当期目录

2013年 第33卷 第11期    刊出日期：2013-11-05

上一期    下一期

间充质干细胞与皮肤损伤修复专题

人羊膜对皮肤创伤修复作用的研究进展

郎宏鑫 庞希宁

2013, 33(11):  1367-1370. 

摘要 ( 941 )   PDF (567KB) ( 747 )  

相关文章 | 计量指标

羊膜作为一种良好的生物介质已被广泛应用于外科创伤修复的研究。羊膜可以作为负载干细胞的载体,可以作为细胞因子的供体,也可以作为生物敷料，通过提供培养环境、释放细胞因子发挥作用。

人羊膜间充质干细胞的超微结构观察

庞希宁 王竟 施萍 孟涛 霍双枝 张殿宝 谭丽萍

2013, 33(11):  1371-1376. 

摘要 ( 1009 )   PDF (1355KB) ( 674 )  

相关文章 | 计量指标

目的 观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法 分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC) ，进行传代培养、扩增，在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC 进行流式检测和鉴定细胞表型，并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。结果 人AMSC 呈梭形和多角形;高表达表面标志CD44，CD90，CD105和波形蛋白，不表达CD34和CD45。扫描电镜下可见细胞表面有大量小泡和微绒毛突起；透射电镜下见到胞核较大，呈圆形或椭圆形；胞质内线粒体、粗面内质网和高尔基体等细胞器数量丰富，有较多小泡。结论 从羊膜中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性的超微结构。丰富的粗面内质网和高尔基体，提示，AMSC具有产生大量分泌蛋白的功能，可能是羊膜间充质干细胞旁分泌作用的基础。

人脂肪间充质干细胞对皮肤创伤修复的作用

刘晓玉 王瑞 张涛 庞希宁 施萍

2013, 33(11):  1377-1381. 

摘要 ( 1066 )   PDF (1377KB) ( 1011 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法 分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD90、CD105、CD34和CD45的表达，并分别置于骨、软骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化，检测其多向分化潜能。在实验小鼠背部制备一个面积为1cm×1cm的皮肤创面，将磁性纳米颗粒标记的hADSCs以皮内注射方式移植到小鼠创面四周。分别于伤后0、7和14d观察创面愈合情况, 并与对照组进行比较分析。结果 人脂肪间充质干细胞表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45，具有骨，软骨，脂肪诱导分化潜能；实验小鼠皮肤创伤后3d开始，可见各组创面逐渐缩小，伤后21d创面愈合。移植组于创伤后第7d创面愈合率为（74.6%±4.1%），14d为（96.5%±1.47%），均显著高于对照组7d的（26.7%±1.9%），14d的（47.3%±2.3%），（P＜0.05）。结论 hADSCs移植能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。

聚乙烯亚胺包被的Fe3O4磁纳米颗粒对hAMSCs生物特性的影响

王瑞 庞希宁 施萍 刘晓玉 王竟 苏航

2013, 33(11):  1382-1386. 

摘要 ( 796 )   PDF (1143KB) ( 519 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨聚乙烯亚胺（PEI）包被的超顺磁性氧化铁（SPIO）标记人羊膜间充质干细胞( hAMSCs)的最佳方法并检测hAMSCs的增殖。方法 分别用含铁浓度为6、8、10和12mg/L的 PEI-SPIO 标记体外培养的 hAMSCs ，利用普鲁士蓝染色法和原子吸收分光光度法对PEI-SPIO 的标记情况进行分析鉴定，将未标记组设为对照组；应用 MTT 法检测PEI-SPIO 标记后 hAMSCs 的增殖活性。结果 hAMSCs经PEI-SPIO标记后，细胞内可检测到大量铁颗粒。PEI-SPIO标记具有浓度依赖性；10 和12mg/L浓度的 PEI-SPIO 明显抑制细胞增殖活力(P <0. 05)。结论 浓度为 8mg/L 的 PEI-SPIO标记 hAMSCs 可获得良好的标记效果，并且不影响细胞的增殖活力。

水通道蛋白1促进人羊膜间充质干细胞的迁移

张涛 庞希宁 施萍 王竟 王喜良

2013, 33(11):  1387-1390. 

摘要 ( 707 )   PDF (784KB) ( 611 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨水通道蛋白1（AQP1）在人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）迁移中的作用。方法 免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot检测hAMSCs AQP1的表达，siRNA干扰AQP1后，应用Transwell小室检测hAMSCs的迁移能力。结果 hAMSCs细胞膜上AQP1表达阳性。siRNA干扰AQP1 48h后AQP1 mRNA表达水平降低60.13%； AQP1的蛋白表达水平降低40.42%。siRNA干扰组穿过细胞数目为23.7±1.45显著低于对照组的33.15±1.15（P<0.01）。 结论 AQP1促进人羊膜间充质干细胞的迁移，推测AQP1参与创伤的修复过程。

EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析

庞希宁 李彩虹 施萍 王竟 刘晓玉 张涛 张殿宝 赵峰

2013, 33(11):  1391-1397. 

摘要 ( 727 )   PDF (861KB) ( 673 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨表皮生长因子（EGF）对人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）基因表达谱影响及分子机制。方法 采用基因表达谱测序（Illumina RNA-Seq）技术和生物信息学分析方法，对100 ng/ml EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对，确定hAMSCs基因表达谱，RT-PCR检测进行验证。结果 筛选出差异表达基因104个（FDR≤0.001 和 |log2Ratio|≥1），其中上调差异表达基因56个，下调差异表达基因48个； GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异（P≤0.05）；KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异（Q ≤0.05），RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致。结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化，显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复的过程中具有重要作用。

聚乙烯亚胺包被的Fe3O4磁纳米颗粒对hADSCs生物学特性的影响

王瑞 刘晓玉 庞希宁 施萍

2013, 33(11):  1398-1403. 

摘要 ( 868 )   PDF (1708KB) ( 533 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨聚乙烯亚胺(PEI)包被的超顺磁性氧化铁(SPIO)对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)生物学特性的影响。方法 从人皮下脂肪组织中分离、培养hADSCs并鉴定，选取第3代hADSCs，分别用含铁浓度为6、8、10和12mg/L的DMEM/F12培养液共孵育。通过普鲁士蓝染色、 MTT细胞增殖实验、台盼蓝染色及多向分化诱导实验来探讨PEI-SPIO标记后，hADSCs的标记能力、细胞增殖能力和分化能力。结果 1）当铁终浓度为8、10和12mg/L时，PEI-SPIO对hADSCs的标记率为99% ，当铁终浓度<8mg/L时，PEI-SPIO对hADSCs的标记率为96% 。2）当铁终浓度为6和8mg/L时， PEI-SPIO标记的hADSCs的活细胞比率为99%，而当铁终浓度为10和12mg/L时，活细胞比率为(79.03±2.25)%和(70.23±1.36)%，显著低于对照组(P<0.01)。3）当铁浓度为10和12mg/L时，在诱导hADSCs分化过程中，细胞绝大多数死亡。结论 铁浓度8mg/L为PEI-SPIO标记的最适宜浓度，既能高效的标记hADSCs，又不影响hADSCs的细胞增殖、多向分化能力等生物学特性。

EGF促进人羊膜间充质干细胞迁移上调MMP14和IL-1β表达

谭丽萍 庞希宁 施萍 王竟 王喜良

2013, 33(11):  1404-1409. 

摘要 ( 886 )   PDF (955KB) ( 619 )  

相关文章 | 计量指标

目的 研究表皮细胞生长因子（EGF）促进人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）迁移过程对基质金属蛋白酶14（MMP14）和白细胞介素1β（IL-1β）表达的影响 探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制 方法 贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF对hAMSCs迁移能力影响；Western blot和 Real-time PCR检测MMP14和IL-1β蛋白及mRNA表达 结果 原代细胞表达间充质干细胞表面标记CD44,不表达CD45；不同浓度EGF作用hAMSCs 24h 100μg/LEGF迁移指数最大为2.0；100μg/LEGF作用hAMSCs12、24和48h迁移指数为1.6、2.0和1.7； MMP14蛋白表达12h为（0.81±0.20）显著高于对照组的（0.63±0.12）（P＜0.05) ； IL-1β蛋白表达48h为（0.55±0.16）显著高于对照组的（0.30±0.05）(P＜0.05) MMP14和IL-1βmRNA表达上调显著高于对照组(P＜0.05) 结论 EGF促进hAMSCs迁移 上调MMP14和IL-1β表达；MMP14、IL-1β和EGF协同激活MAPK/ERK、P13K/AKT信号通路参与调控EGF促进hAMSCs迁移。

人羊膜间充质干细胞储备库的构建

庞希宁 刘晓玉 施萍 王竟 林学文 张殿宝 谭丽萍

2013, 33(11):  1410-1417. 

摘要 ( 876 )   PDF (1906KB) ( 716 )  

相关文章 | 计量指标

目的 构建人羊膜间充质干细胞库，为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法 将胎盘冲洗干净后，分离出羊膜组织，从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞（hAMSCs）。用MTT 法检测细胞生长方式，流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记，使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力，细胞周期等鉴定其生物学特性，将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价。结果 羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染。细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105，不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR。在不同的条件培养基培养状态下，细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化。细胞大多数处于G1期，仅少数细胞处于活跃的增殖期G2；建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合（p＜0.05）。结论 所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞。羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性。初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系。

人2型糖尿病皮肤角质形成细胞的无血清培养及纯化

张殿宝 王竟 庞希宁 施萍 苏航

2013, 33(11):  1418-1421. 

摘要 ( 720 )   PDF (639KB) ( 868 )  

相关文章 | 计量指标

目的 体外原代无血清培养人2型糖尿病皮肤角质形成细胞，并进行纯化。方法 采用中性蛋白酶-胰蛋白酶两步消化法分离人2型糖尿病皮肤角质形成细胞，使用无血清培养基进行原代培养，通过两步消化传代纯化细胞，使用倒置相差显微镜观察细胞生长状态，WST-8法测定细胞增殖曲线，流式细胞术检测其表型和纯度。结果 无血清培养并纯化的角质形成细胞呈典型的上皮形态，第3代角质形成细胞增殖曲线为S形，对数增长期的平均倍增时间为36.9 hours，角蛋白阳性率为98.9 %。结论 建立高纯度的人2型糖尿病皮肤角质形成细胞的无血清培养方法。

普罗布考减轻糖基化终末产物诱导人真皮成纤维细胞NF-κB活化及ICAM-1表达

王哲 张殿宝 施萍 刘晓玉 庞希宁

2013, 33(11):  1422-1425. 

摘要 ( 870 )   PDF (578KB) ( 572 )  

相关文章 | 计量指标

目的 观察普罗布考对糖基化终末产物（AGEs）诱导成人真皮成纤维细胞（Fb）细胞核因子κB（NF-κB）活化与ICAM-1表达的影响。方法 取足部创面皮肤进行Fb培养。实验分4组：对照组、AGE-BSA作用组（AGE-BSA浓度100 mg /L）、高浓度普罗布考组（100μmol /L普罗布考+100 mg /L AGE-BSA）、低浓度普罗布考组（50μmol /L普罗布考+100 mg /L AGE-BSA）。光镜下观察细胞形态学改变，测定细胞中丙二醛 (MDA)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)活性，应用Western blot检测细胞核NF-κB P65蛋白和总ICAM-1蛋白表达。结果1）与对照组相比，AGE-BSA作用组Fb形态改变，核蛋白NF-κB P65表达明显增加（P<0.01），细胞总ICAM-1表达明显升高（P<0.05）；普罗布考可在不同程度纠正上述变化。2）普罗布考显著抑制AGE-BSA诱导Fb MDA 含量增加和 SOD活性下降（P<0.05）；普罗布考能抑制AGE-BSA诱导Fb NF-κB 和ICAM-1蛋白表达水平上升。结论 普罗布考对AGE-BSA诱导Fb的保护作用可能是通过抑制NF-κB活化以及减低ICAM-1表达来实现的。

TGF-β/Smads信号传导通路与microRNA相互作用的研究进展

赵峰 庞希宁 施萍

2013, 33(11):  1426-1429. 

摘要 ( 985 )   PDF (482KB) ( 554 )  

相关文章 | 计量指标

TGF-β/Smads信号传导通路与微小RNA之间具有广泛的相互作用。TGF-β/Smads信号传导通路在microRNA基因的表观遗传学、转录及转录后加工等过程都具有调控作用；而microRNA也从转录后水平抑制TGF-β/Smads信号传导通路的相关基因表达。二者的相互关系与人类多种疾病包括组织纤维化、瘢痕愈合和肿瘤的发生发展密切相关。

研究论文

过表达DJ-1减轻鱼藤酮引起MN9D细胞线粒体损伤和细胞凋亡

高华 隋雷鸣 谷利 杨巍巍 鲁玲玲 赵莎莎 杨慧

2013, 33(11):  1430-1434. 

摘要 ( 958 )   PDF (1429KB) ( 660 )  

相关文章 | 计量指标

目的 观察过表达DJ-1蛋白能否保护MN9D细胞抵抗鱼藤酮所致的线粒体损伤和细胞凋亡。方法 在MN9D细胞中分别过表达野生型DJ-1(WT)和L166P突变型DJ-1(L166P)，随后给予鱼藤酮处理。MTT法观察细胞活力、JC-1染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)以及流式细胞仪AnnexinⅤ+PI 染色和TUNEL染色观察凋亡。结果 单纯鱼藤酮处理组细胞活力下降48.2%±6.4%，而过表达WT时，加入鱼藤酮后细胞活力仅下降22%±3.7%(P<0.05)，过表达L166P组跟单纯鱼藤酮组无显著性差异；鱼藤酮引起MN9D细胞ΔΨm下降，过表达WT则可以部分恢复ΔΨm，L166P无此作用；过表达WT-DJ-1组凋亡率分别为5.4%和9.7%，较单纯鱼藤酮处理明显下降(P<0.05)，而转染L166P细胞凋亡率跟鱼藤酮组无差异，TUNEL实验证实了同样的结果。结论 过表达野生型型DJ-1能缓解鱼藤酮对MN9D细胞的损伤，具有线粒体保护功能，减少细胞凋亡的发生，而突变型L166P则无此作用。

以α甘露聚糖肽为佐剂的EV71全病毒灭活抗原黏膜免疫小鼠的抗体应答

荆晶 孙强 冯素玲 赵兴华 廖怡然 王冰 黎卫平

2013, 33(11):  1435-1439. 

摘要 ( 1007 )   PDF (796KB) ( 622 )  

相关文章 | 计量指标

目的 肠道71型全病毒灭活抗原(EV71 Ag)联合α-甘露聚糖肽（PA）佐剂滴鼻免疫，观察全身免疫应答及持续时间。 方法 5~6周龄BALB/c雌性小鼠随机分为阴性对照组，阳性对照组，高剂量疫苗组，低剂量疫苗佐剂组和高剂量疫苗佐剂组，每组10只。阴性对照组以PBS滴鼻，阳性对照组以EV71Ag肌注给药，免疫组以EV71 Ag单独和不同剂量分别配伍PA滴鼻给药。首次给药后第0、2、3、4、5和6周采集血清及鼻肺灌洗液，ELISA法检测血清特异性IgG抗体水平及鼻肺灌洗液sIgA抗体水平，MTT法检测淋巴细胞增殖，中和抗体实验检测小鼠血清中和抗体水平。结果 各滴鼻组小鼠血清中均产生一定水平的特异性IgG抗体，高剂量疫苗佐剂组第三次免疫后其血清IgG（2.477±0.500）可达到阳性对照组（3.040±0.120）的80%，佐剂组体外淋巴细胞增殖率较阳性对照组有显著增高(P<0.05)，各滴鼻组血清中和抗体滴度均>8。结论 EV71全病毒灭活联合α-甘露聚糖肽佐剂免疫小鼠可诱导全身免疫应答，且α-甘露聚糖肽佐剂可增强其作用。

hTERT和Survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用

王平 肖琳 董俊红 孙凤祥 蒋吉英 王守训

2013, 33(11):  1440-1445. 

摘要 ( 803 )   PDF (1222KB) ( 555 )  

相关文章 | 计量指标

目的 构建人端粒酶反转录酶（hTERT）和生存素（Survivin）基因表达的ＲＮＡ共干扰载体，并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和Survivin基因的干扰作用。 方法 根据Genbank提供的hTERT和 Survivin cDNA序列，设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列，构建特异性干扰hTERT基因和Survivin基因的重组体pGenesil-1.1-Survivin、pGenesil-1.2-hTERT，酶切、测序鉴定正确后，两个重组体均用HindIII和BamHI双酶切，将pGenesil-1.1-Survivin回收大片段，pGenesil-1.2-hTERT回收小片段，将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接，即构建成重组体pGenesil1.1-Survivin-hTERT。将3个重组体分别转染SW480细胞，RT-PCR检测细胞中hTERT和Survivin基因表达水平，MTT检测对SW480细胞增殖的影响。 结果 构建的各质粒经限制性酶切及DNA 测序均证明其质粒构建正确，RT-PCR检测hTERT和Survivin基因表达水平明显降低(P<0.05)，各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。 结论 靶向Survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功，为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础。

miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤

钟洁 李洁霏 郭颖 韩松 尹艳玲 李淑娟 李俊发

2013, 33(11):  1446-1451. 

摘要 ( 1503 )   PDF (928KB) ( 603 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研。方法 离体培养N2A细胞，采用3h OGD/24h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型，3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率，蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达，实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达，荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3＇非翻译区(UTR)的直接调控作用。 结果 miR-378在N2A细胞内表达水平，随着3h OGD复糖复氧时间的增加，而显著降低(p<0.05，n=5)；在3h OGD/24h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中，上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(p<0.05，n=6)；而在非OGD条件下，miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响；同样，在3h OGD/24h复糖复氧条件下，miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(p<0.05，n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平；共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3＇-UTR的荧光素酶报告基因的表达(p<0.05，n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平，来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤，所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。

脑内源性cPKC gamma水平影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤

李洁霏 章欣欣 钟洁 杨璇 李筠 韩松 李俊发

2013, 33(11):  1452-1459. 

摘要 ( 1065 )   PDF (1705KB) ( 862 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨脑内源性经典型蛋白激酶C(cPKC)γ 表达水平对脑中动脉阻塞(MCAO)/再灌注(R)致缺血性脑卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度的影响。方法 利用cPKCγ基因野生型(WT)、杂合型(HET)和敲除型(KO)小鼠，建立小鼠1h MCAO/R 24h和7d缺血性脑卒中模型，借助Western blot蛋白印迹、2,3,5-氯化三苯基四唑(TTC)染色、神经行为学测试等技术方法，检测脑内源性cPKC?蛋白表达水平、脑梗死体积和神经功能损伤情况。结果 MCAO/R 1h/24h和7d可使WT、HET和KO小鼠脑出现明显的梗死灶和神经功能损伤；具有双拷贝基因的WT小鼠脑内cPKC?蛋白表达量存在个体差异的同时，只有单拷贝基因的HET小鼠脑内cPKC?蛋白表达水平约为WT型小鼠的30%~100%，而非简单的50%；脑内源性cPKCγ蛋白表达量与卒中脑梗死体积大小呈明显的负相关性，且神经功能损伤程度随着脑内cPKCγ蛋白表达水平的增高而明显减轻。结论 脑内源性cPKCγ蛋白表达水平可影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度。

GRP78和caspase-12在支气管肺发育不良大鼠肺组织中的表达及意义

张婷 卢红艳 王秋霞 高楚楚

2013, 33(11):  1460-1464. 

摘要 ( 734 )   PDF (906KB) ( 723 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨内质网应激（ERS）相关蛋白GRP78和caspase-12在支气管肺发育不良（BPD）大鼠肺组织中的表达及意义。方法 利用早产新生大鼠持续高氧暴露复制BPD模型。将48只SD早产鼠随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于85％O2中，空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于建模后7、14和21 d取肺组织，HE染色观察肺组织病理改变并行辐射状肺泡计数(RAC)，TUNEL法检测细胞凋亡，实时荧光定量RT-PCR和Western blot技术分别检测GRP78和caspase-12 mRNA和蛋白表达。结果 高氧组早产大鼠出现肺结构简单化，肺泡变大及数量减少等类似BPD病理学特征。与同日龄空气组相比，高氧组RAC明显减少，细胞凋亡明显增加，GRP78和caspase-12 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01)，且随高氧暴露时间延长，呈逐渐上升趋势。结论 GRP78和caspase-12表达增加可能与BPD发生发展有关。

L-茶氨酸减轻叠氮钠诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y线粒体的损伤

吴波拉 虞希冲 杜冠华

2013, 33(11):  1465-1469. 

摘要 ( 954 )   PDF (1500KB) ( 547 )  

相关文章 | 计量指标

目的 研究L-茶氨酸对叠氮钠诱导的人神经母细胞瘤（SH-SY5Y）线粒体损伤的影响其机制。方法 将不同浓度的L-茶氨酸及NaN3与SH-SY5Y细胞株共同孵育，用MTT法测定细胞存活力，以JC-1测定法和激光共聚焦显微镜来观察线粒体膜电位，Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素c蛋白表达水平。结果 （1）随着NaN3浓度的增高，细胞活性逐步降低，提前2h给予茶氨酸（0.25、0.50和1.00 mmol/L)能明显降低NaN3 (0.25mmol/L)孵育24h对细胞的毒性和逆转线粒体跨膜电位的下降（p<0.05）；（2）茶氨酸在0.25~1.00mmol/L浓度范围内能显著逆转NaN3诱导的SH-SY5Y细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素c蛋白表达水平的升高（p<0.05）。结论 茶氨酸可以通过稳定SH-SY5Y细胞线粒体膜电位，减轻细胞线粒体的损伤。

神经调节蛋白-1β在压力超负荷大鼠肥大心肌组织中的表达下降

刘延峰 刘小娟 惠起源

2013, 33(11):  1470-1474. 

摘要 ( 850 )   PDF (832KB) ( 630 )  

相关文章 | 计量指标

目的 研究NRG-1β在压力超负荷心肌肥大大鼠心肌中的变化。方法 复制心肌肥大模型，将模型及假手术动物各随机分成2组：4周模型组（4wM）和周模型组（8wM组）。采用心动超声及血流动力学评价心功能；Masson染色观察心肌结构；放射免疫法检测心肌中血管紧张素II（AngII）含量；Real time-PCR及Westrrn blot检测心肌中神经调节蛋白-1（NRG-1β）mRNA及蛋白的表达。结果 1） 和4周对照组（4wC组）比较，4wM组左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率（LVFS）、左室收缩末压（LVESP）、左室内压最大上升和下降速率（±dP/dtmax）下降（P <0.05），左室收缩末内径（LVEDD）、舒张末内径（LVESD）、左室舒张末压（LVEDP）及心肌胶原容积分数（CVF）增高（P <0.05，P <0.01），心肌中AngII表达增加（P <0.01）。2）和8周模型组（8wC组）比较，8wM组LVEF、LVFS、LVESP、±dP/dtmax下降（P <0.01）， LVEDD、LVESD、LVEDP及CVF增高（P <0.05，P <0.01），心肌中AngII表达增加， NRG-1βmRNA及蛋白表达下降（P <0.01）。结论 NRG-1β在压力超负荷心肌肥大大鼠心肌中表达下调，可能参与了压力超负荷所致心肌肥大的发生和发展。

卡维地洛对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌重构中TGF-β/Smads信号转导通路的作用

任漪 路明 王静 刘春梅

2013, 33(11):  1475-1479. 

摘要 ( 915 )   PDF (1042KB) ( 609 )  

相关文章 | 计量指标

目的 研究TGF-β/Smads信号转导通路在异丙基肾上腺素诱导的心肌重构中的作用及卡维地洛的治疗机制。方法 30只SD大鼠，随机分为3组：20只SD大鼠背部皮下注射异丙基肾上腺素5mg/(kg?d) 10d，建立心肌重构模型。随机分为2组，模型组和卡维地洛组。予卡维地洛组连续灌胃卡维地洛10mg/(kg?d) 4周。4周后测心重指数（CWI）；HE、Masson染色观察心肌组织病理变化；半定量RT-PCR法及免疫组化染色检测心肌组织中TGF-β1、Smad3、Smad7 m-RNA及蛋白表达情况。结果 模型组可见心肌细胞肥大、伸长，肌质变性，核大、深染，Masson染色可见心肌胶原纤维明显增多，治疗组大鼠心肌细胞病理改变较模型组明显减轻；CWI：模型组较对照组CWI升高（P＜0.01），治疗组与模型组比较，CWI下降（P＜0.01）；模型组较对照组TGF-β1及Smad3mRNA和蛋白的表达均增多（均为P＜0.01），Smad7mRNA和蛋白表达减少（分别为P＜0.01和P＜0.05）；治疗组与模型组比较，TGF-β1及Smad3mRNA和蛋白表达均降低（P＜0.01和P＜0.05），Smad7 mRNA和蛋白表达增加（P＜0.01和P＜0.05）。结论 TGF-β/Smads信号通路参与了异丙肾诱导的心肌重构，阻断该通路可能是卡维地洛抑制心肌重构的机制之一。

蛋白组学技术在检测肾血管平滑肌脂肪瘤血清差异蛋白中的应用

董德鑫 李汉忠 张玉石

2013, 33(11):  1480-1483. 

摘要 ( 896 )   PDF (710KB) ( 607 )  

相关文章 | 计量指标

目的 应用WCX磁珠联合MALDI-TOF MS 技术对肾血管平滑肌脂肪瘤进行血清差异蛋白实验，寻找显著性表达的差异蛋白，以提高肾血管平滑肌脂肪瘤的检出率。 方法 应用磁珠联合MALDI-TOF MS技术对肾血管平滑肌脂肪瘤血清进行差异蛋白研究，筛选出肾血管平滑肌脂肪瘤多个血清差异蛋白，并应用遗传算法建立诊断模型。结果 筛选出肾血管平滑肌脂肪瘤与对照组之间差异蛋白峰142个, 具有较明显差异的蛋白峰13个（P<0.05）。利用ClinProTools2.2软件通过遗传算法优化选择，筛选出符合条件的15个差异蛋白峰建立诊断模型，交叉验证识别能力为100%。结论 建立了肾血管平滑肌脂肪瘤血清差异蛋白的诊断模型，有助于提高肾血管平滑肌脂肪瘤的检出率。

NH4Cl对人肝细胞系LO2氨转运相关蛋白RHCG和AQP8表达的影响

关克磊 阚全程 余祖江 李晶晶 司方莹 申珅 王彦芳

2013, 33(11):  1484-1488. 

摘要 ( 1056 )   PDF (780KB) ( 608 )  

相关文章 | 计量指标

目的 检验氯化铵是否能够特异性地刺激肝细胞，使其内部与氨离子转运有关的RHCG和AQP8基因表达发生变化。方法 培养人正常肝脏细胞(LO2)、甲状腺癌细胞（TPC-1）、卵巢癌细胞（SKOVR-3)和食管癌细胞（9706)， NH4Cl（2.5、5、10、20、40和50 mmol/L）对4种细胞作用24 h后，MTT法检测细胞的增殖；荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测LO2细胞经5、10和20 mmol/L的NH4Cl处理不同时间（6、12和24h）后，AQP8和RHCG 基因及蛋白的表达；10 mmol/L的NH4Cl处理TPC-1、 SKOVR-3和9706细胞不同时间（6、12和24h）后，AQP8和RHCG 基因及蛋白的表达。结果 随着NH4Cl浓度的增加，氨对肝细胞LO2的增殖抑制率逐渐增加且明显大于其他细胞系；10 mmol/L NH4Cl作用于LO2细胞6h时，RHCG基因表达量明显下调（p<0.05），而AQP8基因的表达量在作用12h后较对照组明显增加 (p<0.05)；10 mmol/L NH4Cl作用于LO2细胞24 h时，AQP8蛋白表达量较对照组显著增加（p<0.0.5），而RHCG无变化；相同浓度NH4Cl作用其他细胞系相同时间时，AQP8和RHCG的基因和蛋白水平均未见显著性变化。结论 在氨升高的环境中，人肝细胞通过调节氨转运相关蛋白AQP8和RHCG的量来维持对氨摄取的平衡，减少氨对肝细胞的特异性损伤，在其他细胞系中无此现象。

临床园地

原发甲状旁腺功能亢进症合并甲状腺乳头状癌的诊治

周颋 李伟 王鸥 邢小平 连小兰

2013, 33(11):  1489-1492. 

摘要 ( 685 )   PDF (503KB) ( 625 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨原发甲旁亢合并甲状腺乳头状癌的诊断、治疗，减少误诊及漏诊。方法 回顾分析北京协和医院1983年至2011年诊治的3例原发甲旁亢同时合并甲状腺乳头状癌患者的病史、实验室检查、影像资料、手术及病理，结合文献加以分析总结。结果 患者2女1男，年龄37∽59岁，入院时血钙2.78∽3.1mmol/L,PTH 202∽241pg/mL，甲状旁腺B超提示2例可见增大的甲状旁腺，1例正常，MIBI显像均为阳性。甲状腺方面：甲状腺B超2例提示甲状腺有结节，1例未发现。3例都首先进行了甲状旁腺手术，2例为增生，1例为腺瘤。2例在行甲旁亢手术同时行了甲状腺结节和甲状腺的部分切除术，术后病理为甲状腺乳头状癌，遂进行第2次甲状腺手术。第3例在甲旁亢手术同时行了甲状腺全切+中央淋巴结清扫。结论 原发甲旁亢合并甲状腺乳头状癌临床上比较少见，术前对甲状腺结节评估和术中甲状腺的探查都很重要。

术中亚甲蓝标定清扫淋巴结提高贲门癌患者生存率

颜云鹏 毛须平 陈建红 张志宇 马人杰 潘忠军

2013, 33(11):  1493-1495. 

摘要 ( 780 )   PDF (430KB) ( 461 )  

相关文章 | 计量指标

目的 分析术中直视下亚甲蓝标定贲门周围淋巴结，引导清扫根治，观察对术后3年无病生存率、5年总生存率的影响。方法 选择年龄小于70岁，贲门癌单瘤体直径小于8cm，Ⅰ期至ⅢB期患者，随机分为2组。A组常规行D2根治术。B组术中在瘤体周围注入亚甲蓝，显示周围淋巴结，引导清扫切除，术后随访5年。结果 A组术后3年无病生存率和5年总生存率分别为59%和37%，B组为74%和53%。结论 术中直视下行瘤体周围淋巴结标定能较完整地切除前哨淋巴结及被染色而肉眼不易发现的<2mm阳性微小淋巴结，提高了术后3年无病生存率和5年总生存率。该技术简单可行、实用性强，临床可以推广应用。

研究短文

EGF对HaCaT细胞中神经元限制性沉默因子表达的影响

张殿宝 王瑞 庞希宁 施萍

2013, 33(11):  1496-1497. 

摘要 ( 692 )   PDF (376KB) ( 522 )  

相关文章 | 计量指标

弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF MS技术检测肾盂尿路上皮癌血清差异蛋白

董德鑫 李汉忠 石冰冰 张玉石 徐维锋

2013, 33(11):  1498-1499. 

摘要 ( 676 )   PDF (547KB) ( 547 )  

相关文章 | 计量指标

短篇综述

多发性硬化实验动物模型研究进展

陈永妍 李林 张旗 尹琳琳

2013, 33(11):  1500-1503. 

摘要 ( 914 )   PDF (542KB) ( 797 )  

相关文章 | 计量指标

多发性硬化实验动物模型可模拟人类该病的不同类型或不同阶段，是研究该病病因和研发治疗药物的有效工具。

钙网蛋白与肿瘤治疗

高树峰 徐莲 张少容 李黎 汪美群 刘月辉

2013, 33(11):  1504-1507. 

摘要 ( 875 )   PDF (492KB) ( 1063 )  

相关文章 | 计量指标

钙网蛋白在人类多种肿瘤细胞的表面稳定表达，是热休克蛋白家族中的一员。它在引导肿瘤细胞凋亡、提高放化疗效果和基因治疗等方面扮演着重要角色。

医学教育

虚拟切片在组织学实验考试中的应用

仇文颖 徐园园 陈咏梅 钱晓菁

2013, 33(11):  1508-1510. 

摘要 ( 654 )   PDF (475KB) ( 510 )  

相关文章 | 计量指标

目的 探讨虚拟切片在组织学考试中的应用方法，评价应用效果。方法 组织学实验考试采用传统切片拍照（PDF形式），混合切片与虚拟切片结合的方式。通过各部分考试试题分析与成绩计算统计，比较虚拟切片部分的难度、区分度与其它两种方法的差异。结果 通过两年的实践和对考试试题、成绩的分析显示，虚拟切片试题难度系数0.67，较传统的切片观察、混合片考试为高，平均成绩显著低于这两种考试形式（p<0.01）。区分度计算显示虚拟切片试题区分度为0.51，高于另两种实验考试形式。虚拟切片成绩与理论考试成绩呈中度正相关。结论 虚拟切片用于实验考试具有一定难度，但有良好的区分度，又有利于培养学生的分析能力，不失为一种好的考试方式。