论文
刘瑶;俞春娜;曾苏
2009, 44(21): 1608-1613.
目的 为建立能稳定表达人P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的马丁达比狗肾上皮 (Madin-Darby canine kidney, MDCK) 细胞转基因细胞系,并鉴定其是否适用于药物转运实验。方法 将质粒pcDNA3.1(+)/MDR1通过LipofectamineTM 2000转染试剂转染犬肾上皮细胞MDCK,经G418筛选获得抗性克隆。通过P-gp的荧光底物罗丹明(Rhodamine123, Rho123)在各单克隆细胞内的积聚量以及维拉帕米存在时细胞内积聚量检测P-gp的活性。反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测人源多药耐药基因1(multidrug resistance 1, MDR1)的mRNA和P-gp表达量。应用筛选出的MDCK-MDR1单克隆细胞株,研究了Rho123 在MDCK和MDCK-MDR1 (Madin-Darby canine kidney/multidrug resistance 1)细胞中的转运及4种经典抑制剂(维拉帕米、环孢素、酮康唑和奎宁)对Rho123转运的抑制特性。结果 RT-PCR和 Western blot检测表明,所建立的MDCK-MDR1细胞与MDCK细胞相比,经转染后MDCK细胞内的MDR1的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid, mRNA)和P-gp表达发生从无到有的变化。Rho123在MDCK和MDCK-MDR1中的外排系数分别是5.94和15.45,抑制剂能显著地抑制细胞外排作用。结论 转染后的细胞高表达P-gp,适用于研究药物的肠道和血脑屏障转运实验。