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2017年 第37卷 第5期    刊出日期：2017-05-05

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研究论文

一种利用吖啶橙染色快速鉴定重力密度梯度沉降法中生精细胞类型的方法

赵晴 韩睿钦 王琳芳 宋伟

2017, 37(5):  591-595. 

摘要 ( 932 )   PDF (1127KB) ( 415 )  

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目的 建立一种重力梯度沉降法分离粗线期精母细胞,圆形及长形精子细胞的快速精确的镜检方法。方法 利用重力密度梯度沉降法分离，将收集到的每管细胞分别放入96孔板中，每孔加入一定浓度的吖啶橙染液，于荧光显微镜下观察。结果 通过分析对应荧光通道下3种生精细胞的细胞核/细胞质染色结果,可快速精确的分辨出粗线期精母细胞，圆形及长形精子细胞。结论 建立了一种在重力密度梯度沉降法分离生精细胞过程中快速镜检检测粗线期精母细胞，圆形及长形精子细胞的方法。

内毒素诱导退变人椎间盘髓核细胞凋亡

易威威 刘浠 温亚枫 叶禾 陈 滔 刘渤

2017, 37(5):  596-600. 

摘要 ( 695 )   PDF (1006KB) ( 476 )  

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目的 观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后，核因子kappB（NF-κB）的活化与细胞凋亡的相互关系。方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞，采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下（100、200、500和1 000 μg/mL）对髓核细胞增殖影响，并筛选合适的刺激浓度；设立空白对照组，单纯LPS（500 μg/mL）刺激组，NF-κB 抑制剂(BAY11-7082）+LPS（500 μg/mL）刺激组，以Hochest33258染色以及AnnexinV-PI双标法检测细胞凋亡；Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB 结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达。结果 CCK-8实验结果显示当LPS浓度为500 μg/mL能明显降低细胞的活力。与空白对照组相比，单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升（p<0.05），P-P65表达明显增加，其凋亡蛋白活化型caspase 3 、PARP降解产物表达也增高（p<0.05）。而与单纯LPS刺激组相比，NF-κB 抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降（p<0.05），P-P65表达明显降低，其凋亡蛋白活化型caspase-3 、PARP降解产物表达也降低（p<0.05）。结论 NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关，值得进一步研究。

NF-κB抑制剂减低LPS致兔腰椎间盘髓核细胞锌指蛋白A20表达升高

温亚枫 易威威 刘浠 叶禾 刘渤

2017, 37(5):  601-607. 

摘要 ( 637 )   PDF (1580KB) ( 357 )  

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目的 观察脂多糖（LPS）刺激退变兔椎间盘髓核细胞前后，锌指蛋白A20（A20）、NF-κB及相关炎性因子的表达及其相互关系。方法 获取正常和退变兔腰椎间盘髓核细胞,分为正常组、退变组、LPS刺激组和NF-κB 抑制剂组，HE染色观察椎间盘髓核及纤维环的形态，免疫组化检测椎间盘A20、NF-κB p65蛋白及Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）的表达。Real-time PCR分别检测各组A20、IL-1β、TNF-α、NF-κB和COL-ⅡmRNA的表达。Western blot观察A20、p65和COL-Ⅱ的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α的表达。结果 退变组髓核细胞数量明显减少，髓核细胞聚集成团，COL-Ⅱ表达下降，A20、p65蛋白表达升高；与正常组相比，退变组A20、TNF-α、IL-1β、p65表达在mRNA及蛋白水平均明显升高，COL-Ⅱ表达降低（p<0.05）；LPS刺激组中A20、TNF-α、IL-1β、p65表达较退变组更显著，COL-Ⅱ降低明显（p<0.05），NF-κB 抑制剂组较LPS刺激组A20、TNF-α、IL-1β、p65表达回降，COL-Ⅱ表达回升（p<0.05）。结论 髓核细胞炎性反应与兔椎间盘退变的发生、发展密切相关，其中A20可能发挥了重要作用。

MCPIP1诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞细胞周期停滞

鹿文葆 刘明明 修瑞娟

2017, 37(5):  608-613. 

摘要 ( 794 )   PDF (1214KB) ( 437 )  

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目的研究单核细胞趋化蛋白诱导蛋白1（monocyte chemotactic protein-induced protein 1, MCPIP1）在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的作用及机制。方法用脂质体转染法在MDA-MB-231中分别过表达，或敲低MCPIP1并筛选稳定表达shRNA的单克隆；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞计量技术检测细胞周期；实时荧光定量PCR（qPCR）检测靶基因半衰期；RNA免疫沉淀法（RNA-IP）检测MCPIP1结合的靶基因；报告子实验检测调节基因3’非编码区（3’ untranslated region，3’UTR）的能力。结果过表达MCPIP1可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05），敲低MCPIP1显著促进细胞增殖（P<0.05）；并分别显著增加或降低G1期细胞百分比（P<0.01）；MCPIP1显著降低细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）、细胞周期素依赖性激酶6（CDK6）、周期蛋白D1（Cyclin D1）和周期蛋白E1（Cyclin E1）mRNAs的半衰期（P<0.01）；MCPIP1结合细胞周期相关基因（P<0.05）；MCPIP1显著降低含不同3’UTR的报告子荧光素酶活性（P<0.05）。结论MCPIP1在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中发挥抑癌作用，诱导细胞周期G1期停滞可能是其发挥抑癌功能的机制之一。

PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用

阳光 宋建宁

2017, 37(5):  614-618. 

摘要 ( 686 )   PDF (1094KB) ( 538 )  

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目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路及葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）、生长停滞及DNA损伤基因（CHOP/GADD153）在四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用。 方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型（皮下注射40% CCl4橄榄油溶液）4及8周组。苏木精-伊红（HE）染色观察肝组织病理形态学；用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达；用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达；用原位末端转移酶标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果 与正常组大鼠比较，肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高（P＜0.05），而肝脏内Akt1、磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低（P＜0.05）；与正常组大鼠比较，肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高（P＜0.05）。 结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用。

以PPARγ2为靶点的传统中药细胞学筛选方法的建立和应用

王欣 徐剑 朱惠娟 李乃适 王林杰 阳洪波 龚凤英 潘慧

2017, 37(5):  619-624. 

摘要 ( 630 )   PDF (879KB) ( 358 )  

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目的 构建含人PPARγ2基因启动子的荧光素酶表达质粒,通过建立稳定转染该质粒的细胞系,建立传统中药细胞学筛选方法。方法首先以pGL3-Basic-luc和pGL3-Enhancer-luc为载体构建含不同长度人PPARγ2基因启动子序列的荧光素酶表达质粒。脂质体转染，建立稳定转染上述质粒的3T3-L1细胞系。选取红花和茜草等28种可能具有减肥作用的中药制备成中药水溶性提取物（ECMH），观察不同浓度 ECMH对3T3-L1细胞中荧光素酶表达的影响。结果pGL3- Enhancer -PPARγ2 625bp-Luc质粒稳定转染的细胞荧光素酶表达最高，是本底的200倍左右。故采用此细胞系进行传统中药筛选，红花ECMH在10 、100和1000μg/mL时均可使3T3-L1细胞中荧光素酶的表达明显增加，分别为对照组的1.63倍、1.90倍和2.30倍（p<0.05）。在10~1000μg/mL荷叶、茜草ECMH也均能促进3T3-L1细胞中荧光素酶的表达，在浓度为1000μg/mL时荷叶和茜草对3T3-L1细胞中荧光素酶的表达作用最强分别为对照组的2.03倍（p<0.01）和2.00倍（p<0.01）。结论:成功的构建pGL3- Enhancer -PPARγ2 625bp-Luc质粒并建立稳定转染的3T3-L1细胞系。发现红花、荷叶和茜草的ECMH能明显促进3T3-L1细胞中人PPARγ2基因启动子的活性，它们可能成为未来潜在的减肥药物。

胰岛素抵抗与低水平脂联素协同促小鼠心室重塑

徐璐 刘雅娟 张青 张娜 任永康 杨锐英

2017, 37(5):  625-629. 

摘要 ( 562 )   PDF (916KB) ( 489 )  

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目的 分析低水平脂联素(APN)与胰岛素抵抗(IR)在心室重塑中的效应。 方法 将野生C57小鼠随机分为对照组（control组）和胰岛素抵抗组（IR组），每组n=8，脂联素基因敲除小鼠随机分为基因敲除组（APNKO组）和基因敲除+胰岛素抵抗组（APNKO+IR组），每组n=8，给予高脂饲料诱导产生IR。喂养12周后测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)等糖脂代谢指标，并计算各组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、心脏质量指数(HWI)和左心室质量指数(LVWI)。取左心室心肌做Masson染色，计算心肌胶原容积分数(CVF)与血管周围胶原面积(PVCA)的大小,检测各组心肌纤维化的程度；用Western blot检测心肌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和APN表达量。结果 低水平APN和IR均能增加心脏质量、左心室质量、HWI和LVWI（P<0.05）。低水平APN和IR对TG、TC、FPG、FINS及心室重塑相关指标有交互效应（P<0.05）,且均为正效应，对心肌APN也有交互效应（P<0.05）,但为负效应。结论 低水平APN和IR在小鼠心室重塑过程中起协同促进作用。

长春新碱降低由转染A20 siRNA促进的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系增殖

王佳蕊 王玲玲 冯江龙 杨文秀

2017, 37(5):  630-635. 

摘要 ( 701 )   PDF (999KB) ( 403 )  

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目的 研究A20小分子干扰RNA片段（siRNA）对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY1)增殖和MDR1表达的影响。方法 分对照组、转染组、长春新碱干预组（VCR）组和转染+VCR组。用脂质体转染法将A20 siRNA转入OCI-LY1细胞，MTT法检测细胞对VCR的敏感性；流式细胞计量术检测细胞凋亡；用real-time PCR检测A20及mdr1 mRNA；用Western blot检测细胞内A20、Pgp蛋白及核蛋白NF-κB的表达。结果 1. A20 siRNA转染后，细胞增殖能力增强(P<0.05)，VCR刺激后转染细胞的增殖曲线下降缓慢。2.转染细胞凋亡率明显低于对照组，VCR刺激24h后OCI-LY1细胞凋亡率较加药前明显增加(P<0.05)，VCR组凋亡率比转染+VCR组增高的幅度大(P<0.05)。3.转染后，A20mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.001)，NF-κB蛋白(P＜0.001)、MDR1 mRNA（P＜0.001）和Pgp (P＜0.001)表达都明显增高；但MDR1mRNA 和Pgp在药物刺激后表达降低（P＜0.05），且VCR组较转染+VCR组降低的幅度大（P＜0.01）。结论 A20 siRNA能有效的增强OCI-LY1细胞内NF-κB的表达，使得MDR1基因及编码蛋白Pgp蛋白增强，从而抑制细胞凋亡、促进细胞增殖；VCR刺激后细胞内MDR1mRNA和Pgp的表达明显降低，A20 siRNA则减弱了VCR的这一作用。

姜黄素抑制oxLDL诱导HUVECs凋亡

王德伟 张冬颖 曹黎 刘剑

2017, 37(5):  636-642. 

摘要 ( 1959 )   PDF (1370KB) ( 536 )  

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目的 研究姜黄素对氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法 体外培养HUVECs，实验分为：对照组、oxLDL组、oxLDL加内质网应激(ERS)抑制剂PBA组、姜黄素组、oxLDL加姜黄素组和oxLDL加姜黄素加PI3K抑制剂LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞仪检测细胞凋亡；激光共聚焦显微镜观察活化转录因子6(ATF6)转位；Western bolt检测ERS相关蛋白：糖调节蛋白78(GRP78)、RNA样内质网激酶(PERK)和肌醇激酶-1(IRE-1)以及相关通路蛋白：LOX-1、AKT和p-AKT的表达。结果 与对照组相比，oxLDL可增加细胞凋亡，提高ERS相关蛋白的表达(P<0.01),促使ATF6向核内转位，以及提高LOX-1(P<0.01)和降低p-AKT的表达(P<0.01)；与oxLDL组相比，PBA可抑制oxLDL诱导的细胞凋亡(P<0.01)，姜黄素可抑制oxLDL诱导的ERS相关蛋白和LOX-1的表达(P<0.01)，ATF6的核转位，内皮细胞的凋亡(P<0.01)，同时它还可提高oxLDL引起的p-AKT表达下调(P<0.01)；LY294002可部分削弱姜黄素抑制oxLDL诱导ERS相关蛋白表达的作用(P<0.05)。结论 姜黄素可降低oxLDL诱导HUVECs的凋亡，其可能机制是通过抑制LOX-1的表达和激活AKT通路减轻细胞ERS来实现的。

纺锤菌素抑制胃癌细胞的侵袭和转移

查郎 彭旭东 王子卫

2017, 37(5):  643-647. 

摘要 ( 640 )   PDF (1031KB) ( 382 )  

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目的 探讨纺锤菌素（netropsin）对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及其分子机制。方法 用Transwell检测胃癌细胞侵袭转移能力，用Westernblot检测EMT相关标志物E-cadherin和vimentin表达，用免疫荧光检测β-catenin的细胞定位，验证netropsin作用前后Wnt/β-catenin信号通路活性。结果 Netropsin浓度25μmol/L时对MKN28细胞增殖即有抑制作用，netropsin可以降低上皮标志物E-cadherin的表达，上调间质标志物vimentin的表达；netropsin可以通过抑制胃癌细胞的EMT降低胃癌细胞侵袭转移能力（P＜0.05），同时可阻止β-catenin进入细胞核。结论 Netropsin可以通过与HMGA2竞争结合转录因子结合位点抑制Wnt/β-catenin信号通路，降低胃癌细胞EMT的发生,从而抑制胃癌细胞侵袭能力。

小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养

王伟 吕峰 金鑫 艾麦提.牙森 李德卫

2017, 37(5):  648-652. 

摘要 ( 1035 )   PDF (1292KB) ( 952 )  

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目的 从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞（mHPCs）,并将其诱导分化为胆管细胞。方法 用荧光激活细胞筛选法（FACS）分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4d和6d的DLK1+细胞的甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）及细胞角蛋白19（CK19）抗原的表达。结果 体外共培养时, 大部分DLK1+细胞分裂增殖明显, 呈葡萄状聚集生长。第4天,部分细胞开始贴壁增殖,形态开始变成梭形。结果显示,分选的DLK1+细胞表达AFP和少量ALB, 但不表达CK19；在共培养的第4天其开始表达CK19, 和微弱表达ALB；第6天, 其高表达CK19, 而几乎不表达的ALB。结论 应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1+细胞并鉴定其大部分为mHPCs, 并可在体外与MEFs Transwell共培养的条件下, 诱导培养其分化为胆管细胞。

β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达

刘滢 贺桂琼 覃万翔 罗敏 汪克建

2017, 37(5):  653-657. 

摘要 ( 750 )   PDF (1039KB) ( 748 )  

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目的 观察阿茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白及代谢相关酶类的表达情况，以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据。方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠（APP /PS1双转基因小鼠）、ob/ob T2DM模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照，分别用免疫组化染色、Elisa和Western blot法检测脑内老年斑（Senile plaques , SP）、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况。结果 APP /PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP；ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP，而对照组未见SP。与对照小鼠相比，APP /PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、 Aβ42的含量明显升高（P<0.05）；但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠（P<0.05）。APP在APP /PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠；在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠（P<0.05）。Aβ生成的关键酶BACE1在APP /PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠（P<0.05），但其在APP /PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠（P<0.05）。Aβ降解的关键酶IDE在APP /PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠（P<0.05），且在ob/ob小鼠脑内表达最低。结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内，同时也发生在T2DM脑内，提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一。

头孢曲松钠抗颞叶癫痫的效果

李晶 许琪

2017, 37(5):  658-662. 

摘要 ( 832 )   PDF (1149KB) ( 396 )  

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目的 研究头孢曲松钠（Cef）对颞叶癫痫模型小鼠的抗癫痫效果以及对谷氨酸转运蛋白（GLT-1）表达情况的作用。方法 首先构建颞叶癫痫小鼠模型，利用同步视频脑电监测（vEEG）技术，24h不间断记录小鼠癫痫发作情况。实验组腹腔注射Cef 200 mg/(kg?d)，对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液，从癫痫发作频率、间期棘波及海马硬化等方面评价Cef对癫痫发作的控制情况，并用Western blot技术检测其对谷氨酸转运蛋白GLT-1 表达情况的影响。结果 单侧海马注射200 ng海人酸（KA）可模拟内侧颞叶癫痫患者反复自发性癫痫发作和海马硬化等两个疾病症状，成功构建内侧颞叶癫痫模型。 Cef处理使癫痫发作次数从2.145次/天降低到1.597次/天，平均发作次数降低了31.2%（p<0.05）。KA癫痫小鼠较正常小鼠GLT-1表达明显降低，但Cef处理并未明显提升GLT-1 的表达。结论 腹腔注射Cef部分抑制KA癫痫小鼠的慢性自发性癫痫发作，但无明显提升海马中GLT-1的表达，提示其可能并非是通过提高星形胶质细胞的谷氨酸清除能力而抑制癫痫发作。

结肠癌HCT116细胞中p53的R213位突变对靶基因p21表达的影响

张妍 张艳君 张业

2017, 37(5):  663-667. 

摘要 ( 982 )   PDF (820KB) ( 1155 )  

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目的 确定在结肠癌细胞系中， p53的213位精氨酸突变后对其下游靶基因p21表达的影响。方法 在p53缺失的结肠癌细胞系HCT116-/-中转染p53的R213位突变的质粒；荧光素酶双报告基因系统检测p53 靶基因启动子活性；EMSA检测p53与其靶基因p21的结合能力；real-time PCR和Western blot检测p53下游靶基因p21的表达。结果p53蛋白213位精氨酸突变为赖氨酸后，明显降低了p53靶基因的启动子活性（P<0.05）；与靶基因p21启动子的结合能力明显降低(P<0.05)；并抑制了p21基因的表达(P<0.05)。而213位突变为谷氨酰胺后，迁移率比突变前明显变快。结论 在人的结肠癌细胞中，p53蛋白R213位的不同突变对下游靶基因p21有不同的影响，提示存在着不同的调控机制。

IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成

刘敬贤 夏永智 王富贵 唐维 晏怡

2017, 37(5):  668-675. 

摘要 ( 783 )   PDF (2238KB) ( 361 )  

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目的 探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制。方法 将大鼠随机分为模型组（采用钳夹脊髓的方法建立SCI模型）、假手术组（sham group）、IL-1β特异性抑制剂组（IL-1RA）、IL-1β组（IL-1β）及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组（IL-1β+AG490）。假手术组只打开椎板，不作其他处理。在术后相应时间点（术后8及12 h和1、3、7及14 d）进行大鼠后肢BBB评分，用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、P-STAT3的表达变化。 结果 P-STAT3（术后第8 h和第12 h）及GFAP、 vimentin（术后第7和第14天）表达趋势：模型组显著高于假手术组（p<0.01），IL-1RA组明显低于模型组（p<0.05），但仍高于假手术组（p<0.05）；IL-1β+AG490组明显低于模型组（p<0.05），但仍高于假手术组（p<0.05）；IL-1β组均显著高于模型组（p<0.05）。术后第14天，BBB评分模型组显著低于假手术组（p<0.01），IL-1RA组显著高于模型组（p<0.05），但仍低于假手术组（p<0.01）；IL-1β组显著低于模型组（p<0.05）。结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成，抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成，促进脊髓神经功能恢复。

DTNBP1基因rs4715986位点多态性与中国汉族人群偏执型精神分裂症相关

叶宁 孙玉慧 胡慧灵 许琪

2017, 37(5):  676-681. 

摘要 ( 598 )   PDF (585KB) ( 338 )  

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目的 通过两步法研究中国汉族人群DTNBP1基因的多态性与偏执型精神分裂症的相关性。方法 发现阶段：在532例偏执型精神分裂症患者及488名健康对照中使用Sanger测序方法检测DTNBP1的11个SNP位点。验证阶段：在1 111例偏执型精神分裂症患者及1 435名健康对照中使用Taqman探针分型的方法对发现阶段检出阳性的rs4715986位点进行验证。结果 发现DTNBP1中的rs4715986位点与偏执型精神分裂症的高患病风险相关（χ2 = 11.02，P < 0.01）。在验证人群中重复出rs4715986与偏执型精神分裂症的相关性（χ2 = 9.29，P = 0.01）。结论 DTNBP1基因rs4715986位点的多态性与偏执型精神分裂症的高患病风险相关。DTNBP1可能是中国汉族人群偏执型精神分裂症的易感基因。

ABCG5/8基因microRNA结合位点多态性与妊娠期糖脂代谢相关

崔铭萱 李伟 马良坤 平凡 刘俊涛 伍学焱 茅江峰 王曦 聂敏

2017, 37(5):  682-686. 

摘要 ( 674 )   PDF (617KB) ( 363 )  

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目的 探讨ABCG5/8基因microRNA结合位点多态性与妊娠期血糖及血脂水平之间的关系。方法 纳入2006年至2011年在北京协和医院内分泌科门诊就诊的妊娠期妇女1 925人，收集相关临床资料，取血并提取基因组DNA。针对研究发现的与糖脂代谢密切相关的ABCG5/8基因，利用数据库筛选中国汉族人群最小等位基因频率大于5%的3’非翻译区microRNA结合位点。对患者进行基因分型并统计分析其与糖脂代谢相关临床变量之间的相关性。结果 仅有1个位点符合筛选条件rs2278356，它分别与低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及总胆固醇（TC）水平显著相关（LDL-C：b=0.104 mmol/L，95%CI 0.023~0.185 mmol/L，p<0.05；TC：b=0.105 mmol/L，95%CI 0.080~0.203 mmol/L，p<0.05）。结论 ABCG5/8基因3'非翻译区microRNA结合位点与中国汉族妊娠期人群LDL-C及TC水平相关，遗传机制的揭示为妊娠期血脂水平升高的个体化诊治提供依据。

野百合碱致肺动脉高压大鼠肺组织中IL-1β和IL18表达增加

张照奇 高戈 胡童谣 魏丹 袁衡 吴翔 郑涛涛

2017, 37(5):  687-690. 

摘要 ( 718 )   PDF (956KB) ( 379 )  

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目的 探讨野百合碱致肺动脉高压（PAH）大鼠IL-1β和IL18表达的变化。方法 将雄性大鼠随机分为对照组和实验组（n=10），建立野百合碱致PAH大鼠实验模型并应用B超、心肌细胞HE染色和TUNNEL染色检测；ELISA方法检测血清NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO浓度；免疫组化法检测肺组织IL-1β和IL-18表达；Westernblot法检测肺组织NLRP3蛋白表达。结果 PAH大鼠血清中NF-κB、COX2、IL-6、IL-1β、TNF-α和NO均显著增加（P<0.05）；肺组织IL-1β和IL-18的表达明显增加（P<0.05），PAH大鼠肺组织IL-1β和IL-18阳性细胞百分比显著增加，IL-1β的增加更明显；NLRP3蛋白表达实验组比对照组有明显增加（P<0.05）。结论 野百合碱致肺组织IL-1β和IL-18表达增加。

Lunasin减轻大鼠运动性关节软骨损伤

刘粟 邱勇 刘红 贾绍辉 刘万红

2017, 37(5):  691-695. 

摘要 ( 604 )   PDF (901KB) ( 464 )  

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目的 探讨Lunasin对运动性关节软骨损伤的治疗作用及机制。方法 将大鼠随机分为对照组和模型组，在注射给予木瓜蛋白酶造模后，标准饲养28 d，然后将模型大鼠分为单纯模型组、0.01、0.05和0.1 mmol/L Lunasin治疗组（每组10只，治疗时间1个月）。治疗结束后分别用ELISA和RT-PCR方法检测血清及组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-6及MMP-8 mRNA的表达；用试剂盒检测SOD活性及iNOS，用Western Blot检测NRF2、Keap1、LC-3Ⅱ、Bax、Beclin1、p-AMPK和AMPK蛋白的表达。结果 模型组中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-6以及MMP-8在血清及组织中含量较对照组均显著升高（P < 0.05），Lunasin治疗后上述因子均显著回降（P < 0.05）；并且Lunasin治疗能显著提高SOD的活性（P < 0.05），上调NRF2的表达并降低iNOS的产生（P < 0.05）；另外，Lunasin能够上调受损关节软骨组织中自噬蛋白Beclin1以及LC-3Ⅱ的表达，抑制软骨细胞的凋亡蛋白Bax的表达。 结论 Lunasin能够通过降低炎性介质的产生、激活氧化应激系统和自噬通路从而有利于受损关节的修复。

TRPC1/ORAI1 复合体调节HUVEC SOC和ROC介导的Ca2+内流和NO生成

王腊梅 胡清华 钟华 唐娜 孙志萍 何芳

2017, 37(5):  696-704. 

摘要 ( 698 )   PDF (2814KB) ( 377 )  

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目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 钙池操纵性钙通道(SOC) 和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca2+内流和NO生成中的作用。方法 取2~3代HUVECs，将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVEC。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果，real-time PCR和Western blotting检测TRPC1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达及抑制效率。细胞随机分组：特异性质粒转染组即实验组，未转染组即空白对照组及空质粒组(vehicle组)，将上述3组细胞分别与CaR激动剂、ROC模拟剂（12-o-十四烷酰佛波醋酸酯-13）TPA+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育，用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO。随后将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVEC，与CaR激动剂孵育后检测[Ca2+]i和NO，用免疫共沉淀法检测TRPC1和ORAI1的相互作用。结果：1) 与对照组相比，TRPC1及ORAI1组，mRNA和蛋白表达均明显降低(p＜0.05)； 2) 在4种不同处理作用下，TRPC1及ORAI1转染组中[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(p＜0.05)；3) 与对照组及单转染TRPC1及ORAI1组比，共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(p＜0.05)；4) TRPC1与ORAI1相互作用形成复合体，且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强。结论 TRPC1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成。

CEACAM1和CD34蛋白表达与胃癌侵袭转移的关系

潘棋 陈艳 向培 黄逸姣 谢楠岚 章烨

2017, 37(5):  705-708. 

摘要 ( 696 )   PDF (822KB) ( 361 )  

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目的：探讨CEACAM1和CD34蛋白表达与胃癌侵袭、转移的关系。方法：免疫组化SP法检测90例胃癌组织和30名正常胃黏膜组织中CEACAM1及CD34的表达情况，分析CEACAM1和CD34标记的MVD与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：CEACAM1和CD34蛋白在胃癌中的阳性表达明显高于正常胃黏膜组织（P＜0.05）。CEACAM1蛋白的表达程度与肿瘤分化、侵袭深度、是否淋巴结转移及病理分期相关（P＜0.05），胃癌组织中MVD与肿瘤大小、分化、侵袭深度、是否淋巴结转移及病理分期相关（P＜0.05）。CEACAM1阳性表达程度及CD34标记的MVD在胃癌中的表达呈正相关关系（P＜0.05）。结论：CEACAM1与CD34参与了胃癌的侵袭和转移，有望成为胃癌发生、发展和预后的预测指标。

中国汉族人群FcγRIIIA F158V基因多态性与系统性红斑狼疮及狼疮肾炎相关

张昀 刘淑芬 曾学军

2017, 37(5):  709-713. 

摘要 ( 798 )   PDF (717KB) ( 497 )  

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目的 研究中国汉族人群中，FcγRIIIA F158V单核苷酸多态性（SNPs）的分布，以及对系统性红斑狼疮（SLE）特别是狼疮肾炎（LN）的遗传易感性和病程变化等的影响。方法 采用病例-对照研究，收集在北京协和医院就诊的324例SLE患者和相匹配的非自身免疫性疾病的319名健康志愿者和体检对照，利用多聚酶链式反应（PCR）、限制性片段长度多态性（RELP）以及DNA测序验证等技术检测FcγRIIIA F158V基因型。进一步结合临床资料进行统计分析。结果 在中国汉族人群中，FcγRIIIA基因的F等位基因频率约为60.8%。FcγRIIIA基因多态性在SLE组和对照组之间存在显著差异，FF基因型的SLE患者出现LN的风险较高，而VV基因型的SLE患者出现早发LN的风险较低。结论 FcγRIIIA基因多态性与SLE的发病有关，FF纯合子基因型可能存在对LN的易感性。VV纯合子基因型可能对LN晚发存在一定保护作用。

临床园地

非糜烂性反流病患者胃食管交界顺应性增加

刘继喜 赵树巧 刘芳 李晓讴 李靖涛

2017, 37(5):  714-717. 

摘要 ( 622 )   PDF (655KB) ( 352 )  

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目的 揭示非糜烂性反流病（NERD）的生物力学机制。方法 纳入自2014年10月4日至2015年9月30日就诊于中日友好医院消化内科门诊符合NERD诊断的17例患者及健康志愿者17名。使用内镜联合EndoFlip技术对胃食管交界的横截面面积（CSA）、球囊内压力和顺应性（Δv/Δp）进行测定。结果 随球囊容积增加，胃食管交界处的顺应性NERD组显著高于对照组（p<0.01）,而横截面积和球囊内压力变化不明显。结论 非糜烂性反流病患者的胃食管交界的顺应性增加可能是其重要的发病机制之一。

充气式温毯预保温联合液体加温对肺叶切除术体温及热舒适度的影响

夏海禄 易杰 黄宇光

2017, 37(5):  718-722. 

摘要 ( 855 )   PDF (682KB) ( 314 )  

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目的 本研究拟探讨充气式温毯预保温联合液体加温对胸科全麻肺叶切除术体温及热舒适度的影响。方法 择期行胸腔镜（VATS）肺叶切除术患者46例，随机分为预保温（充气式温毯）+液体（温箱）保温组（T）和对照组（C）,每组23例，记录预保温前后、麻醉过程中、术毕及进出麻醉术后恢复室(PACU)时患者鼓膜温及术后寒战、热舒适度、恢复室停留时间。结果 在麻醉后1 h、2 h、3 h和术毕时4个时间点，与对照组相比，保温组患者术中的核心体温下降幅度小，更趋于稳定(P<0.01)；保温组患者术后低体温发生率，寒战发生率均较低（8.7% vs 56.5%,4.3% vs 34.8%，P<0.05）；保温组患者热舒适度评分高于对照组（8.52±0.94 vs 7.65±0.83，P<0.01）。结论 术前预保温联合液体保温可维持全麻肺叶切除术患者术中体温平稳,降低低体温及寒战发生，提高热舒适度，为患者提供有效的体温保护。

半球离断术治疗半球性癫痫：疗效与并发症的早期随访

窦万臣 郭毅 郭金竹 苏长保 卢强 金立日 黄颜 周祥琴 吴立文

2017, 37(5):  723-725. 

摘要 ( 674 )   PDF (458KB) ( 303 )  

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目的 探讨半球离断术（hemispherotomy）治疗药物难治性半球性癫痫的早期效果和并发症。方法 自2011年至2013年，北京协和医院神经外科采用大脑半球离断术治疗药物难治性癫痫5例，均为一侧半球广泛弥漫性病变导致的药物难治性癫痫。经过仔细的术前评估检查后，均行大脑半球离断术治疗。结果 所有5例半球性癫痫患者手术顺利，围手术期过程平稳。术后对侧肢体运动和言语功能等和术前无明显变化。术后随访46～69个月，5例患者疗效均达到为Engel Ⅰ级。结论 半球离断术是半球切除术的重大改良，疗效与半球切除术相当。该方法早期并发症少。手术操作虽比较复杂但并非十分困难，值得推广应用。

研究短文

I型糖尿病大鼠腮腺组织内与AQP5功能相关的差异表达基因的筛选

王頔 周美兰 孙世仁

2017, 37(5):  726-728. 

摘要 ( 576 )   PDF (855KB) ( 320 )  

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短篇综述

肠道菌群与心血管疾病关系的研究进展

王燕 蔡军

2017, 37(5):  729-733. 

摘要 ( 1307 )   PDF (628KB) ( 803 )  

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人体肠道中的微生物与宿主相互作用。近年来，人们逐渐认识到肠道菌群与心血管疾病之间的关联性，甚至其中的因果关系及产生的分子机制。其中包括氧化三甲胺（TMAO）在动脉粥样硬化性心脏病和心力衰竭的发病机制中的作用及短链脂肪酸及其受体在血压调节中的作用等代谢途径。

医学教育

司法鉴定融入基础医学教育助力高素质医学人才的培养

马丽琴 毛峥嵘 彭慧琴 竺可青 李冬梅 张伟 黄洪溪 杨水友

2017, 37(5):  734-737. 

摘要 ( 676 )   PDF (617KB) ( 421 )  

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通过医学生前期教育中增设司法鉴定相关的新生研讨课，将真实典型的法医病理案例融合贯通于基础医学理论和实验教育中，进一步开设法医学选修课，引导医学生申请司法鉴定和法医病理相关的科研训练，增加学生学习的兴趣和临床思辨能力，进行早期预警，提升防范和应对突发医疗事件的能力，同时提高老师的业务水平和教学质量，从多方面助力高素质医学人才的培养，减少和防范医疗纠纷的发生。

复杂场景PBL教学模式对八年制医学生综合能力提高的分析

孙成栋 左庆瑶 王艳霞

2017, 37(5):  738-741. 

摘要 ( 556 )   PDF (526KB) ( 531 )  

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目的 比较标准PBL教学模式和复杂场景PBL教学模式对医学八年制学生综合能力提高的效果。方法 用期末考试成绩与DREEM量表比较分析医学教学中复杂场景PBL教学模式和标准的PBL教学模式的教学效果。 结果 复杂场景PBL教学模式在开始分析题型与帮助学生激发兴趣、提高自信心、提高解决问题的能力等方面分值明显高于标准的PBL教学模式的分值（p<0.05）。比较分析中显示对于医学生的综合思维能力具有明显的提高。结论 复杂场景PBL教学模式比标准的PBL教学模式更能提高学生的学习积极性、综合能力处理能力与应变能力，效果显著值得推广。

基础医学研究类实验仪器设备资产编码初探

崔琳琳 李若凡 董化一 祖淑玉 王昆 张云 杨俊涛

2017, 37(5):  742-746. 

摘要 ( 732 )   PDF (732KB) ( 375 )  

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为规范基础医学研究类固定资产管理，解决目前仪器设备“一物多码”状况，本文以中国医学科学院基础医学研究所为调查研究对象，在分析现有仪器设备分类情况的基础上，根据实验原理、设备用途并结合实验仪器设备快速发展的特点，形成了符合基础医学实验研究实际情况和具有动态特点的仪器设备固定资产编码管理方式。管理人员只需与字典中的名称作对应，就可以找到相应的编码，初步改善了基础医学实验仪器设备的分类交叉情况，方便了仪器设备的管理、查询、统计和上报工作。