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2014年 第34卷 第1期    刊出日期：2014-01-05

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研究论文

NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达

甘自立 谌模武 林红 李勇 熊秋迎 刘丝荪 郭菲

2014, 34(1):  1-5. 

摘要 ( 882 )   PDF (1326KB) ( 678 )  

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目的 分析宫颈癌移植瘤小鼠的癌与癌旁组织中miR-15b和miR-16的表达状况以及NF-κB信号通路在宫颈癌癌旁组织活化情况，为宫颈癌的诊断和治疗提供新思路。方法 建立小鼠宫颈癌移植瘤模型，取癌组织与癌旁组织，以及正常的脂肪组织，用实时荧光定量PCR方法检测miR-15b和miR-16的表达，用免疫组化检测NF-κB（P65）蛋白的表达及定位。结果 移植瘤造模成功。miR-15b在宫颈癌组织中表达为32.21±3.67，明显高于癌旁组织的25.16±1.86和正常组织的1.00±0.12（P<0.05），癌旁组织也显著高于正常组织（P<0.05）；miR-16在宫颈癌组织中表达为28.63±2.34，明显高于癌旁组织的22.16±1.76和正常组织的1.00±0.12（P<0.05），癌旁组织也显著高于正常组织（P<0.05）。在正常脂肪组织中，NF-κB（P65）蛋白主要定位于胞质，而在癌组织与癌旁组织中，NF-κB（P65）蛋白主要位于胞核。结论 NF-κB通路及其相关的miR-15b和miR-16可能参与了宫颈癌发生的早期分子事件。

基于IPA@生物信息平台筛选维吾尔族宫颈癌前病变患者血浆预警蛋白

郭霞 伊力努尔?沙比提 玛依拉?卡米力江 刘开江 阿仙姑?哈斯木 哈丽丹?热依木 武贵臻 Abulizi Abudula

2014, 34(1):  6-10. 

摘要 ( 944 )   PDF (701KB) ( 686 )  

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目的 依托IPA@在线生物信息学平台探讨维吾尔族患者宫颈癌前病变的发生与癌变机理，寻找血浆预警蛋白。方法 运用IPA@在线生物信息学软件，针对前期研究中通过蛋白质组学方法筛选出的在维吾尔族妇女癌前病变宫颈内上皮瘤样病变CINⅡ和Ⅲ级患者血浆中31个差异蛋白进行生物学功能注释、调控网络分析、典型通路分析和生物标志物筛查分析。结果 IPA@分析发现CINⅡ/Ⅲ患者血浆中的差异蛋白的生物功能主要集中在炎症反应、细胞与细胞之间信号与作用和细胞生长与增殖，涉及的通路主要是急性期反应通路、JAK/Stat 通路和IL-4通路，并且筛选出2种生物标志性蛋白，它们是代谢相关蛋白（ApoAⅠ）、信号转导相关蛋白(mTOR)。结论 ApoAⅠ和mTOR可作为宫颈癌及癌前病变的候选血浆预警蛋白。

新疆汉族、维吾尔族HPV16E6基因变异与子宫颈癌及宫颈病变的关系

古丽娜尔·阿不拉 朱开春 玛依努尔·尼牙孜 马正海

2014, 34(1):  11-15. 

摘要 ( 1111 )   PDF (1151KB) ( 631 )  

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目的 探讨新疆地区汉族、维吾尔族宫颈癌及宫颈病变中HPV16型E6基因变异分布及频率，比较两个民族之间的差异。方法 对140例 HPV16阳性标本，设计E6基因特异性引物，通过PCR扩增HPV16E6全长基因，PCR产物直接测序，进行序列分析并与德国标准株对比，筛选突变位点。结果 123例汉族、维吾尔族妇女宫颈癌及宫颈病变标本中均存在HPV16E6变异株，其中突变率分别为：47.37%（27/57）和50%( 33/66)，E6突变位点主要是L83V、D25E、D64E、I73V、H78Y、D113E，其中L83V变异株在两个民族突变中占的比例均最高，汉族L83V突变频率为29.82%（17/57）显著低于维吾尔族的40.90%（27/66）（P﹤0.05）。而汉族D25E突变频率为19.30%（11/57）显著高于维吾尔族的7.58%（5/66）(P﹤0.05) ，D64E变异株在维族突变株中占的比例为6.1%，而汉族标本中未检出。结论 两个民族HPV16 E6基因变异发生的位置和变异发生的频率存在差异，维吾尔族人群中HPV16E6基因D64E变异株可能与该地区维吾尔族宫颈癌高发存在一定的关系。

敲低Txnip抑制高糖诱导的人肾小管细胞株凋亡

韦金英 史永红 任蕴卓 侯延娟 杜春阳 张连珊 段惠军

2014, 34(1):  16-21. 

摘要 ( 1198 )   PDF (1256KB) ( 505 )  

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目的 观察敲低Txnip对高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法 将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+质粒载体对照组及高糖+shRNA组。采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞ROS水平；Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、P38 MAPK、P-P38MAPK及细胞色素c的表达。结果 与正常糖组相比，高糖组肾小管上皮细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加（P<0.01），cleaved caspase-3和P-P38 MAPK表达增高，Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素c易位（P<0.05）。敲低Txnip能够显著抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3、和P-P38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素c易位（P<0.05）。 结论 敲低Txnip能够抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡可能是通过减少ROS产生，保护线粒体功能，抑制P38MAPK信号通路激活而实现的。

重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响

周建武 何昀 龚梦嘉 毕杨

2014, 34(1):  22-28. 

摘要 ( 128 )   PDF (1358KB) ( 536 )  

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目的 构建并筛选小鼠RARγ基因的siRNA腺病毒载体，并探讨抑制RARγ表达对小鼠肝脏祖细胞分化的影响。方法 设计3对特异性针对小鼠RARγ基因的siRNA序列，体外退火形成双链，与SfiⅠ酶切后的pSES-HUS质粒连接，随后在BJ5183中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组获得pAd-siRARγ重组腺病毒质粒，并在HEK293细胞中包装腺病毒Ad-siRARγ。腺病毒感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d，Real-time PCR及Western blot检测RARγ的表达，1 μmol/L ATRA诱导肝细胞分化，ALB-Gluc活性及PAS染色检测肝脏细胞分化的状态。结果 PCR、酶切鉴定均证实siRNA 正确克隆至腺病毒质粒中，测序结果与设计的siRNA序列一致。腺病毒在HEK293细胞中包装10 d可见红色荧光细胞的云雾状扩增，HP14.5d细胞的 48h腺病毒感染率为60%。其中，Ad-siRARγ2、3 可有效抑制小鼠HP14.5d细胞中RARγ的表达（p<0.05）。ATRA可诱导肝细胞分化，ALB-Gluc活性及PAS染色阳性细胞明显高于对照组，Ad-siRARγ2,3可显著抑制ATRA诱导的小鼠HP14.5d细胞的ALB表达和糖原合成能力（p<0.05）。结论 成功构建并筛选出能有效抑制RARγ表达的siRNA腺病毒，感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d能显著抑制ATRA诱导的肝细胞成熟分化。

敲减水通道蛋白1对小鼠雪旺细胞形态及水转运的影响

章杰 江华 刘安堂 朱鴷 张文俊 芦立轩

2014, 34(1):  29-35. 

摘要 ( 144 )   PDF (1207KB) ( 507 )  

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目的 探讨水通道蛋白1（AQP1）基因表达和雪旺细胞肿胀之间的关系。方法 细胞免疫荧光双标法验证小鼠面神经来源的原代雪旺细胞AQP1表达；应用慢病毒RNA干扰技术下调雪旺细胞AQP1表达；AQP1-shRNA感染雪旺细胞后，与CTRL组（scr-shRNA）比较，每天在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，连续6d；细胞容积测定量化AQP1-shRNA细胞与CTRL (scr-shRNA)细胞水含量变化；MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测AQP1-shRNA对雪旺细胞凋亡的影响。结果 小鼠面神经来源的原代雪旺细胞表达AQP1；构建的小鼠AQP1-shRNA慢病毒载体感染雪旺细胞后，能在mRNA和蛋白水平明显抑制AQP1表达（P<0.05）；AQP1-shRNA能使雪旺细胞形态皱缩，细胞水含量明显降低（P<0.01）；AQP1-shRNA细胞较CTRL组细胞增殖活力低（P<0.05），但不会引起雪旺细胞明显的凋亡。结论 AQP1是控制雪旺细胞快速水转运的主要因素，抑制AQP1表达可能提供一种临床治疗面神经水肿的新方法。

1例高胰岛素高血氨综合征诊断与治疗随访

陈适 肖新华 童安莉 王鸥 于康 邱正庆

2014, 34(1):  36-40. 

摘要 ( 166 )   PDF (805KB) ( 620 )  

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目的　探讨蛋白质负荷实验在1例高胰岛素/高血氨综合征患者诊断和治疗中的作用，以加深对这一罕见病例的认识。方法 系统报告北京协和医院诊治的1例高胰岛素/高血氨综合征患儿病例特点、诊治经过和随访。 结果　患儿平时血氨水平升高，自1岁始出现进食蛋白质食物后高胰岛素，低血糖表现，蛋白质负荷实验阳性，基因测序提示其谷氨酸脱氢酶基因第7外显子c.978G>A(R269H)突变。蛋白质、碳水化合物剂量选择实验提示合适的碳水化合物、蛋白质比例能预防患儿出现低血糖。随诊观察发现，饮食+二氮嗪治疗能有效防止患儿出现低血糖。结论　蛋白质负荷实验可协助诊断高胰岛素/高血氨综合征，避免摄入含有高亮氨酸的蛋白质以及食物中合适的碳水化合物、蛋白质比例为基础的治疗能有效预防该病患者低血糖的出现。

OCT4异构体在人胚胎干细胞和间充质干细胞中的表达

傅歆 孙雪健 曹蕊 董平 杨志岗 肖苒

2014, 34(1):  41-46. 

摘要 ( 137 )   PDF (2098KB) ( 561 )  

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目的 比较OCT4异构体（OCT4A、OCT4B、OCT4B1）及其调控因子在人胚胎干细胞（hESC）和人间充质干细胞（hMSC）中的表达。方法 利用RT-PCR、免疫荧光染色、流式细胞分析及体内/外分化实验，鉴定hESC及hMSC的生物学特性；应用real-time PCR、Western blot和流式细胞分析比较OCT4异构体及其转录因子NANOG, SOX2和mRNA结合蛋白LIN28在hESC及hMSC中的表达水平。结果 OCT4异构体mRNA在hESC和hMSC中均有表达，在hESC中的表达显著高于在hMSC中，并以OCT4A的差别最为显著（p<0.01）；在蛋白水平，hESC表达OCT4A和OCT4B-256aa，hMSC不表达OCT4异构体蛋白。hESC高表达OCT4的调控因子NANOG、SOX2和LIN28；hMSC低表达SOX2，不表达NANOG和LIN28。结论NANOG、SOX2和LIN28调控OCT4的表达，OCT4异构体在hESC和hMSC中的表达差异提示其可能是不同发育阶段干细胞自我更新和分化潜能等方面差别的主要因素之一。

Ezrin介导中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞株分泌黏蛋白增加

李琪 李娜 尤列.皮尔曼 维克多.科罗索夫 周向东

2014, 34(1):  47-52. 

摘要 ( 174 )   PDF (1055KB) ( 508 )  

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目的 探讨膜连接蛋白Ezrin在中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）诱导气道黏液高分泌的作用及相关调节机制。方法 以中性粒细胞弹性蛋白酶刺激培养的人气道上皮HBE16细胞，ELISA法、real-time PCR法测定刺激黏蛋白（MUC）5AC的蛋白及mRNA水平。免疫荧光法检测Ezrin蛋白含量。 结果 NE刺激30 min后MUC5AC mRNA表达增强，细胞中及培养上清中黏蛋白MUC5AC的含量均显著高于对照组（P<0.01）；转染Ezrin永久磷酸化载体pEGFP-N1-Ezrin-T567D的细胞经NE刺激后，胞质内磷酸化Ezrin表达明显增强，且胞膜分布增多。同时，细胞培养上清液中的MUC5AC蛋白含量亦显著高于单纯NE组（P<0.01）。遏制Ezrin磷酸化pEGFP-N1-Ezrin-T567A载体转染组在NE刺激后，Ezrin蛋白与pEGFP-N1-Ezrin-T567D组相比有明显减少，且未出现向胞膜聚集的趋势，同时分泌至培养上清的MUC5AC蛋白也有明显减少（P<0.01），同时伴随胞浆内MUC5AC蛋白有所增加（P<0.05）。结论 Ezrin蛋白参与了NE诱导的MUC5AC蛋白分泌，是气道上皮细胞MUC5AC分泌的重要调控分子。

系统性红斑狼疮患者外周血miR-7的表达及其意义

李扬 沈濂 叶燕霞 张烜

2014, 34(1):  53-57. 

摘要 ( 153 )   PDF (907KB) ( 629 )  

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目的 研究microRNA-7(miR-7)在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血的表达及其意义。 方法 20例SLE患者和20例性别年龄匹配的健康对照者，荧光定量PCR检测PBMC、B细胞、T细胞和单核细胞中miR-7的表达以及靶基因PTEN的mRNA水平, 通过电转染方法将miR-7的前体Pre-miR? miR-7 Precursor/抑制剂Anti-miR? miR-7 Inhibitor转染至SLE患者B细胞中，流式细胞检测B细胞增值功能。应用生物信息学方法及双荧光素酶报告基因系统预测并验证miR-7的靶基因。 结果 SLE患者PBMC及B细胞中miR-7的表达显著高于健康对照(p<0.01)。PTEN是miR-7的一个靶基因，转染miR-7的前体至SLE患者B细胞可抑制PTEN表达（p<0.05），促进B细胞增殖（p<0.05），转染miR-7抑制体则可以促进PTEN表达（p<0.05），抑制B细胞增值（p<0.05）。结论miR-7参与了SLE的发病机制，调控PTEN的表达，并介导了SLE患者B细胞的增殖，是SLE潜在的治疗靶点。

IFITM1 基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性

左强强 郑威楠 张金莉 李玉华 刘引引 龙海晨 潘泽民

2014, 34(1):  58-61. 

摘要 ( 144 )   PDF (520KB) ( 549 )  

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目的 探讨IFITM1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性以及早期诊断的可行性.分析IFITM1基因甲基化对mRNA表达的影响，方法 采用甲基化特异性PCR方法和HPV16，HPV18特异的PCR方法分别检测了40例正常子宫颈组织和40例新疆维吾尔族妇女子宫颈癌组织的IFITM1基因启动子甲基化情况和高危险性HPV的感染情况，并分析两个指标的相关性。用RT-PCR方法检测10例甲基化阳性和10例甲基化阴性的组织IFITM1基因的mRNA表达情况。结果 31例宫颈癌组织基因启动子甲基化，3例正常组织发生甲基化，在子宫颈癌中高危险性HPV的感染例数为27例，在正常组织中为5例。40例子宫颈癌组织中， HPV16，HPV18感染阳性的组织IFITM1基因甲基化的发生率增高(P<0.05)，在10例甲基化阳性的组织中IFITM1基因mRNA的表达水平明显低于10例甲基化阴性的组织（P<0.01）。结论 IFITM1基因启动子甲基化是宫颈癌发生的关键分子标志物，具有大规模临床筛选试验的价值。

JAK2/STAT3通路参与大鼠坐骨神经结扎神经病理性疼痛模型

薛照静 申乐 王之遥 黄宇光

2014, 34(1):  62-67. 

摘要 ( 153 )   PDF (1129KB) ( 558 )  

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目的 结扎大鼠双侧坐骨神经复制bCCI模型，观察JAK2/STAT3通路的激活情况。 方法 60只质量180~200g SD雌性大鼠随机分为3组, bCCI组，Sham组及Naive组。分别于bCCI手术术前1d，术后3、7、14和21d取腰段脊髓背角，并进行RT-PCR及Western blot观察通路中主要因子的mRNA 水平及蛋白水平的变化。 结果 bCCI组大鼠对机械、热刺激及冷丙酮刺激的痛觉阈值明显降低。与Sham组及Na?ve相比，bCCI组STAT3、SOCS3、JAK2及IL-6mRNA水平显著升高，且3组在不同时间点具有差异（P<0.05）。与Sham组及Na?ve相比，bCCI组P-STAT3、JAK2和SOCS3蛋白水平升高。结论 大鼠bCCI神经病理性疼痛模型JAK2/STAT3通路激活。

苯丙酸诺龙促进胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌

陈洁润 吴雅婷 冯乔 沈旺 冯乐平

2014, 34(1):  68-71. 

摘要 ( 157 )   PDF (574KB) ( 465 )  

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目的 探讨雄性激素苯丙酸诺龙在氧化应激条件下对胰岛细胞的作用，为2型糖尿病治疗提供理论依据。方法 将培养的NIT-1细胞按不同葡萄糖浓度（5.6、11.1、16.7和27.6 mmol/L）分为4组，分别用10 μg/mL苯丙酸诺龙处理48h，之后用流式细胞仪检测细胞周期；用Western blot 检测Nampt和FOXO1蛋白表达和用放射免疫法测定细胞胰岛素分泌。结果 用苯丙酸诺龙处理48 h后，1）低糖条件下细胞G0/G1期阻滞明显改善（p＜0.01）；2）高糖条件下细胞G2/M期阻滞得到缓解（p＜0.01）；3）高糖氧化应激状态下，苯丙酸诺龙促进胰岛细胞Nampt表达（p＜0.05）和抑制非磷酸化的FOXO1蛋白表达（p＜0.01），细胞分泌胰岛素增加。结论 苯丙酸诺龙能够在高浓度葡萄糖条件下改善胰岛细胞生存状况和促进胰岛素分泌，这些效应可能与促进细胞内Nampt表达和抑制FOXO1密切相关。

N-乙酰半胱氨酸减轻香烟烟雾提取物所致的A549细胞损伤

张强弩 焦宗宪 常嘉琛

2014, 34(1):  72-77. 

摘要 ( 131 )   PDF (1002KB) ( 499 )  

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目的 研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）对香烟烟雾提取物（CSE）暴露后的A549细胞的影响。方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率；用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化；用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化；用实时荧光定量PCR和Western Blot 技术检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达变化。结果 CSE致A549细胞存活的A值为0.55±0.04，显著低于对照组的0.78±0.03（P<0.05），NAC处理使A值显著上升至0.67±0.04（P<0.05），并消除了G1期阻滞，降低细胞凋亡率等。IGFBP-3的表达在CSE刺激后，有所升高，在接受NAC保护后，其表达水平有所降低（P<0.05）。结论 NAC可以抑制香烟烟雾提取物造成的A549细胞损伤，IGFBP-3可能在香烟烟雾提取导致细胞损伤的机制中发挥作用。

ATF4基因在小鼠动情周期中子宫内膜的表达

凌康 柴路维 何晓茜 姜蓉

2014, 34(1):  78-81. 

摘要 ( 170 )   PDF (922KB) ( 715 )  

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目的 探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠动情周期中子宫内膜的表达规律。方法 采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blot法分别检测小鼠子宫内膜中ATF4 mRNA和蛋白在动情前期、动情期、动情间期和动情后期的表达规律。结果 ATF4 mRNA在动情期表达显著高于其它3期(P<0.05);ATF4蛋白主要在腺上皮细胞和腔上皮细胞胞质表达，其表达规律与RT-PCR的结果基本一致。结论 ATF4在小鼠动情周期子宫内膜中呈动态表达,提示ATF4可能参与了动情周期子宫内膜变化的调控。

共培养人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞

罗二梅 张家文 胡笑珂 唐明乔 宇丽

2014, 34(1):  82-87. 

摘要 ( 149 )   PDF (1836KB) ( 615 )  

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目的 探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法 分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中，按1:4，1:3，1:2，1:1，2:1，3:1及4:1 的比例（hUC-MSCs：兔膝关节软骨细胞）共培养。倒置相差显微镜观察细胞的形态与增殖；甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色分别检测葡萄糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原(COL2-A1)（蛋白水平定性）；并对各组细胞爬片进行GAG、COL2-A1定量检测；同时用实时定量荧光PCR（pPCR）检测GAG、COL2-A1mRNA表达，观察共培养前后细胞的基质分泌情况。结果 共培养 21d 后，阳性对照组和实验组细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性； GAG、COL2-A1含量及mRNA表达量1:4实验组均要高于其他实验组和阳性对照组。结论hUC-MSCs和兔关节软骨细胞的共培养可明显促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化，且最佳共培养比例为1:4。

熊果酸减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤

孙爱平 孙书明 张国俊 王艳华 宋向凤

2014, 34(1):  88-92. 

摘要 ( 148 )   PDF (930KB) ( 576 )  

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目的 探讨熊果酸减轻脂多糖诱导的THP-1细胞损伤的作用及其机制。方法 以脂多糖诱导的THP-1 炎性细胞为模型，MTT法检测不同浓度的熊果酸( 0.1、1、5、10、20、40和80 μmol/L) 对细胞增殖的影响，RT-PCR 法检测TLR4、MCP-1和IL-6 mRNA 的表达，ELISA法检测MCP-1和IL-6表达，Western blot法检测P65、磷酸化P65蛋白表达，荧光素酶报告系统检测核转录因子κB(NF-κB)活性。结果 与对照组比较，LPS作用组能显著增高MCP-1、TLR4、IL-6 mRNA 和MCP-1、IL-6、P65、磷酸化P65蛋白的表达并上调NF-κB 活性(p<0.05)；与LPS单独作用组比较，熊果酸( 1和5 μmol/L)干预组能够显著降低MCP-1、TLR4、IL-6 mRNA 和MCP-1、IL-6表达水平并下调NF-κB 活性(p<0.05)。结论 熊果酸可能是通过下调NF-κB 活化减轻脂多糖诱导的THP-1 细胞的损伤。

重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应

张丰经 何红云 邓仪昊 杨开明

2014, 34(1):  93-97. 

摘要 ( 121 )   PDF (1055KB) ( 539 )  

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目的 将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠，研究其免疫效应，为结核病新疫苗的研发奠定基础。方法 将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒，以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组，构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4 (rBCG-IT)。将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠，分别于免疫后3、6、9和12周，用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平，XTT检测脾细胞增值反应, 流式细胞仪检测脾CD4+T、CD8+T细胞亚型的比例，ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生。结果 在免疫后3～12周，rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其它各组(P<0.01)，该组IFN-γ诱生量及CD4+T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组(P<0.01)。IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答。结论 重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答，可对其免疫保护作用进行深入研究。

食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡

高之峰 张建福 费素娟 汪诗卉 董秋菊 韩红霞

2014, 34(1):  98-103. 

摘要 ( 151 )   PDF (1280KB) ( 627 )  

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目的 观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响，并初步探讨其机制。方法 常规培养胃癌SGC7901细胞，单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用，MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率；Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot方法检测Bcl-2、Bax、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达。结果 食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖，其中1.0μmol/L 食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用最强，抑制率为65.32%±2.51%（P <0.01）；食欲素A组可见较多凋亡细胞：胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光，有明显的核固缩，SB408124干预后，凋亡细胞数量明显减少（P <0.05）；食欲素A作用后，凋亡率为59.52%±1.38%，而SB408124干预后，凋亡率降至38.96%±1.82%（P <0.05）；食欲素A可上调凋亡相关蛋白Bax、Cyt c及活化caspase-3的表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P <0.05），SB408124干预后，食欲素A作用减弱。结论 食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用；食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的。

人脂肪间充质干细胞对再生障碍性贫血T淋巴细胞的免疫调节作用

王椋 刘国强 徐敏 邢健 赵霞 韩芳 丁慧芳

2014, 34(1):  104-108. 

摘要 ( 108 )   PDF (815KB) ( 528 )  

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目的 研究人脂肪间充质干细胞(haMSCs)对再生障碍性贫血( AA)T淋巴细胞(TLCs)的作用，初步探讨其治疗AA的机制。方法 从人脂肪中提取并培养haMSCs；从AA患者外周血中分离T淋巴细胞(AA-TLCs）；将两者共培养后，MTT法检测细胞增殖；Realtime RCR和Western blot测定T-bet和GATA-3的表达，ELISA法检测上清IL-2、IL-4、IL-10和INF-γ的水平。结果 HaMSC呈时间依赖性的抑制AA-TLCs的增殖，AA-TLCs与haMSCs共培养3、5和7d后的抑制率分别为(34.94±10.11)%、(53.44±6.16)%和(68.13±15.24)%，(p<0.05)；haMSC能够下调AA-TLCs转录因子T-bet的表达，同时上调GATA-3的表达（p<0.05）；haMSCs能够升高Th2类细胞因子IL-4、IL-10的水平，降低Th1类细胞因子INF-γ、IL-2的水平。[MSCs+AA-TLCs组：IL-4 (88.6±15.2) ng/L、INF-γ (8.7±2.7) ng/L；AA-TLCs组：IL-4 (1.4±0.6) ng/L、INF-γ (41.5±3.7) ng/L；(p<0.05)]。结论 HaMSCs在体外对AA患者TLCs具有免疫调节作用，其机制可能是通过调节转录因子T-bet和GATA-3的表达从而抑制Th细胞向Th1细胞方向分化。

全麻苏醒拔管期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注可改善苏醒拔管质量

王静捷 陈广俊 罗爱伦 黄宇光

2014, 34(1):  109-112. 

摘要 ( 117 )   PDF (537KB) ( 631 )  

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目的 探讨丙泊酚联合瑞芬太尼全凭静脉麻醉患者全麻苏醒期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注对苏醒拔管质量的影响。方法 择期脊柱侧弯后路矫形手术患者40例，随机分为对照组（全麻苏醒期间停用所有药物，n=20）和瑞芬太尼组（全麻苏醒期间维持瑞芬太尼小剂量靶控输注，n=20）。记录两组患者苏醒时间、拔管时间，并观察苏醒拔管质量评分。结果 对照组患者苏醒时间为（12.76±3.56）min，拔管时间为（13.98±4.06）min；瑞芬太尼组患者苏醒时间为（13.14±3.87）min，拔管时间为（14.21±4.77）min，组间比较无显著差异。但对照组患者苏醒拔管质量评分为1、2、3、4和5分的患者例数分别为1、10、5、3和1例；瑞芬太尼组患者苏醒拔管质量评分为1、2、3、4和5分的患者例数分别为5、12、3、0和0例，组间比较有显著差异（P<0.05）。结论 丙泊酚联合瑞芬太尼全凭静脉麻醉全麻苏醒拔管期间维持小剂量瑞芬太尼靶控输注可以改善苏醒拔管质量，且不延长苏醒拔管时间。

研究短文

人乳头瘤病毒的环介导等温扩增检测法

罗永富

2014, 34(1):  113-114. 

摘要 ( 279 )   PDF (396KB) ( 482 )  

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福建泉州地区2371例手足口病的病原学检测分析

许幼仕 许荣海 黄美虹 傅清流 彭维林 黄秋生

2014, 34(1):  115-116. 

摘要 ( 131 )   PDF (432KB) ( 473 )  

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短篇综述

EGFR-TKI耐药后的治疗策略研究进展

韩尚容 樊境朴 潘燕 李学军

2014, 34(1):  117-120. 

摘要 ( 201 )   PDF (517KB) ( 727 )  

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EGFR-TKI用药一段时间后出现的耐药现象是目前临床治疗的难题。本综述列举了EGFR-TKI耐药机制并介绍了多HER通路抑制、EGFR与VEGFR双通路抑制、作用于T790M突变靶点、抑制C-MET、促进PTEN（抑制PI3K）的表达及下游信号途径以及多种新型药物的抗EGFR-TKI耐药作用。

无效造血与铁过载

王璐 张倩 韩冰

2014, 34(1):  121-124. 

摘要 ( 253 )   PDF (520KB) ( 946 )  

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铁过载是指体内铁负荷过量，可伴或不伴器官功能障碍。在继发性铁过载疾病中，除外输血，一组表现为无效造血的贫血性疾病，即使无输血依赖，也可发生铁过载。目前发现铁调素等分子在铁过载的发生中发挥重要作用。本文参考目前国内外最新研究，主要阐述无效造血导致铁过载的机制及最新进展。

星形细胞上调基因-1研究进展

张婷 杨军

2014, 34(1):  125-129. 

摘要 ( 133 )   PDF (990KB) ( 580 )  

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星形细胞上调基因-1（AEG-1）在多种恶性肿瘤中显著高表达，在肿瘤的发生、增殖、血管生成、抗凋亡、侵袭转移及抗药性等多方面发挥重要作用，还参与炎性反应和自然免疫过程。研究表明AEG-1与PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin等多种信号通路相关，同时参与RNA诱导沉默复合体介导的基因沉默。因此，AEG-1有望成为肿瘤靶向治疗的新靶点。

NOX4是肺纤维化的潜在治疗靶点

孙宝迪 聂时南

2014, 34(1):  130-133. 

摘要 ( 363 )   PDF (513KB) ( 699 )  

相关文章 | 计量指标

肺纤维是一种高致死率的难治性疾病，TGF-β1可激活并上调NOX4 mRNA的表达，继而诱导机体产生大量ROS，而ROS可进一步激活Smad，参与介导TGF-β1/Smad信号通路，最终促使肺纤维化的发生。而通过各种技术手段阻断NOX4基因表达可干扰TGF-β1/Smad信号通路从而阻断肺纤维化，所以NOX4可能是肺纤维化进程中最具有前景的治疗靶点。

嗅素结构域家族蛋白4在常见消化系统肿瘤中的研究进展

喻敏 吕农华

2014, 34(1):  134-137. 

摘要 ( 161 )   PDF (518KB) ( 543 )  

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嗅素结构域家族蛋白4 (OLFM4)可表达在人类的许多肿瘤尤其是消化系统肿瘤中，其在消化系统肿瘤中的表达高于正常组织，但在进展期和晚期癌灶中的表达下调，提示OLFM4在肿瘤早期可以通过抗凋亡作用促进肿瘤的发生，但晚期可能具有抑制肿瘤转移的作用，体现OLFM4在肿瘤的不同病理阶段存在不同生物学作用。

癌症组织中miR-100的表达变化和靶点研究进展

周韶梅 盛望 曾毅 李泽琳

2014, 34(1):  138-141. 

摘要 ( 156 )   PDF (481KB) ( 466 )  

相关文章 | 计量指标

miR-100序列高度保守，在实体瘤的多数报道中，miR-100表达降低，调高miR-100的表达对肿瘤细胞起到抑制作用。但有报道miR-100表达升高与肿瘤的复发有关。miR-100表达量的多少与病理分期和病情进展的关系，也存在着分歧。目前已证实的miR-100的靶点有数种，对肿瘤细胞分别起到抑制增值、导致细胞周期停滞、促进调亡，增加癌细胞对放化疗的敏感性等作用。

医学教育

基于问题的学习（PBL）在医学教育中的利与弊

高雪

2014, 34(1):  142-144. 

摘要 ( 309 )   PDF (473KB) ( 853 )  

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基于问题的学习（PBL）已成为国际上较流行的一种教学方法。它强调通过学习者的合作和自主学习来解决隐含在问题背后的科学知识。对于激发学生的学习兴趣，培养学生发现问题、解决问题的能力大有裨益，但PBL在教学中也存在一定的弊端，如果在教学的实际操作中不加以避免，会极大影响PBL教学真谛的体现。本文主要针对PBL在教学中利与弊以及如何克服其弊端加以阐述。