甘肃道地药材红芪广泛应用于中医药领域,红芪多糖是红芪的主要药效成分之一,经不同浓度乙醇梯度醇沉后可以分离出不同类型的多糖,借助红外光谱、核磁共振等技术,已明确其由葡萄糖、半乳糖等多种单糖组成,糖苷键类型多样,且存在分支结构,相对分子质量分布有一定区间。此外,现代药理研究表明红芪多糖具有抗肿瘤、防治糖尿病及其并发症等多种药理作用,是当前的研究热点之一。通过查阅红芪多糖结构表征文献及近五年药理作用的国内外相关文献,对其结构表征及药理作用进行梳理总结,分析红芪多糖未来发展趋势,以期为红芪多糖未来的研究和发展提供参考依据。

目的 构建基于特征多肽技术及化学标识物的日本医蛭种属鉴别与掺血增重识别方法。通过筛选日本医蛭与菲牛蛭种属特异性多肽实现物种鉴别,同时基于血液中β珠蛋白特征多肽建立使用血液掺假增重的化学标识物分析方法。方法 共收集到100批次水蛭样品,选用胰蛋白酶对样品进行酶解,通过纳升液相-高分辨质谱仪(Nano-LC-MS/MS)采集多肽信息,使用PEAKS软件进行多肽序列解析与统计学差异分析筛选特征多肽,并通过液相色谱-三重四极杆质谱的多反应监测模式(MRM)验证其专属性。针对掺假增重现象,对猪、牛、羊、马、驴血液中β珠蛋白进行多重序列比对,筛选保守共有特征多肽,并建立基于特征多肽非标定量峰面积比值的检测方法,用于判断日本医蛭是否存在充血增重现象。结果 筛选得到2条可用于日本医蛭和菲牛蛭鉴别的特征多肽,专属性强、耐用性良好。33批日本医蛭和菲牛蛭样品均可稳定检出目标离子对。在血液β珠蛋白中筛选出1条共有特征多肽,在23批日本医蛭样品中,峰面积比值在7-18之间,且具有明显分类差异(P＜0.001),表明部分样品存在使用家畜血液掺假增重行为。结论 本研究建立了水蛭药材的物种鉴别与掺假增重识别方法,专属性强、灵敏度高,为完善水蛭药材质量评价标准提供了可靠的技术依据。

目的 探究混合活化杀伤(mixed-activated killer,MAK)免疫细胞及其联合白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对人肝癌细胞PLC/PRF/5的作用及相关机制。方法 MAK免疫细胞高、中、低浓度(2×10⁸、1×10⁸、5×10⁷ 个·mL^-1)及MAK免疫细胞高浓度联合IL-2(5×10⁴ IU·mL^-1)注射给PLC/PRF/5肝癌小鼠,检测小鼠体质量、生存率、中位生存期(median survival time,MST)、生存期延长率(increase in life span,ILS)变化;将MAK免疫细胞及其联合IL-2单独培养或作用于PLC/PRF/5细胞,流式细胞术检测干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、IL-8、IL-10含量、PLC/PRF/5细胞凋亡率、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3/7活化率,酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA KIT)检测穿孔素(perforin)和颗粒酶B(granzyme B)含量。结果 MAK免疫细胞及其联合IL-2均可明显改善PLC/PRF/5肝癌小鼠体质量和生存率,延长MST和ILS%,显著提高IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、perforin、granzyme B含量、PLC/PRF/5细胞凋亡率和caspase 3/7活化率,降低IL-8含量,对IL-10无明显影响。结论 MAK免疫细胞及其联合IL-2均可能通过提高相关抗肿瘤因子含量,刺激PLC/PRF/5细胞中caspase 3/7活化,从而促进PLC/PRF/5细胞凋亡,且MAK免疫细胞联合IL-2效果更优。

目的 筛选山豆根作用于肝线粒体的活性成分,为研究其调节线粒体功能而发挥保肝作用提供潜在药效物质基础。方法 取SPF级雄性SD大鼠新鲜肝脏,匀浆后用差速离心法制得线粒体,分别采用透射电镜、线粒体分离纯度双酶法(SDH/AP)测定试剂盒及荧光分光光度法评价线粒体的结构完整性、纯度及生物学功能;联合亲和超滤和液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS),构建以肝细胞线粒体为靶点的保肝成分筛选方法,并利用阳性对照药(水飞蓟宾、大豆苷)、阴性对照药(阿莫西林、D-葡醛内酯)组成的混合对照品溶液验证筛选方法可行性;采用山豆根提取物,考察线粒体浓度、被筛选样品浓度和孵育时间对筛选结果的影响;应用所建方法筛选山豆根提取液中作用于线粒体的活性成分,并用LC-MS及对照品对结合成分进行鉴定。结果 从山豆根中共筛选到14种可与线粒体结合的活性化合物,主要为苦参碱、槐果碱、槐醇等生物碱类成分及染料木素、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮、sophoranone等黄酮类化合物。结论 本研究以肝细胞线粒体为靶点筛选山豆根潜在活性成分,通过优化筛选条件,共筛选出山豆根中14种潜在的线粒体靶向化合物。

目的 通过对正品两面针及近似种的根和根茎进行比较研究,建立准确有效的鉴别方法。方法 在实地采集和市场调研的基础上,通过组织化学和显微定量技术对两面针及近似种的不同部位进行研究。结果 中柱鞘纤维的有无是判断药用部位的关键因素;木化组织及油细胞的显微特征及石细胞群面积是鉴别两面针及其近似种的重要依据。结论 本研究建立了用于鉴别两面针及近似种的显微方法,显微鉴别特征客观且可量化;并为监督检验及标准修订提供科学依据。

目的 研究香砂益胃汤是否可调控核因子-κB(NF-κB)/信号转录激活因子3(STAT3)通路来改善慢性萎缩性胃炎(CAG)。方法 将大鼠随机分为对照(control)组、CAG组、香砂益胃汤1.2 g组、香砂益胃汤2.4 g组、香砂益胃汤2.4 g+脂多糖(LPS)组和摩罗丹(阳性药)组。中性红清除法检测胃黏膜血流量;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清胃泌素(GAS)、血浆胃动素(MTL)水平和胃黏膜组织中白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色检测胃黏膜形态;末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测胃黏膜组织细胞凋亡;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)和NF-κB/STAT3通路蛋白表达。结果 与对照组比较,CAG组大鼠胃黏膜有明显损伤,胃黏膜血流量(GMBF)水平、GAS、MTL和IL-10水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白表达水平降低,IL-1β和TNF-α水平、胃黏膜细胞凋亡率、MDA含量、Bax、Cleaved caspase-3、p-NF-κB/NF-κB和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平升高(P<0.05);与CAG组比较,香砂益胃汤1.2 g、2.4 g组和摩罗丹组大鼠胃黏膜损伤程度明显减轻,GMBF水平、GAS、MTL和IL-10水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白表达水平升高,IL-1β和TNF-α水平、胃黏膜细胞凋亡率、MDA含量、Bax、Cleaved caspase-3、p-NF-κB/NF-κB和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平降低(P<0.05);LPS可降低香砂益胃汤对CAG大鼠胃损伤的改善作用(P<0.05);摩罗丹组上述各指标水平与香砂益胃汤2.4 g组处于同一水平(P>0.05)。结论 香砂益胃汤可降低CAG大鼠炎症、氧化应激和胃黏膜组织细胞凋亡,减轻胃黏膜组织损伤,可能与抑制NF-κB/STAT3通路有关。

目的 探究木脂素类化合物鬼臼毒素抑制T细胞增殖的作用机制。方法 本研究采用淋巴分离液密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs), 采用超顺磁性纳米微球法从中纯化出静息T细胞,使用鼠抗人CD3/CD28抗体促进T细胞活化。实验分为细胞阴性对照组(未活化未给药)、细胞阳性对照组(活化未给药)、阳性药磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002(50 μmol·L^-1)组和低(12.5 nmol·L^-1)、中(25 nmol·L^-1)、高(50 nmol·L^-1)浓度的鬼臼毒素组。采用流式细胞术检测细胞增殖、细胞毒性、细胞凋亡、CD25表达和细胞周期;采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-2和IL-17A的表达情况。结果 鬼臼毒素显著抑制活化T细胞增殖,其半数抑制浓度(IC₅₀)为(20±3) nmol·L^-1,且对静息T细胞无显著细胞毒性,也不会诱导活化T细胞凋亡。鬼臼毒素能够降低CD25及IL-2的表达,并可使细胞周期停滞于G₀/G₁期,能抑制IL-17A的表达但不影响IL-4的表达。结论 鬼臼毒素通过抑制T细胞活化并阻滞T细胞周期于G₀/G₁期抑制T细胞增殖,并有效降低促炎因子的表达且不影响抗炎因子的表达,提示鬼臼毒素有望作为先导化合物,促进新型免疫抑制剂的研发。

目的 通过构建斑马鱼A549(人非小细胞肺癌细胞)、NCI-H446(人小细胞肺癌细胞)、HepG2(人肝癌细胞)、MIA PaCa-2(人胰腺癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、MGC-803(人胃癌细胞)、HCT116(人结肠癌细胞)和KB(人口腔表皮样癌细胞)共8种肿瘤移植模型,研究中药复方纳米制剂桴积丹(灵芝牛肝菌丸)的抗肿瘤活性。方法 采用CM-DIL标记癌细胞显微注射法建立斑马鱼肿瘤模型,以荧光强度为测定指标,评价桴积丹的抗肿瘤功效。结果 桴积丹对8种细胞均有显著抑制作用。结论 该制剂对多种肿瘤具有广谱抑制活性,为其靶向治疗研究提供依据。

目的 建立香旱芹中挥发性成分的气相色谱法(GC)指纹图谱,并测定其中α-蒎烯、月桂烯、α-松油烯、百里香素、γ-松油烯和枯茗醛的含量。方法 采用HP-5(0.25 μm×0.32 mm×30 m)毛细管柱;进样口温度280 ℃;程序升温;分流比为50∶1。结果 建立15批香旱芹指纹图谱,相似度大于0.99,共标定了14个共有峰,对其中6个成分(α-蒎烯、月桂烯、α-松油烯、百里香素、γ-松油烯和枯茗醛)进行含量测定,各成分质量浓度分别在1.25~250、1.25~250、1.25~250、2.5~500、10~2 000和10~2 000 μg·mL^-1内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999);高、中、低浓度的平均加样回收率(n=3)分别在93.1%~95.5%、98.9%~100.8%、90.8%~96.8%、98.6%~100.8%、97.5%~98.5%和96.2%~103.2%。结论 建立的指纹图谱及多成分含量测定方法专属性强、精密度高、稳定可靠,可较为全面地对香旱芹进行质量控制,为其质量评价和标准建立提供科学依据。

目的 建立基于准确度曲线(accuracy profile,AP)的白芍和糊精混合粉末中辅料糊精含量的近红外(near infrared,NIR)光谱快速测量的方法。方法 采用近红外漫反射模式,采集不同含量比例的糊精和白芍混合粉末的近红外光谱,通过样本划分、光谱预处理、选择潜变量因子建立NIR PLS定量分析模型。通过计算β-期望容许区间构建AP,并对NIR定量分析结果进行方法验证。结果 由AP验证结果可得,白芍中糊精含量较低时(1%、3%、5%),建立的近红外定量分析方法准确度较低,白芍-糊精混合粉末中糊精含量的NIR定量分析的最低定量限为5.79%。结论 AP作为可视化的验证工具,可以快速判断近红外定量分析方法在不同浓度下的有效性,有效降低NIR定量分析方法的使用风险。

目的 为更好落实《药品注册管理办法》有关药品注册检验的要求,分析近年来检验工作中出现的新情况与新问题,思考如何进一步完善相关工作机制。方法 依据药品审评审批工作改革要求,结合药品注册检验工作规范的实施与修订,参考国际药品监管实践,围绕申报质量标准的适用性与协调性、基于风险的注册检验启动机制、注册检验用样品的代表性要求以及跨省抽样和检验协作机制等四个方面,对检验工作中发现的问题提出改进建议。结果与结论 我国药品注册检验工作在实践中取得了显著成效,同时也面临着新形势下的挑战。为更好发挥注册检验在提升监管效能和服务产业高质量发展中的作用,建议在现有法规框架下,继续加强申报质量标准的国际协调,细化基于风险的检验启动机制,适当扩展检验用样品的代表性要求,构建高效协同的跨省抽样检验协作工作机制。

目的 寡核苷酸类药物的研发和非临床安全性评价面临诸多挑战,国内尚未制定针对此类药物非临床安全性评价的指导原则,密切跟踪全球主要药品监管机构该类药物监管动向对于提升我国药品监管水平具有重要意义。方法 本文通过介绍美国食品药品监督管理局(FDA)最新发布的《寡核苷酸治疗产品非临床安全性评价指导原则(草案)》,并与寡核苷酸治疗药物国际现行指导原则进行比较,探讨寡核苷酸药物非临床安全性评价的关注要点。结果 美国FDA发布的该指导原则草案为寡核苷酸疗法的非临床开发提供了相对科学严谨且灵活的框架,但国内仍需基于自身监管实践特点加紧推动符合国情的监管指南修订工作。结论 美国FDA关于寡核苷酸治疗类药物指南草案为优化和改进国内寡核苷酸药物的评价提供参考。

目的 科学规范上市后变更管理可以强化持有人主体责任,也可以保障疫苗在全生命周期的质量稳定。本研究旨在通过对比分析中、美、欧在该领域的管理体系特点,结合我国疫苗备案现状分析常见问题,为疫苗备案管理提供思考与建议。方法 基于法规文件、文献研究等,通过系统比较中美欧在疫苗上市后变更管理体系方面的异同,并结合我国疫苗备案实践中常见问题进行分析。结果 随着我国疫苗相关法规与指导原则不断完善,疫苗上市后变更监管体系已逐步由单一审批制发展为包含备案机制在内的分类管理模式。然而,疫苗因生产工艺复杂、生物特性难以表征等特点,其变更若未经严格评估和规范管理,可能直接影响到疫苗性能并引发质量风险。当前我国疫苗备案管理在实施中仍面临若干常见问题,需进一步优化。结论 疫苗上市后变更管理是落实“全程管控”、保障公众健康的关键环节。我国虽已建立分类管理体系,但仍需借鉴国际经验,完善风险评估与监管机制,进一步提升疫苗变更管理的科学性与规范性。

目的 本文对钟乳石进行本草及功效考证,为钟乳石的现代应用提供文献依据,并结合现代研究挖掘其当代应用价值。方法 基于历代古籍,从药名沿革、药材基原、性味归经、功效主治4方面对钟乳石进行考证,并结合现代药理与临床研究进行阐释与应用挖掘。结果 钟乳石历史上别名逾二十种,宋以后以“石钟乳”统一药材认识,至清代方定名为“钟乳石”;其基原早期有“同源三药”之分,即石钟乳、殷孽、孔公孽,一体而性效有别,历代医家皆强调不可混用,但宋以后混用渐成常态。历代品质以色白质润、中空轻薄如鹅管者为最佳,今日钟乳石粗细厚薄兼有,或当包含二孽;药性方面,钟乳石原属甘温无毒,宋以后出现“火毒”,至明清,出现辛热大温、经火得毒之论,可能与功能定位、药材混用以及火煅炮制有关;归经始见于明代,主归阳明,兼入肺肾,体现其上温肺、下补肾的功能结构;功效主治则经历由汉代“通利下行”向“通补兼备”转化,明清以后确立其“温补三焦”的核心定位。现代功效以温阳补虚为主,常用于阳虚寒痰咳喘、产后缺乳以及消化道溃疡等病证。结论 钟乳石以“温补三焦、补中兼通”为核心药用特点,与阳虚寒痰咳喘、产后乳闭及消化道溃疡等慢性虚损性疾病的临床用药需求相契合,具有进一步挖掘和规范应用的价值。