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2016年 第36卷 第5期    刊出日期：2016-05-05

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研究论文

葡萄糖氧化酶诱导的氧化应激抑制α4β2烟碱型乙酰胆碱受体电流

赵君君 郑媛 渠静 杨慧 张建亮

2016, 36(5):  577-580. 

摘要 ( 794 )   PDF (691KB) ( 462 )  

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目的 探究葡萄糖氧化酶（GO）引起的氧化应激对α4β2烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）电流的影响。方法 在HEK293T细胞共转染α4和β2质粒48 h后进行实验。分为对照组（control组）、3.5 kU/L的GO处理组（GO组）、3.5 kU/L的GO与450 kU/L的过氧化氢酶（CAT）共处理组（CAT组）。使用DCFH-DA荧光探针以及激光共聚焦显微镜来检测活性氧(ROS)的产生；采用全细胞膜片钳检测α4β2 nAChR的电流变化，给予1、10 和30 μmol/L ACh检测受体功能，给予10 μmol/L ACh检测电流变化。结果 全细胞膜片钳记录到呈ACh剂量依赖性的电流；GO处理HEK293T细胞1 h后可显著地增强细胞活性氧的水平（P<0.001）；对照组电流在10次给药中都保持稳定，GO组的电流在连续10次的ACh给药下逐渐降低（P<0.01）；CAT组反转GO引起的α4β2 nAChR电流下降（P<0.01）。结论 GO引起的氧化应激状态导致α4β2 nAChR电流逐渐下降，α4β2 nAChR电流的下降与ROS的增多密切相关。

E3泛素连接酶RNF121对脂多糖诱导的巨噬细胞表达促炎性细胞因子的影响

孟姝 刘音 姜明红

2016, 36(5):  581-585. 

摘要 ( 877 )   PDF (791KB) ( 453 )  

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目的 探讨E3泛素连接酶RNF121对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞表达促炎性细胞因子的调控作用。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞，Western blot检测RNF121的表达。用RNA干扰（si-RNF121）降低RNF121的表达，小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激后，实时荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-6的mRNA水平，ELISA检测细胞培养上清中TNF-α和IL-6的浓度，Western blot检测小鼠腹腔巨噬细胞中p65及磷酸化p65（p-p65）的表达水平，利用双荧光素酶报告基因法检测NF-κB的活性。结果 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞后，RNF121的蛋白水平显著降低（P<0.05），蛋白酶抑制剂MG132能够显著增加RNF121的蛋白水平。si-RNF121降低RNF121的表达后，给予LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞，IL-6和TNF-α的表达水平均显著下降（P<0.05），转录因子p65的磷酸化（p-p65）水平及NF-κB的活性均显著降低（P<0.05）。结论 E3泛素连接酶RNF121通过调控NF-κB的活性从而影响小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α及 IL-6的表达。

Livin通过Akt信号途径促进胃癌SGC7901细胞的上皮细胞间质转换

张生军 常琦 刘勇峰 刘敏丽

2016, 36(5):  586-589. 

摘要 ( 532 )   PDF (869KB) ( 729 )  

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目的 探讨胃癌SGC7901细胞中Livin基因的表达对细胞上皮细胞间质转换（EMT）的影响。方法 用Livin基因的shRNA慢病毒感染胃癌SGC7901细胞，筛选稳定沉默的细胞株，Transwell检测细胞的侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Western blot检测E-cadherin和vimentin表达，同时检测Akt信号通路的激活状态。结果 沉默Livin基因后，胃癌SGC7901细胞侵袭迁移能力明显降低（P＜0.05），E-cadherin明显上调，vimentin则明显下调（P＜0.05），同时明显抑制Akt信号通路信号的激活（P＜0.05）。 结论 livin能够通过激活Akt信号通路从而诱导SGC7901细胞发生EMT，从而促进肿瘤细胞体外侵袭及迁移能力。

心可舒与氟伐他汀抑制兔动脉粥样硬化黏附分子的表达及炎性反应

黑乃豪 徐飞飞 曹新冉 徐慧 陈旭 郝青青 牟林茂 董波

2016, 36(5):  590-593. 

摘要 ( 504 )   PDF (790KB) ( 358 )  

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目的 观察心可舒及氟伐他汀对兔动脉粥样硬化（AS）斑块血管细胞黏附分子（VCAM-1）的影响及其机制。方法 将雄性新西兰大白兔随机分为对照组、高脂AS模型组、氟伐他汀组及心可舒组，每组9只。通过HE染色评估粥样斑块的程度。应用免疫组化检测巨噬细胞、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，蛋白免疫印迹法分析斑块VCAM-1的表达水平，并检测氧自由基SOD及MDA的含量。结果：心可舒及氟伐他汀组VCAM-1的表达明显低于高脂组的水平(P<0.01)，巨噬细胞、MMP-9及α-SMA的水平亦明显低于高脂组（P<0.01），SOD的含量明显升高(P<0.01)。结论：心可舒及氟伐他汀通过抗氧自由基及抗炎作用保护兔血管内皮及抗动脉粥样硬化。

II型CD36缺乏症基因遗传不对称性

丁浩强 徐秀章 王嘉励 叶欣 邓晶 夏文杰 陈扬凯

2016, 36(5):  594-597. 

摘要 ( 766 )   PDF (800KB) ( 368 )  

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目的 用DNA测序的方法确定II型CD36缺乏症基因型，分析该基因在广州献血者中的遗传方式。方法 利用PCR-SBT（sequencing based typing, 基于测序分型）技术对998名广州献血者的CD36基因编码区进行分析；通过流式细胞仪分析血小板及单核细胞表面 CD36蛋白表达水平。结果 在998样品中，野生型基因、1个单一的突变 和 2个突变者分别为980 、12和6 。I型CD36缺失通常以2个突变基因型存在。结论 II 型CD36缺失可能受单核细胞CD36蛋白基因剂量依赖性以及除编码区基因以外的遗传因素的影响，导致其基因遗传不对称性。

miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化

张燕 严冰浩 徐辰 顾道兰 王越 刘厚奇

2016, 36(5):  598-603. 

摘要 ( 663 )   PDF (1296KB) ( 403 )  

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目的 探究miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞 （hUCMSCs) 成骨分化过程中的作用及其作用机制。方法 通过转染hUCMSCs过表达或抑制miR-92b-3p，qRT-PCR检测各组成骨相关基因OCN、RUNX2 、OSTERIX mRNA表达以明确miR-92b-3p对hUCMSCs成骨分化的体外调控作用，用茜素红染色比较各处理组的骨化能力。通过生物信息学分析miR-92b-3p可能的靶基因，并通过双荧光素酶基因报告系统以及Western blot验证。结果 miR-92b-3p在hUCMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高( P<0.05)； 过表达miR-92b-3p能促进hUCMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力（P<0.05）；而抑制miR-92b-3p则能降低hUCMSCs体外成骨分化（P<0.05）。过表达miR-92b-3p能显著降低DKK1的表达量（P<0.05），抑制则能明显提高DKK1的表达（P<0.05）。结论 miR-92b-3p可通过抑制DKK1表达，促进hUCMSCs成骨分化。

RAGE阻断剂FPS-ZM1减轻异氟醚麻醉诱发老龄大鼠认知功能障碍

史成梅 易端 李正迁 郭向阳

2016, 36(5):  604-609. 

摘要 ( 706 )   PDF (1323KB) ( 334 )  

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目的 探讨RAGE阻断剂FPS-ZM1对异氟醚麻醉诱发老龄大鼠认知功能障碍的影响。方法 将老龄大鼠60只，随机分为4组(n=15)：NS+O2组、NS+ISO组、FPS-ZM1+ISO组及FPS-ZM1+O2组。NS+O2组及NS+ISO组，侧脑室注射无菌生理盐水10 μL，FPS-ZM1+ISO及FPS-ZM1+O2组，侧脑室注射FPS-ZM1 10 μL(5 g/L)。侧脑室注射后24 h，NS+O2及FPS-ZM1+O2组吸入含有30%氧气的空氧混合气体4 h，FPS-ZM1+ISO及FPS-ZM1+ISO组吸入2%异氟醚+100%氧气4 h。用Morris水迷宫评测大鼠学习和记忆功能, 用免疫组织化学技术观察海马CA1区RAGE及Aβ的表达。结果 与NS+O2组相比，NS+ISO组第1-4 d逃避潜伏期延长、探索时间缩短、海马CA1区RAGE表达上调、Aβ表达上调。与NS+ISO组相比，FPS-ZM1+ISO组第1-4 d逃避潜伏期缩短，探索时间延长，RAGE表达下调、Aβ表达下调。结论 RAGE阻断剂FPS-ZM1可改善异氟醚麻醉诱发老年大鼠认知功能障碍，其机制可能与其抑制海马CA1区Aβ沉积有关。

miR-551b-3p在胃癌组织中低表达并抑制胃癌细胞系HGC-27增殖、迁移和侵袭

温馨 翟頔 王芳 余佳

2016, 36(5):  610-614. 

摘要 ( 691 )   PDF (1508KB) ( 391 )  

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目的 探讨miR-551b-3p在胃癌中的表达变化情况，及其对胃癌细胞功能的影响。方法 用real-time PCR的方法检测60例胃癌组织及其对应的癌旁组织中miR-551b-3p的表达量，使用miR-551b-3p模拟物（miR-551b-3p mimic）转染胃癌细胞系HGC-27，CCK-8法检测细胞增殖；划痕愈合实验检测细胞迁移；Transwell法检测细胞侵袭。结果 1）miR-551b-3p在胃癌癌症组织中的表达明显低于癌旁组织（P<0.05）。2）过表达miR-551b-3p mimic可以明显减弱胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-551b-3p在胃癌组织中低表达，并且抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭，可能与胃癌发生发展密切相关。

体外共培养人骨髓间充质干细胞与乳腺癌细胞可促进癌细胞的侵袭和迁移能力

许鹏超 李静 赵春华

2016, 36(5):  615-620. 

摘要 ( 796 )   PDF (2219KB) ( 752 )  

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目的 探讨人骨髓间充质干细胞（hBM-MSCs）与乳腺癌细胞共培养对癌细胞转移能力的影响。 方法 ELISA检测BM-MSCs分泌细胞因子的水平。Transwell小室将BM-MSCs与乳腺癌细胞系MCF-7和MDB-MA-231分别共培养，比较共培养前后乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。Western blot检测p-STAT3和p-ERK等信号通路的激活情况。实时定量RT-PCR检测侵袭转移相关基因MMP2和MMP9的表达水平。结果 BM-MSCs分泌大量的细胞因子HGF、IL6、VEGF和TGF-β1。与BM-MSCs共培养后，乳腺癌细胞MCF-7（P<0. 01）和MDB-MA-231（迁移P<0. 05，侵袭P<0. 01）迁移和侵袭能力显著增加，p-STAT3和p-ERK信号通路激活（P<0. 01），侵袭转移相关靶基因MMP2和MMP9表达水平上调（P<0. 01）。 结论 BM-MSCs 与乳腺癌细胞共培养可以促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

脂肪间充质干细胞源exosomes对乳腺癌细胞系MCF7中microRNA表达谱的影响

王世华 林瑞竹 李霄霞 赵春华

2016, 36(5):  621-626. 

摘要 ( 603 )   PDF (1366KB) ( 328 )  

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目的 观察脂肪间充质干细胞源exosomes的生物学特性，初步探讨其对乳腺癌细胞系MCF7中microRNAs表达谱的影响。方法 收集脂肪间充质干细胞培养上清液,以超滤和超离的方法提取exosomes；电镜下观察形态；用Western blot检测exosomes表面蛋白标志物的表达情况；用Dil染料标记exosomes后加入到乳腺癌细胞MCF7上清中，荧光显微镜下观察MCF7对exosomes的内吞作用；用microRNA芯片检测MCF7在exosomes处理24 h后microRNAs表达谱的变化以及exosomes中含有的microRNAs种类。 结果 脂肪间充质干细胞分泌30~100 nm的exosomes, exosomes表达CD63和HSP70，可被乳腺癌细胞MCF7内吞；exosomes作用24 h,可引起MCF7中244个microRNAs表达发生变化（其中174个表达上调，70个表达下调，倍数>2倍）；对脂肪间充质干细胞exosomes中microRNAs的分析提示MCF7中microRNAs的上调大部分是内源性的,不是exosomes 输入的。结论 脂肪间充质干细胞源exosomes可以诱导乳腺癌细胞microRNA表达谱发生变化，揭示了间充质干细胞影响乳腺癌细胞发生和发展的一个新机制。

手阳明大肠经和手厥阴心包经相关的脊髓前角运动神经元投射支配特性

李春艳 刘帆 方烨红 刘克 马超 谢益宽

2016, 36(5):  627-632. 

摘要 ( 878 )   PDF (1270KB) ( 653 )  

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目的 绘制支配手阳明大肠经和手厥阴心包经相关的脊髓运动神经元在脊髓的空间定位和树突投射的特异性分布。方法 利用霍乱毒素B单位结合辣根过氧化物酶（CB-HRP）可被外周神经末梢吸收和运输的特性，在大鼠前肢手阳明大肠经和手厥阴心包经路径上的肌肉的每一穴位点分别注射5 μL的CB-HRP（1%）溶液，经过3-4d的药物吸收后，通过灌流固定-切片-TMB组织化学反应程序，显示出支配这些肌肉的运动神经元胞体及突起，并观察手阳明大肠经和手厥阴心包经相关的运动神经元在脊髓的空间的分布特性。结果 大鼠手阳明大肠经以及手厥阴心包经相关的运动神经元在颈3-颈7节段脊髓腹角分别形成首尾走向、定位明确的运动神经元柱状联结；同一条经对应的运动神经元之间存在丰富的树突-树突和树突-胞体定向投射，形成一个由运动神经元胞体及其树突构成的细胞柱状实体。 结论 同经相关的运动神经元之间构成一个紧密连接的神经元柱，柱间的神经元的树突-树突和树突-胞体定向投射可能是循经感传反射活动的结构基础。

减压对大鼠脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变和BDNF表达的影响

余海军 孙善全 马岚 王富贵

2016, 36(5):  633-637. 

摘要 ( 563 )   PDF (1675KB) ( 550 )  

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目的 观察脑源性神经生长因子BDNF对脊髓压迫性损伤CSCI后有髓神经纤维脱髓鞘病变的影响，为阐明BDNF对神经纤维脱髓鞘病变修复提供实验基础。方法 将大鼠均分成4组：正常组、假手术组、压迫组和减压组。用自行设计的压迫器制作大鼠脊髓压迫模型。压迫组作脊髓压迫12 h,减压组作脊髓压迫1 h，假手术组仅作脊髓显露,不作压迫。用锇酸染色观察CSCI后1、3和7 d有髓神经纤维变化情况； Western blot和免疫荧光双标检测BDNF和髓鞘碱性蛋白MBP的表达。结果 压迫组和减压组都出现脱髓鞘病变，并随着时间的延长，髓鞘逐渐水肿、变性、MBP崩解。BDNF表达量在CSCI后随时间延长也逐渐降低(p<0.05)，但与压迫组相比较，减压组脱髓鞘病变较轻且MBP和BDNF降低幅度小而缓慢(p<0.05)。结论 CSCI后尽早减压可减轻脱髓鞘的发生，且可能与BDNF的表达有关。

miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响

翟頔 温馨 皮静楠 张正一 王芳 余佳

2016, 36(5):  638-643. 

摘要 ( 680 )   PDF (1456KB) ( 419 )  

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目的 探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异，并分析其在胃癌细胞系中的功能。方法 使用real-time PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异；使用miR-363-3p模拟物（miR-363-3p-mimic）实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验，检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响。结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖（p<0.05，p<0.01），抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移（p<0.001）， miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭（p<0.05）。结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点。

过表达c-Met蛋白诱导内皮祖细胞分布于肺动脉高压大鼠肺组织

杜明成 秦廷江 夏世辉 王朝辉 刘赢贝 安永

2016, 36(5):  644-650. 

摘要 ( 703 )   PDF (2242KB) ( 434 )  

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目的 探讨过表达c-Met蛋白对内皮祖细胞（EPCs）在低氧性肺动脉高压(HPAH)大鼠中的分布情况。方法 复制HPAH模型，原代培养大鼠骨髓源性EPCs并鉴定，构建带有c-Met基因的腺病毒并转染EPCs，细胞分为对照组、空载病毒组和c-Met过表达组，用Real time PCR和Western blot检测c-Met mRNA和蛋白表达，用CM-Dil活细胞染色剂标记EPCs，通过尾静脉将各处理组EPCs输注到HPAH大鼠模型体内，1周后观察EPCs在主要脏器中的分布。结果 对照组、空载病毒组和c-Met过表达组c-Met mRNA表达量分别为：0.19、0.17和1.85；c-Met蛋白的表达量分别为：0.24、0.17和0.82。正常EPCs组中细胞在肺脏、肝脏、脾脏和肾脏的阳性率分别是:1.7％、0.5％、7.9％和9.4％，空载病毒组细胞阳性率分别是:1.5％、0.4％、8.3％和8.5％，c-Met EPCs组细胞阳性率分别为9.3％、0.2％、1.3％和0.3％。c-Met EPCs组中肺脏的细胞阳性率明显升高，在肾脏和脾脏的分布明显下降（P<0.001）。结论 过表达c-Met蛋白促进EPCs优势分布于HPAH模型的肺组织。

急性脊髓损伤小鼠体内循环平滑肌祖细胞升高

苑晓晨 武清斌 李宏伟 李炳蔚 修瑞娟

2016, 36(5):  651-655. 

摘要 ( 633 )   PDF (1014KB) ( 331 )  

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目的 建立两种检测外周血平滑肌祖细胞（SMPCs）的绝对计数方法，评估了方法的观察者内和观察者间差异及初步应用。 方法 小鼠眼眶取血样本经抗体孵育后使用“裂解/一次洗涤法”处理，流式细胞仪检测。SMPCs定义为c-kit阴性/CD140b阳性/lineage阴性/sca-1阳性。SMPCs计算方法包括“微球法”和“流式直接体积法”。分别在采血后0、24和48 h后进行检测。SCI模型使用Allen’s打击装置造模，检测伤后24 h的SMPCs。 结果 微球法和直接体积法的观察者内可靠系数分别是0.947和0.839；观察者间可靠系数分别是0.911和0.768。SMPCs在血液样本中不稳定，静置24和48 h后丢失较多。SCI后24 h，SMPCs的数量较正常组和假手术组明显升高。 结论 建立了两种SMPCs绝对计数法，有较好的观察者内一致性和观察者间一致性。应用两种方法能够有效的检测到小鼠SCI后SMPCs的升高，为探讨其变化的意义提供了方法和依据。

多种肿瘤相关自身抗体在非小细胞肺癌中的联合诊断价值

幸雯 张涛 夏良裕 隋天琪 鲁宁 程根宏 秦晓峰

2016, 36(5):  656-660. 

摘要 ( 714 )   PDF (790KB) ( 519 )  

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目的 探讨肿瘤-睾丸抗原 (NY-ESO-1)、肿瘤蛋白p53 (p53)、细胞周期素依赖性蛋白激酶2 (CDK2)、膜联蛋白A2 (annexinA2)、胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白1 (IMP1)、泛素1 (ubiquilin1)以及磷酸甘油酸变位酶 (PGAM1) 共7种自身抗体在非小细胞肺癌 (NSCLC)中独立及联合诊断的应用价值。方法 应用Luminex Bio-Plex200检测48例NSCLC和45例健康对照血清中NY-ESO-1、p53、CDK2、annexinA2、IMP1、ubiquilin1及PGAM1的表达水平，并用受试者工作特征 (ROC)曲线分析其诊断的准确性。结果 1）7种自身抗体在NSCLC中的表达均显著高于健康对照组（P<0.05）；2）ROC分析显示，NY-ESO-1和p53的AUC均≥0.7，annexinA2的检测特异性为88.89 %; 3）7种自身抗体联合检测时，AUC为0.812，敏感性为68.75 %，特异性为91.11 %。结论 7种自身抗体在NSCLC的诊断中均有一定意义，特别是7指标联合检测可有效提高诊断的准确性。

环巴明抑制SHH信号通路缓解大鼠神经病理性疼痛

冯晓雪 杨晓秋 刘丹彦

2016, 36(5):  661-665. 

摘要 ( 725 )   PDF (848KB) ( 336 )  

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目的 拟探讨环巴明抑制SHH信号通路对坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠的痛敏改变及脊髓水平BDNF、NR2B变化的影响。方法 将大鼠随机分为对照组（control组）、坐骨神经分支选择性损伤组（SNI组）、溶剂对照组（SNI-vehicle组）和环巴明组（SNI-CP组），各组12只。分别于建模前1 d、建模后1和7 d测定机械缩足反应阈（PMWT）。于建模后7 d行为学测量后处死大鼠取L4-6脊髓组织，用Western blot法及实时荧光定量PCR法测定脊髓组织SHH、GLI1及BDNF表达，用免疫组化法测定脊髓组织NR2B蛋白表达。结果 与对照组相比，SNI组、SNI-vehicle组和SNI-CP组PMWT均降低，脊髓组织SHH、GLI1及BDNF蛋白及mRNA表达均上调，且脊髓组织NR2B表达亦上调（P＜0.05）；但与SNI组相比，SNI-CP组经环巴明处理后PMWT升高，且脊髓组织SHH、GLI1及BDNF表达下调，脊髓组织NR2B表达亦下调（P＜0.05）。 结论 环巴明抑制SHH信号通路能改善SNI大鼠神经病理性疼痛，其机制可能与其调节脊髓水平BDNF和NR2B蛋白表达有关。

mBDNF /Akt/CREB和proBDNF/ RhoA信号传导失衡在丙泊酚致新生鼠认知功能障碍的作用

严艾 高进 陈萍

2016, 36(5):  666-671. 

摘要 ( 829 )   PDF (753KB) ( 355 )  

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目的 探讨mBDNF /Akt/CREB和proBDNF/ RhoA信号传导失衡在丙泊酚致新生鼠认知功能障碍的作用。方法 新生7 d大鼠随机分为6组(每组n=12)：C组连续7 d腹腔注射0.9%NaCl溶液；P1组注射0.9%NaCl溶液6 d后，第7天注射丙泊酚；P2组连续7 d注射丙泊酚；T、K及D组连续7d注射丙泊酚后，第7天再分别注射TAT-Pep5、K252a与DMSO。各组随机抽取6只大鼠进行血糖血气的监测，其余大鼠喂养至第25天进行Morris水迷宫实验，测试空间学习记忆能力。取海马组织，通过Western blot检测mBDNF/Akt/CREB及proBDNF/ RhoA信号通路的表达。结果 与C组比较，P1组与P2组大鼠幼年期逃逸潜伏期延长，空间探索时间缩短（P＜0.05），且P2组改变更为显著。与D组比较，K组大鼠幼年期逃逸潜伏期延长，空间探索时间缩短(P＜0.05)；T组大鼠幼年期逃逸潜伏期缩短，空间探索时间延长(P＜0.05)。与C组比较，P1组与P2组海马mBDNF/Akt/CREB表达下调（P＜0.05），且P2组下调更为显著；P1组与P2组海马proBDNF/RhoA表达上调（P＜0.05），且P2组上调更为显著。与D组比较，K组海马Akt/CREB下调（P＜0.05），T组海马RhoA下调（P＜0.05）。结论丙泊酚导致新生大鼠幼年期学习记忆功能障碍与mBDNF /Akt /CREB抗凋亡信号通路抑制，proBDNF/RhoA促凋亡信号通路增强有关。

胃癌细胞中miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响

田甜甜 李艳艳 沈琳 高静

2016, 36(5):  672-677. 

摘要 ( 1299 )   PDF (1418KB) ( 445 )  

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目的 研究胃癌细胞中miR-135a表达与紫杉醇敏感性的关系，并探索可能的作用机制。方法 运用Taqman microRNA芯片筛选接受紫杉醇化疗有效及无效胃癌患者血清中差异表达microRNAs，选择与紫杉醇敏感性关系较大的microRNA-135a (miR-135a)为研究对象，在体外培养的胃癌细胞中转染miR-135a mimic与miR-Ctrl，用细胞增殖曲线、流式细胞仪、Western blot等方法探索miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响及可能的作用机制。结果 miR-135a在紫杉醇化疗无效患者血清中的表达水平明显高于化疗有效患者（P<0.05），可能与紫杉醇耐药有关。miR-135a通过抑制紫杉醇诱导的细胞周期G2期阻滞及细胞凋亡（P<0.05）而降低胃癌细胞对紫杉醇的敏感性。 结论 miR-135a有望成为临床胃癌紫杉醇化疗疗效的预测标志物。

α- 硫辛酸降低脂多糖诱导的Raw264.7 细胞TNF-α的分泌

刘娟 常平 刘占国 王伟 虞莹

2016, 36(5):  678-681. 

摘要 ( 609 )   PDF (593KB) ( 343 )  

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目的 观察α- 硫辛酸(ALA)对脂多糖（LPS）在体外诱导的Raw264.7细胞TNF-α释放及机制。方法 用ALA或者ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂或者激活剂预处理2 h，再用LPS(1 mg/L)体外刺激巨噬细胞Raw264.7；采用MTT法检测ALA对Raw264.7细胞活力影响，利用ELISA方法对Raw264.7释放在培养上清中的细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度，及用Western blot方法检测T-pERK、pERK和NF-κB的表达。结果ALA可抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TNF-α表达（p<0.05)，用ALA联合ERK或NF-κB的激活剂预处理后可减弱ALA产生的抑制效果（p<0.05)。同时ALA抑制LPS诱导的Raw264.7细胞pERK和NF-κB的表达（p<0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂预处理后可加强ALA产生的抑制效果（p<0.05)。结论ALA可能通过抑制LPS诱导的Raw264.7细胞的ERK和NF-κB信号通路来抑制TNF-α释放。

TRIM22稳定过表达细胞系的构建及其抗流感病毒功能

陈志高 李春峰 秦晓峰 程根宏

2016, 36(5):  682-687. 

摘要 ( 1045 )   PDF (1033KB) ( 426 )  

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目的 构建稳定表达TRIM22的HEK293T细胞系HEK293T-TRIM22，观察TRIM22蛋白在该细胞内的表达及对流感病毒复制的影响并初步探究其抑制机制。方法 扩增TRIM22基因并与反转录病毒载体进行体外重组连接，经菌液PCR、测序确认后与反转录病毒骨架载体共转染进HEK293T细胞进行包装病毒。用包装的反转录病毒感染HEK293T细胞，感染24h后用嘌呤霉素筛选稳定过表达TRIM22的细胞，筛选48 h后用Western blot检测TRIM22表达水平；用IAV-LUC病毒检测稳定过表达TRIM22的HEK293T对流感病毒的抑制作用；再用双分子荧光互补实验（BiLC）检测与TRIM22相互作用的流感蛋白。结果 经测序确认目的基因TRIM22成功克隆到载体pQC-XIP中。包装反转录病毒并感染HEK293T细胞，经过嘌呤霉素筛选后，稳定过表达TRIM22的HEK293T细胞中TRIM22的蛋白表达水平升高(P<0.05)。在稳定过表达TRIM22的细胞内流感病毒复制减弱(P<0.05)。BiLC检测TRIM22与流感蛋白NP有相互作用。结论 稳定过表达TRIM22的HEK293T细胞系构建成功，TRIM22与NP有相互作用并且抑制流感病毒复制。

利用同源序列确定人GIPC2核心启动子和寻找可能的顺式作用元件

程志凯 郑直

2016, 36(5):  688-693. 

摘要 ( 723 )   PDF (1227KB) ( 447 )  

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目的 利用同源序列确定人GIPC2核心启动子区和寻找可能存在的基因调控区域。方法 利用1)Vista比对不同物种GIPC2基因编码区和非编码区序列，得到GIPC2同源序列；2）分别构建插入人和大鼠GIPC2翻译起始位点ATG上游不同长度截短片段的重组质粒，转染人HEK293T细胞和大鼠PC12细胞；3）根据报告基因荧光强度推断人和大鼠 GIPC2的核心启动子区；4）将人GIPC2内含子区同源序列置于核心启动子前面，构建重组质粒，转染HEK293T，HT-29和PC12细胞，检测启动子活性。结果 人 GIPC2核心启动子区确定为+32至+190序列区域；人和大鼠GIPC2 ATG上游一段同源序列有抑制GIPC2启动子活性的功能；人和大鼠 GIPC2第一个内含子内的同源序列有促进启动子活性的功能。结论：利用同源序列方法确定了人GIPC2基因的核心启动子区，并且找到能抑制和促进GIPC2 启动子活性的可能的顺式作用元件。

特纳综合征患者早期雌激素替代治疗改善骨密度

吕翠君 阳洪波 陈适 龚凤英 李光玲 马莹莹 潘慧

2016, 36(5):  694-697. 

摘要 ( 692 )   PDF (526KB) ( 422 )  

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目的 探讨早期雌激素替代治疗对特纳综合征（TS）患者骨密度（BMD）改善的效果。方法 选取2005年8月到2015年8月就诊于北京协和医院内分泌科矮小门诊的27例TS患者，全部测量身高、体质量，雌激素治疗前后的骨密度由LUNAR-PRODGIY型骨密度仪进行测量。比较TS 患者雌激素替代治疗前后骨密度的差异,治疗起始年龄对骨密度的影响。结果 应用雌激素治疗后1年内、1～3年、>3年L2-4的骨密度分别为(0.96±0.13) g/cm2、(0.92±0.13) g/cm2、(0.93±0.14) g/cm2，显著高于基线水平分别为(0.73±0.08) g/cm2、(0.70±0.13) g/cm2 、(0.75±0.07) g/cm2；治疗起始年龄<18岁组L2-4骨密度（0.96±0.14）g/cm2显著高于治疗起始年龄≥18岁组（0.90±0.10）g/cm2。结论 早期雌激素替代治疗可更有效地改善TS患者骨密度，但影响骨密度的其他因素仍需进一步深入探究。

特纳综合征患者肝功能异常的高发生率及其影响因素

李光玲 阳洪波 陈适 朱惠娟 龚凤英 吕翠君 马莹莹 潘慧

2016, 36(5):  698-701. 

摘要 ( 635 )   PDF (549KB) ( 497 )  

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目的 探讨特纳综合征（TS）患者肝功能异常的发生率及其影响因素。方法 2010年3月至2015年7月就诊于北京协和医院内分泌科矮小门诊的TS患者44例，年龄（13.6±5.0）岁；120例行健康体检的女童为正常对照，年龄(13.2±0.7)岁。全部测量身高、体质量，检测丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、总胆红素（TBil）等肝功能指标，44例TS患者均行染色体核型分析。结果 TS患者肝功能异常的发生率为18.2%，主要表现为ALT升高，对照组肝功能异常的发生率为3.3%。TS患者ALT正常组和异常组在年龄、BMI、核型方面未见显著性差异。结论 肝功能异常在TS患者中发生率高，建议定期检查肝功能。矮小伴不明原因肝功能异常的女性需注意筛查特纳综合征。

短篇综述

血管新生在肿瘤侵袭和器官纤维化中作用的最新认识

张晓毅 余文敏 刘静 陈平圣

2016, 36(5):  702-705. 

摘要 ( 599 )   PDF (554KB) ( 500 )  

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微血管密度与肿瘤侵袭力以及器官纤维化程度密不可分，血管新生是这两类疾病的共同靶点。然而，传统抗血管新生疗法由于肿瘤耐药性等原因而疗效有限，而以促血管新生的目标的抗纤维化疗法也因为伴随炎症、血管通透性改变等原因陷入瓶颈。本文探讨肿瘤和器官纤维化的在血管新生方面的内在关联。

CAR-T细胞在肿瘤临床试验中的研究进展

白仲添 王海平 严俊 刘小军 周文策 李汛

2016, 36(5):  706-710. 

摘要 ( 816 )   PDF (536KB) ( 468 )  

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以嵌合型抗原受体(CAR)为基础的细胞治疗近年成为肿瘤生物治疗领域最亮丽的明星。尤其是靶向CD19分子的CAR-T细胞在B淋巴细胞恶性肿瘤的临床治疗中取得了良好的疗效。本文通过总结国内外CAR-T细胞的临床试验数据，对其临床疗效和潜在的不良反应进行统计分析，并就CAR-T细胞的发生、临床应用及存在的问题进行阐述。

医学教育

导师制在超声专业住院医师规范培训的探索

江凌 高炜 陈文 崔立刚 赵博

2016, 36(5):  711-714. 

摘要 ( 653 )   PDF (578KB) ( 387 )  

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目的 探讨导师制在超声科住院医师规范化培训中的应用价值。方法 30名本科毕业住院医师，通过3年导师制的培养学习，导师不但在其培养过程中讲授专业理论课，还通过教学查房、导师“手把手”教学实践操作以及学生和导师组成小组一起进行文献回顾及病例讨论等多种形式，系统的对学生进行综合培养、带教、导师制的作用和效果通过问卷调查，考试成绩，以及住院医生对进入导师制培训体系以来的主观感受等来进行评价。结果 30名住院医师在培训前后两次客观评价测试结果显示培训后试卷正确率较培训前显著提高(P<0.05)。住院医师自身对导师制满意程度调查，非常满意为90%，满意为10%。住院医师参加北京市超声专业住院医师第一阶段考核成绩，理论合格率100%、实践合格率97%、读片合格率93%。结论 导师制培养体系是超声住院医师规范化培训体系中重要内容，能够培养出专业理论与临床实践能力都合格的住院医师。

临床医学生视角下的医学人文素养现状调查

赵峻 尤含笑 罗林枝 周欣 潘慧

2016, 36(5):  715-718. 

摘要 ( 216 )   PDF (566KB) ( 408 )  

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目的 了解临床医学生对医疗实践中医学人文素养现状的认知并提出改进建议。方法 对已参与临床实践的临床医学本科生、研究生和博士生采用问卷调查的方法收集信息（共回收184份问卷）。结果 1) 医患沟通以及医际沟通过程中医务人员存在人文素养不足；2) 目前医学院校对临床医学生人文教育投入不足；3) 大多数医学生愿意并且希望通过多途径进一步提高自身人文素质。结论 医学生对临床医学人文素养的诸多问题有相当清楚的认识，增设人文相关课程、定期举办讲座、提高薪资待遇、增大考核力度具有必要性和可行性。

精准医学模式下医学生临床与科研能力并重培养的思考

方红娟 钟历勇

2016, 36(5):  719-722. 

摘要 ( 184 )   PDF (640KB) ( 410 )  

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精准医学作为一种新的医疗模式，是生命医学发展的方向。目前临床医生普遍对其认识不足，需正确认识精准医学，并加强学习及应用。通过分析精准医学对医学生的要求，可以发现一个能胜任岗位的医学生必须具备以下特质：临床与科研能力并重、注重团队及合作精神、积极创新、拥有人文精神。对带教医师的培训、多学科协作联合教学查房、引入导师制和联合导师制等措施，可以让医学生既锻炼了临床能力，又学习和掌握了科研思维与相关的研究方法。