，PRMT1通过甲基化C/EBPα调控c-myc的转录。

人脂肪间充质干细胞向限定性内胚层细胞分化体系的优化

李静 杨岩磊 赵春华

2019, 39(7):  954-960. 

摘要 ( 297 )   PDF (2503KB) ( 354 )  

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目的 探讨activin A、WNT通路激活剂、BMP4以及bFGF信号对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）向限定性内胚层（DE）分化的影响。方法 基于胚胎干细胞（ESCs）或多潜能干细胞（iPS）向DE分化的诱导体系，建立并优化hADSCs向DE细胞分化的诱导体系。在hADSCs向DE诱导体系中，分别比较不同浓度的activin A、Chir99021替代Wnt3a、添加/去除bFGF以及BMP4 等对分化效率的影响。用RT-qPCR检测诱导前后限定性内胚层标志基因FOXA2和SOX17的表达，Western blot检测FOXA2和SOX17蛋白水平，用免疫荧光检测FOXA2和SOX17的表达,鉴定DE分化。结果 与ESCs或iPS向DE分化的诱导体系相比，低浓度的activin A，GSK3抑制剂Chir99021替代Wnt3a,去除BMP信号和bFGF信号的诱导方案可以明显促进hADSCs向DE分化的影响(p<0.01)。结论 hADSC与hESC/hiPS向DE分化相比，需要激活不同信号通路，因此最适诱导体系不同。

射干苷和桃叶珊瑚苷抑制LPS诱导的人脂肪间充质干细胞炎性反应

张乃月 朱榕嘉 尹秀平 王巧玲 韩钦 赵春华 宋坪

2019, 39(7):  961-966. 

摘要 ( 282 )   PDF (1213KB) ( 270 )  

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目的 研究射干苷（tectoridin）、桃叶珊瑚苷（aucubin）对脂多糖（LPS）诱导后人脂肪间充质干细胞（hAMSCs）免疫调控作用的影响。方法 通过CCK-8细胞增殖实验和细胞周期检测实验，筛选合适药物作用浓度；筛选LPS作用浓度,建立炎性反应模型；用ELISA、RT-qPCR检测两者对LPS诱导后hAMSCs分泌促炎因子、抑炎因子的影响。结果 50μg/mL射干苷和100μg/mL桃叶珊瑚苷能明显促进hAMSCs增殖（P＜0.05，P＜0.01）；两者均促进LPS诱导后hAMSCs增殖(P＜0.001），并且，可抑制hAMSCs分泌IL-6、TNF-α、IFN-γ等促炎因子（P＜0.05，P＜0.01）。结论 射干苷、桃叶珊瑚苷可显著抑制LPS诱导的hAMSCs炎性反应。

钠/氢交换调节因子1是结直肠腺癌临床预后的预测因子

卢文秀 焦阳 崔存玮 高龙 秦琼 冯对平

2019, 39(7):  967-972. 

摘要 ( 308 )   PDF (2458KB) ( 249 )  

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目的：寻找与结直肠腺癌侵袭和迁移相关的因子。方法：收集TCGA及GEO数据库中结直肠腺癌相关数据进行SAM差异表达基因分析，将得到的差异基因通过DAVID进行聚类分析，寻找与侵袭迁移相关的基因，并对TCGA数据库中的患者临床信息进行回顾性分析及生存预后分析。同时收集50例具有详细临床及预后信息的结直肠腺癌组织及配对癌旁组织进行免疫组织化学染色来验证上述结果，并绘制ROC线进行评估。结果：DAVID聚类分析发现6个与迁移相关的基因集（p<0.05），其中下调的基因有DLC1、EPB41L3、KIT、PARVA、SLC9A3R1和TPM1。而SLC9A3R1编码的钠/氢交换调节因子1(NHERF1)，是一种能与细胞骨架及多种信号蛋白相互作用的多功能连接蛋白。TCGA数据分析显示，结直肠腺癌中NHERF1的mRNA水平较正常结直肠组织降低。独立临床队列数据的免疫组化结果显示，在高级别及发生淋巴结转移的组织中NHERF1表达降低。结论：NHERF1表达降低是影响结直肠腺癌患者生存期的一个独立影响因子，可能与其促进肿瘤转移有关。NHERF1表达降低是一个潜在的诊断和预测结直肠腺癌不良预后的良好指标。

miR-17-5p诱导小鼠肾足细胞系凋亡

任玮 余宏川 王萍 刘英茹

2019, 39(7):  973-977. 

摘要 ( 255 )   PDF (1265KB) ( 324 )  

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目的 探讨miR-17-5p在小儿肾病综合征 (NS)发病中的作用及其机制。方法 将miR-17-5p mimic转染入小鼠肾足细胞系MPC5 24 h后收集细胞。通过microRNA.org、Target Scan和PicTar在线预测miR-17-5p对PTPRO-3' UTR区的调控作用。用RT-PCR和Western blot检测PTPRO mRNA以及蛋白的表达, Fluo-3-Am特异性Ca2+荧光指示剂检测足细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i), annexin V/PI双染色流式细胞计量术检测足细胞凋亡率。结果 生物信息学技术预测，小鼠源还以及人源miR-17-5p都有多个位点结合于相应的PTPRO-3' UTR区，并抑制PTPRO蛋白及mRNA的表达。PTPRO过表达抑制miR-17-5p诱导的足细胞[Ca2+]i升高，PTPRO过表达减缓miR-17-5p mimic诱导的肾小球足细胞凋亡。结论miR-17-5p抑制小鼠肾足细胞内PTPRO表达, 并激发肾小球足细胞[Ca2+]i升高，诱导肾小球足细胞凋亡。

柚皮苷抑制低氧/复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

刘丹 费慧芝 金良友 宋红霞 张永慧

2019, 39(7):  978-982. 

摘要 ( 235 )   PDF (1679KB) ( 252 )  

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目的 研究柚皮苷（NAR）对H9c2低氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞内质网应激的影响。方法 将H9c2心肌细胞随机分为对照组(C组)、低氧/复氧组(H/R组)低氧4h后复氧24h、柚皮苷10、20和40μg/mL组。于低氧前6h给予柚皮苷培养再行低氧4h后复氧24h。实验后Tunel检测心肌细胞凋亡；Western blot 检测GRP78、ATF6、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果 与对照组相比，H/R组细胞凋亡增加，GRP78、ATF6、Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比率显著上调，而Bcl-2蛋白表达显著下调 (P ＜0．05)；与H/R组比较，柚皮苷3个剂量组均可使细胞凋亡减少，GRP78、ATF6、Bax、Bax/Bcl-2比率下调，Bcl-2上调(P ＜0．05)，尤其以柚皮苷20和40μg/mL组作用最显著。结论 柚皮苷预处理可以降低细胞凋亡，其机制可能与抑制内质网应激有关。

胱硫醚β合成酶通过ATG5巯基化促进自噬缓解阿尔茨海默病

杜亚云 刘晓丽 朱席琳 伍晓盼 刘英

2019, 39(7):  983-988. 

摘要 ( 279 )   PDF (941KB) ( 261 )  

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目的 探究胱硫醚β合成酶（CBS）对阿尔茨海默病的影响及其作用机制。方法 用Western blot检测CBS的过表达效果及其对淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响，检测CBS对自噬标志物LC3的影响；用ELISA检测CBS对细胞上清中Aβ1-42的影响；用亚甲基蓝法检测H2S的生成；用生物素转换及Western blot实验验证H2S对自噬相关蛋白5（ATG5）的巯基化作用。用侧脑室注射质粒的方法在小鼠体内过表达CBS；用Y迷宫实验验证CBS对小鼠学习记忆能力的影响。结果 CBS降低了细胞上清中Aβ1-42的水平（P<0.05）；抑制了APP的表达（P<0.05）；CBS促进了H2S的生成（P<0.01），CBS促进了ATG5的巯基化；CBS促进了自噬标志物LC3的表达，抑制了P62的表达，促进了自噬水平；CBS促进阿尔兹海默模型小鼠的学习记忆能力（P<0.05）。结论CBS通过促进硫化氢生成促进了ATG5第19位半胱氨酸发生巯基化，进而促进自噬，缓解了阿尔茨海默病的病理进程。

2型糖尿病患者外周血CD8+CD25+Foxp3+Treg细胞检测及意义

于建秀 钱雷 徐昌辉 刘青员 朱静和

2019, 39(7):  989-994. 

摘要 ( 269 )   PDF (1440KB) ( 217 )  

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目的 探讨外周血CD8+CD25+Foxp3+Treg（CD8+Treg）细胞比例在2型糖尿病（T2DM）疾病过程中的作用。方法 选取T2DM患者90例，根据尿微量白蛋白（MAL），分为45例T2DM伴正常蛋白尿患者（NMAU，MAL<30 mg/24 h），45例T2DM 伴微量蛋白尿患者（MAU，MAL 30-300 mg/24 h），同时选择门诊体检健康人员45名作为对照组（HC）。通过特定蛋白仪检测患者mAlb浓度；流式细胞仪检测CD8+Treg细胞比例；Luminex200检测血浆白细胞介素（IL）-8、1β、6和肿瘤坏死因子（TNF）-α浓度。结果 与HC组[4.43（3.26-5.75）%]相比，NMAU组[4.06（3.15-5.43）%]和MAU组[3.52（2.30-4.87）%]患者CD8+Treg细胞比例降低，且MAU组降低更明显（P<0.05）；与HC组相比，MAU组和NMAU组患者血浆细胞因子TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β浓度均升高（P<0.05）；MAU组患者CD8+Treg比例与血清细胞因子TNF-α（r=-0.4448, P<0.01）、IL-8（r=-0.3412, P<0.05）、IL-6（r=-0.3653, P<0.05）和IL-1β（r=-0.3192, P<0.05）呈负相关；Logistic回归分析显示CD8+Treg对T2DM患者可能具有保护作用。结论 通过调控T2DM患者外周血CD8+Treg细胞比例，有可能减缓糖尿病的进程。

恒河猴增龄过程中miR-16-5p及靶基因在外周血白细胞中的表达变化

胡婧雯 李艳艳 刘伟 焦丽 杨晶 杨云 和占龙 彭小忠 鲁帅尧

2019, 39(7):  995-1000. 

摘要 ( 242 )   PDF (712KB) ( 251 )  

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目的 明确衰老相关microRNA与恒河猴增龄的相关性。方法 将猴群参照人类增龄划分为幼年、成年、老年和长寿，提取外周血白细胞的总RNA；用real-time PCR检测外周血白细胞中的microRNA及VEGFA、GHR、TBP、INSR、CLOCK、IKBKB、PIK3R1、LRP2、SSTR3、IGF1R、BCL2、PPM1D、IRS1、MAPK8、ADCY5、APP、NFE2L1、BDNF和PEX5的表达；利用microRNA靶基因预测网站miRwalk、TargetSan、miRecords 、miRDB预测miR-16-5p的靶基因，并与人类衰老基因库（http://genomics.senescence.info/）对接。结果 在增龄过程中恒河猴外周血白细胞中miR-16-5p的表达量随年龄增长而增加（P<0.001）；多个网站对miR-16-5p靶基因预测得到539个潜在的靶基因，与人类衰老基因组库对接后有19个基因重合；有10个基因的mRNA在恒河猴增龄过程中存在差异表达，其中， IKBKB、PIK3R1、IRS1的表达随着年龄的增加逐渐下降。结论 在自然衰老恒河猴的外周血白细胞中，miR-16-5p及其靶基因IKBKB、PIK3R1、IRS1能作为外周血衰老候选标志物。

YTHDC1基因在小鼠小脑发育及人髓母细胞瘤组织中的动态表达

吴高锒 赵赋 张晶 李春德 牛亚梅 刘丕楠 佟伟民

2019, 39(7):  1001-1006. 

摘要 ( 354 )   PDF (3727KB) ( 355 )  

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目的 探讨RNA m6A甲基化结合蛋白YTHDC1在小脑发育和髓母细胞瘤中的表达模式及其可能发挥的作用。方法 分别以小鼠小脑、髓母细胞瘤和细胞系为研究对象，在转录组测序结果的基础上，分析RNA水平表达模式；用免疫印迹和免疫组化检测YTHDC1蛋白的表达；在Daoy细胞中敲低甲基转移酶METTL3并通过m6A-IP-qPCR方法检测YTHDC1 RNA甲基化水平及对YTHDC1蛋白丰度的影响。结果 小鼠小脑发育过程中Ythdc1 RNA水平未见明显改变，蛋白表达显著下降（P<0.05）。YTHDC1在P7的小脑内颗粒神经元高表达，而在P60小脑中表达降低。与正常或癌旁组织相比，YTHDC1在肿瘤组织中RNA水平未见明显改变，蛋白水平总体偏低（P<0.005）。YTHDC1在髓母细胞瘤中m6A水平显著升高（P<0.05），而METTL3敲低引起YTHDC1 m6A水平下降以及蛋白表达上调。结论 小脑发育及髓母细胞瘤中YTHDC1蛋白表达变化显著，这一过程受到m6A介导的转录后调控作用，进而影响小脑发育及髓母细胞瘤的发生。

人工与野生蛹虫草虫草素和多糖含量及其水提物对食管癌细胞抗癌活性的影响

周瑞琴 张诚 罗骏 叶琳

2019, 39(7):  1007-1012. 

摘要 ( 312 )   PDF (1038KB) ( 375 )  

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目的 比较人工与野生蛹虫草素和多糖含量及其水提物对食管癌细胞的抗癌活性，并建立蛹虫草质量评价体系。方法 用HPLC技术检测水提物中虫草素的含量，色谱条件为：Agilent ZORBAX SB-C18液相色谱柱(250 mm×4.6 mm×5 μm )，流动相为甲醇/水(15/85，v/v )，流速为1 mL/min，柱温25 ℃检测波长260 nm，进样量1 μL；用苯酚-硫酸法检测虫草多糖的含量；MTS法检测细胞增殖，用Annexin V-PI双染流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果 人工虫草和野生虫草的虫草素含量分别为400 μg/g和29 μg/g；虫草多糖的含量分别为4.26%和3.12%；人工虫草水提物抑制肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡的作用强于野生虫草（P<0.05）。 结论 人工培育的蛹虫草在虫草素和多糖含量及其水提物抗癌活性方面均优于野生蛹虫草，说明人工培育的蛹虫草是野生虫草良好的替代品。

过表达脾酪氨酸激酶降低氧化应激诱导的小鼠成骨细胞凋亡

晋瑞 金迎迎 李嫚 雷喆

2019, 39(7):  1013-1018. 

摘要 ( 303 )   PDF (1991KB) ( 230 )  

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目的 探究脾酪氨酸激酶（SYK）对氧化应激（OS）诱导的小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡的影响及其机制。方法 过氧化氢（H2O2）孵育成骨细胞MC3T3-E1细胞建立OS模型；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测SYK的mRNA表达量；Western blot检测SYK、AKT、p-AKT和UCP2蛋白表达量；构建重组质粒pcDNA.3.1-SYK或pcDNA.3.1-UCP2分别转染MC3T3-E1；AKT抑制剂HIMO抑制AKT磷酸化；Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡；试剂盒检测caspase-3活性和ROS水平。结果 OS降低MC3T3-E1中SYK的表达（P<0.01）；过表达SYK显著降低OS诱导的细胞凋亡（P<0.05）、caspase-3活性（P<0.01）和ROS水平（P<0.01）；过表达SYK显著提高AKT的磷酸化水平（P<0.05）和UCP2的表达量（P<0.01），抑制AKT磷酸化后可消除过表达SYK对细胞凋亡和UCP2的表达的影响（P<0.01）。在过表达SYK，抑制AKT的MC3T3-E1中过表达UCP2，细胞凋亡（P<0.05）和ROS水平（P<0.01）均显著降低。结论 过表达SYK可通过调控AKT/UCP2降低OS对小鼠成骨细胞的伤害。

PM2.5通过HDAC2介导VEGF低表达致小鼠宫内生长受限

石树文 陈聪

2019, 39(7):  1019-1024. 

摘要 ( 236 )   PDF (1067KB) ( 250 )  

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目的 探讨孕期PM2.5暴露致小鼠宫内生长受限（IUGR）的组蛋白修饰机制。方法 给予孕期小鼠持续PM2.5暴露，对照组予以0.9%NaCl溶液水暴露，空白对照组不予任何处理；检测出生体质量；利用定量PCR和Western blot检测组蛋白去乙酰化酶1/2/3（Histone deacetylase1/2/3, HDAC1/2/3）、血管内皮生长因子（VEGF）表达；荧光测定法检测HDAC1、HDAC2及HDAC3活性；ChIP-PCR技术检测HDAC1/2与VEGF启动子结合水平。结果 与对照组相比，PM2.5暴露组小鼠出生体质量显著降低（p<0.05）；PM2.5暴露组胎盘中HDAC1，HDAC2在mRNA及蛋白水平表达显著升高（p<0.05），VEGF表达明显下降（p<0.05）；与对照组相比，PM2.5 暴露组小鼠胎盘中HDAC2酶活性显著升高（p<0.05）；ChIP-PCR发现，与对照组相比，HDAC2与VEGF启动子结合水平显著升高（p<0.05）。结论 孕期PM2.5暴露模型中，HDAC2介导胎盘VEGF低表达可能引起胎盘血供不足，进而引起胎鼠宫内生长受限。

过表达PTEN抑制丙泊酚对过氧化氢诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用

刘宇 何雨 李耀 万永灵

2019, 39(7):  1025-1030. 

摘要 ( 216 )   PDF (605KB) ( 200 )  

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目的 探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）对H2O2或丙泊酚诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法 将H9C2心肌细胞分为对照组（正常培养细胞）、H2O2组（100 μmol/L H2O2孵育24 h）、丙泊酚5、10和30 μmol/L干预组，其中丙泊酚5、10和30 μmol/L干预组细胞分别经H2O2处理24h后加入不同浓度丙泊酚（5 μmol/L、10 μmol/L、30 μmol/L）预处理1 h。MTT法检测细胞的活力；流式细胞计量术检测细胞凋亡率；RT-qPCR检测PTEN mRNA；检测过表达PTEN对丙泊酚处理的H2O2诱导的心肌细胞活力、凋亡、乳酸脱氢酶（LDH）和活性氧（ROS）的影响。 结果 与对照组相比，5 μmol/L和10 μmol/L丙泊酚能提高H2O2诱导的心肌细胞活力、降低其凋亡率、抑制PTEN的表达量（P<0.05）。30 μmol/L丙泊酚显著抑制细胞活力、促进细胞凋亡和PTEN的表达量（P<0.05）；过表达PTEN可抑制丙泊酚对H2O2诱导的H9C2细胞的保护作用（P<0.05），促进LDH和ROS的表达量（P<0.05）。结论 PTEN抑制丙泊酚对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。

川楝素抑制裸鼠卵巢癌生长和促进肿瘤细胞凋亡

李少儒 李燕 户瑞丽 文政芳

2019, 39(7):  1031-1035. 

摘要 ( 218 )   PDF (1637KB) ( 205 )  

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目的 观察川楝素对卵巢癌荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将裸小鼠随机分组，移植卵巢癌细胞建模。阳性组腹腔注射环磷酰胺0.4 mL/d（10g /L），实验1、2和3组分别取川楝素1、10和20 mg/kg溶于0.02 mL/g小鼠体质量0.9% Nacl溶液中腹腔注射，1次/d，持续15 d。对比治疗后瘤体积、瘤质量和肿瘤组织HE染色结果，用TUNEL法检测细胞凋亡指数，以RT-PCR和Western blot检测P53、Bax、Bcl-2和caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果 模型组瘤体积和瘤质量均最高（P＜0.05），细胞凋亡指数均最低（P＜0.05）；模型组肿瘤组织细胞密度大、排列紊乱、核深染、异型性明显；实验1、2、阳性组和实验3组细胞排列疏松，瘤细胞大小不一，核淡染，核仁小，瘤内可发现片状坏死和凋亡细胞；各组肿瘤组织Bax、Bcl-2和caspase-9 mRNA和蛋白表达量、p-P53/P53差异均显著（P＜0.05），实验2组和阳性组均相近，其余每2组间差异均明显（P＜0.05）。结论 川楝素可抑制卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤生长，促进肿瘤细胞凋亡。

临床研究

成人中枢神经系统李斯特菌感染患者的临床特征

范张玲 甘沛 谢静 王焕玲

2019, 39(7):  1036-1039. 

摘要 ( 283 )   PDF (314KB) ( 250 )  

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目的 分析成人中枢神经系统李斯特菌感染的临床特点、治疗转归，提高对中枢神经系统李斯特菌病的认识。方法 回顾性分析北京协和医院1999年至2018年收治的成人中枢神经系统李斯特菌病患者的临床特征。结果 共纳入34例成人中枢神经系统李斯特菌感染患者，女性占68%，平均年龄为（43±15）岁；32例（94%）患者有基础疾病；临床表现主要为发热（100%），意识改变（71%）；实验室检查发现外周血白细胞和中性粒细胞计数均升高，淋巴细胞计数减少；C反应蛋白升高（85%）； 9例（26%）患者临床转归不佳，2例死亡，7例病重转院/出院。结论 成人中枢神经系统李斯特菌病多累及原有免疫低下疾病患者，临床预后不良转归机率高，当免疫功能低下患者出现中枢神经系统感染症状时，应考虑到李斯特菌病，抗菌素经验用药应覆盖李斯特菌。

颞叶海绵状血管瘤继发癫痫的手术治疗

刘琦 郭毅 郭金竹 窦万臣

2019, 39(7):  1040-1044. 

摘要 ( 378 )   PDF (2630KB) ( 340 )  

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目的 探讨以癫痫为临床表现的颞叶海绵状血管瘤外科治疗方法对疗效的影响。方法 回顾性总结2013年5月至2017年10月在北京协和医院神经外科行手术治疗的14例颞叶海绵状血管瘤的癫痫患者的临床资料和随访结果。使用国际抗癫痫联盟2001年提出的等级分类方法对患者癫痫控制情况进行评估。结果 无死亡病例。全部患者无远期神经功能障碍。最后一次随访结果显示13例（92.8%）患者近1年无癫痫发作。结论 继发于海绵状血管瘤的颞叶癫痫患者，通过综合评估病史、术前磁共振影像学、术中电生理监测，合理确定手术切除范围，手术治疗可获得良好的治疗效果。

北京市某社区站老年人健康体检分析

王会兰

2019, 39(7):  1045-1047. 

摘要 ( 236 )   PDF (287KB) ( 263 )  

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目的 为三里河一区卫生站的268例老年人进行体检，对健康情况进行分析。方法 采用整群抽样的方法对2018年7月1日至2018年9月30日在三里河一区卫生站进行体检的268名老年人进行调查。结果 268例老年人中，心率失常检出率为48.89%，超重/肥胖检出率为46.64%，血压增高检出率为41.79%，血脂异常26.87%，空腹血糖增高24.25%。结论 三里河一区的老年人中有多项检查指标异常，应针对老年人的超重/肥胖、血压增高、血脂异常及血糖增高等问题进行及时指导。

技术与方法

CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率

林琼 张祝琴 刘德培

2019, 39(7):  1048-1054. 

摘要 ( 532 )   PDF (940KB) ( 624 )  

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目的 探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法。 方法 用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率，Cas9 RNA和DNA水平的差异；RT-qPCR检测降低共转染的模板DNA的数量时，细胞内Cas9 DNA和RNA水平的变化；RT-qPCR和T7E1内切酶实验检测先转染CRISPR质粒后转染同源重组模板时，细胞内Cas9 DNA和RNA水平以及切割效率的变化。 结果 与只转染CRISPR质粒组相比，CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显著降低了CRISPR质粒的转染效率（P<0.001）和Cas9的切割效率（P<0.001）。而先转染质粒后转染同源重组模板组和只转染质粒组在CRISPR质粒的转染效率和Cas9的切割效率上无明显差别。 结论 CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率，而先转染质粒后转染同源重组模板可以解决这一问题。

研究短文

Neuronostatin抑制大鼠子宫平滑肌收缩

王东萍 简启亮 葛万文

2019, 39(7):  1055-1056. 

摘要 ( 236 )   PDF (245KB) ( 282 )  

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短篇综述

铁死亡在肿瘤中的研究进展

陈云霞 史志周

2019, 39(7):  1057-1060. 

摘要 ( 1325 )   PDF (324KB) ( 1464 )  

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铁死亡是近几年发现的不同于坏死和凋亡的一种新的程序性细胞死亡方式，其特征是铁依赖的脂质过氧化物积累到致死水平。铁死亡参与肝癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生发展过程。SLC7A11和GPX4是铁死亡关键的调控基因，p53和BECN1等分子通过调控SLC7A11和GPX4参与铁死亡的调控，同时诱导肿瘤细胞铁死亡有望成为抗肿瘤治疗的新策略。

糖尿病与细胞焦亡

杨波 熊婉媛 铁宝霞 蔡小玲 哈小琴

2019, 39(7):  1061-1065. 

摘要 ( 416 )   PDF (448KB) ( 440 )  

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细胞焦亡是不同于坏死与凋亡的另一种细胞死亡形式，对于机体而言细胞焦亡有助于维持内环境稳态，但是过度的细胞焦亡会引发机体疾病状态，糖尿病就是其中之一。糖尿病前期、糖尿病的代谢产物和肠道菌群变化会引起细胞焦亡的发生，而细胞焦亡进一步促使胰岛β细胞数量减少和胰岛素靶器官的胰岛素抵抗形成，加重糖尿病病情的发展和并发症的发生。以细胞焦亡为基础的治疗方法虽然越来越被关注，但有待进一步研究。

饲养层细胞作用机制研究进展

周芳颖 刘玉琴

2019, 39(7):  1066-1070. 

摘要 ( 535 )   PDF (353KB) ( 1327 )  

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饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其它哺乳动物细胞的体外培养，通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同，可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法，或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良，从而达到最佳的培养效果。

医学教育

形成性评估纳入妇产科临床教学评估体系的探索

罗敏 顾宇 王涛 陈蓉 朱兰 郎景和

2019, 39(7):  1071-1073. 

摘要 ( 247 )   PDF (332KB) ( 265 )  

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目的 探索形成性评估教学在妇产科实习教学评估体系的意义。方法 自2017年起尝试在妇产科实习生中开展定期迷你临床技能评估(Mini-CEX)。结果 与传统教学模式对比，学生的医患沟通能力及外科操作能力得到了一定提高。结论 Mini-CEX为载体的形成性评估可以纳入妇产科临床教学评估体系。

提高航空航天医学专业青年教员教学能力的几点举措

焦博 白云刚 赵星成 张琳 余志斌

2019, 39(7):  1074-1076. 

摘要 ( 255 )   PDF (387KB) ( 234 )  

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目的 青年教员是保证航空航天医学可持续发展的重要力量，提升青年教员的教学能力是推进专业课程体系改革的一项重要举措。方法 通过鼓励个性化教学、推进实战化教学及开展教学竞赛等一系列措施。结果 青年教员常态化培训机制逐渐成熟，教员队伍质量不断提升，助力航空航天医学教学改革。结论 通过一系列措施，青年教员教学能力明显提高，学生课堂质量问卷调查满意率95%以上。