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2017年 第37卷 第7期    刊出日期：2017-07-05

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研究论文

FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响

皮静楠 张杰 王学鹏 熊家超 余佳

2017, 37(7):  907-911. 

摘要 ( 479 )   PDF (2365KB) ( 698 )  

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目的 探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况，及其对胃癌细胞功能的影响。方法 用 real-time PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达；用FTO质粒（pCMV6-FTO）实现在胃癌细胞系MGC-803中的过表达，通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验，检测FTO对MGC-803细胞功能的影响。结果 FTOmRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05），且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关（P<0.05）；在MGC-803细胞系中过表达FTO，可抑制胃癌细胞增殖（P<0.05）、抑制细胞迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.05）。结论 FTO在胃癌组织中低表达，并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭，可能成为对胃癌发生发展密切相关。

D-半乳糖致小鼠胰腺损伤

黄杰 董照瀛 许梦雄 晏红 陈粼波 王璐 王亚平

2017, 37(7):  912-917. 

摘要 ( 676 )   PDF (4204KB) ( 661 )  

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目的 探讨D-半乳糖（D-gal）对小鼠胰腺的损伤及其机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组和D-gal组（D-gal 120 mg/kg，qd×42）。注射完成第二天，采外周血测定空腹血糖（FBG）与空腹胰岛素（FINS）水平；称小鼠体质量（g）与胰腺湿重（mg）计算胰腺脏器指数；HE染色观察胰腺组织形态学；透射电镜观察胰腺细胞超微结构；制备冷冻切片，衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测胰岛内染色阳性细胞的相对吸光度（RA）；免疫组织化学法观察胰腺组织晚期糖基化终产物（AGEs）的RA值；制备胰腺组织匀浆检测超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量。结果 D-gal组小鼠FBG显著升高（P<0.05），FINS水平降低；胰腺湿重和胰腺脏器指数明显升高（P<0.01）；胰腺光镜结构无显著损伤，但胰岛内单个有核细胞所占面积增加（P<0.05）；胰腺内外分泌部显示细胞超微结构损伤，脂褐素明显沉积；胰腺SA-β-Gal染色阳性细胞的RA值增加（P<0.05）；AGEs阳性表达区域RA值升高（P<0.01）；SOD与T-AOC含量降低（P<0.05），MDA含量升高（P<0.01）。结论 D-gal复制衰老小鼠模型可致胰腺损伤，可能机制与D-gal致胰腺细胞氧化应激损伤有关。

辣椒素诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生免疫原性细胞死亡

金涛 彭昊 王艳林 吴红艳

2017, 37(7):  918-922. 

摘要 ( 613 )   PDF (839KB) ( 358 )  

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目的 探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导MG-63细胞免疫原性死亡（ICD）。方法 MTT检测细胞的增殖；线粒体膜电位分析细胞凋亡；流式细胞术检测细胞膜上钙网蛋白（CRT）表达量；荧光素酶法检测细胞外ATP的释放；Elisa检测细胞上清中高迁移率族蛋白1（HMGB1）的分泌。结果 辣椒素及顺铂作用均能抑制MG-63细胞增殖（P＜0.01），且呈剂量依赖性；辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡（P＜0.01），但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面，且促进ATP及HMGB1的释放（P＜0.01）。结论 辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。

腹腔热灌注与顺铂联用提高人卵巢癌细胞系凋亡

方润娅 蔡隆梅 崔书中 曾丽斯 唐鸿生

2017, 37(7):  923-928. 

摘要 ( 554 )   PDF (3914KB) ( 461 )  

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目的 研究腹腔热灌注（HIPE）和顺铂对人卵巢癌细胞凋亡的影响。方法 将人卵巢癌OVCAR-3和A2780细胞各分为对照组、顺铂组、热疗组和热化疗组；显微镜观察卵巢癌细胞形态；AO/GV染色、流式细胞仪计量检测卵巢癌细胞凋亡细胞比率；荧光定量PCR( q-PCR)检测卵巢癌细胞凋亡相关基因CASPASE7、CASPASE9和BID等。结果 1)顺铂组、热疗组及热化疗组卵巢癌细胞回缩，部分漂浮，其中热化疗组细胞变化最明显；2)顺铂组、热疗组及热化疗组较对照组凋亡细胞增多，其中热化疗组凋亡细胞数量最多（P<0.05）；3)顺铂组、热疗组、热化疗组较对照组凋亡细胞比率增多，热化疗组凋亡细胞比率最大(P<0.05)；4)促凋亡相关基因CASPASE3、CASPASE6、CASPASE7、CASPASE8、CASPASE9，BAX、BAK和BID在热化疗组表达明显高于其它各组，凋亡抑制相关基因BCL-2、BCL-XL、MCL-1和c-FLIP表达较其它各组明显下降。结论 顺铂和热疗可促进卵巢癌细胞凋亡，且热化疗联合作用效果最明显。

人MutS同源蛋白2（hMSH2）过表达的肺癌细胞模型的构建

陆必超 沈青丽 李文利 李娟 陈慧 代玉梅 何维

2017, 37(7):  929-934. 

摘要 ( 479 )   PDF (1308KB) ( 388 )  

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目的 构建人MutS同源蛋白2（hMSH2）过表达的肺癌细胞模型，探究hMSH2分子介导γδ T细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增hMSH2编码序列，同源重组法构建hMSH2-EGFP融合蛋白过表达载体；转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建hMSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型；Western blot检测细胞中hMSH2分子表达，流式细胞计量术检测细胞膜上hMSH2分子表达，体外扩增人外周血单个核细胞中的γδ T细胞，乳酸脱氢酶释放法检测γδ T细胞对过表达hMSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果 获得hMSH2编码序列（2 805 bp），构建的Fugw-hMSH2重组载体，酶切结果与预期目的条带大小相符；外源性的hMSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达，过表达hMSH2的NCI-H520细胞表面的hMSH2分子水平显著升高（P<0.001）；γδ T细胞对过表达hMSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高（P<0.05）。结论 成功构建hMSH2分子过表达的肺癌细胞模型；细胞膜上表达水平上调的hMSH2分子增强了γδ T细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。

针对于白蛋白的新型核酸适配体的筛选与鉴定

李晓欧 胡燕 安雅聪 段金虹 杨先达

2017, 37(7):  935-938. 

摘要 ( 657 )   PDF (378KB) ( 563 )  

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目的 研发能特异结合白蛋白的DNA核酸适配体，为去除实验样品中的白蛋白提供新型技术手段。方法 体外合成全长为59个碱基并含有21个随机寡核苷酸的单链DNA文库，以白蛋白为靶标，利用指数富集的配体系统进化技术（SELEX），从单链DNA文库中筛选能特异结合白蛋白的核酸适配体；用流式细胞术来检测核酸适配体的富集程度、适配体与白蛋白的结合特性；用MFold软件预测其二级结构。结果 经过多轮筛选得到了能特异识别白蛋白的DNA核酸适配体A6，其Kd值为77.4 nmol/L，且基本不结合卵清蛋白、免疫球蛋白IgG等对照蛋白。结论 针对于白蛋白的DNA核酸适配体A6能选择性识别白蛋白，在去除实验样品中的白蛋白方面具有应用潜能。

建立HPLC法检测血清尿刊酸并探讨其对儿童白血病的意义

韩星 刘之岱 刘姗 万科星 苏庸春 邹琳

2017, 37(7):  939-944. 

摘要 ( 260 )   PDF (703KB) ( 375 )  

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目的 建立利用高效液相色谱法(HPLC)检测血清尿刊酸(UCA)的方法，探讨血清UCA浓度对儿童急性白血病的临床意义。方法 建立HPLC测定血清UCA浓度的方法，设定与优化HPLC色谱条件并进行验证。收集确诊为急性初诊白血病和非肿瘤血液疾病患者各90例的血清，检测UCA浓度，比较两组间的差异，并探究UCA浓度在白血病中的临床意义。 结果 成功优化并建立HPLC检测血清UCA方法，流动相乙腈:20 mmol/L KH2PO4,pH 3.7为5:95 (V/V),流速为1.2 mL/min，检测波长264 nm的HPLC色谱条件下，反式尿刊酸(trans-UCA)和顺式尿刊酸(cis-UCA)浓度在0.125 g/L~5 g/L范围内与洗脱峰面积呈良好线性关系(R2分别为0.9996和0.9999)。批间测量和批内测量的相对标准偏差(RSD%)＜5%。与对照组相比，急性白血病患儿血清中cis-UCA和trans-UCA浓度明显增高(P＜0.001)；与cis-UCA相比，trans-UCA对急性淋巴细胞白血病(ALL)的危险度分级诊断更有价值。结论 HPLC方法可以测定血清UCA浓度，儿童急性白血病血清中的UCA浓度可为诊断与预后提供线索，具有重要临床意义。

靶向TPX2基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定

常海平 宋淑芳 任杰

2017, 37(7):  945-952. 

摘要 ( 191 )   PDF (4411KB) ( 328 )  

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目的 构建靶向TPX2 基因的RNA干扰慢病毒载体，获得稳定感染的人宫颈癌Hela细胞系,为宫颈癌细胞TPX2基因的相关研究奠定基础。方法　以TPX2基因为靶点，设计并合成四组对应于目标shRNA的双链DNA发卡结构，分别与慢病毒载体Pglv2-U6-Puro连接经转化感受态细胞，阳性克隆经测序、病毒包装、滴度测定、感染细胞、嘌呤霉素筛选得到TPX2基因沉默稳转细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果。流式细胞计量术检测其对细胞周期分布及凋亡的影响。结果 测序结果证实5种慢病毒载体均包装成功，采用0.4ug/mL嘌呤霉素成功筛选出TPX2沉默细胞系。 Hela细胞感染4种载有TPX2-shRNA的重组慢病毒后，均发挥了沉默效应，尤以TPX2-shRNA-1沉默效果最佳，TPX2mRNA相对表达量为（0.21±0.07）低于对照组（1.08±0.07）（p＜0.01）；TPX2蛋白质相对表达量为（0.19±0.28）低于对照组（0.64±0.03）（p＜0.01）；G2及S期细胞高于对照组（p＜0.05）；细胞凋亡率明显多于对照组（p＜0.05）。结论　获得了一种有效TPX2基因的干扰序列，成功构建了TPX2shRNA慢病毒干扰载体，并筛选出TPX2基因沉默的Hela细胞株，为进一步研究TPX2基因在宫颈癌中的作用奠定了基础。

HIV-1早期感染者γδ T细胞对储藏库细胞的细胞毒作用

李珍 陆小凡 孙坚萍 粟斌 吴昊 张永宏 张彤

2017, 37(7):  953-958. 

摘要 ( 178 )   PDF (926KB) ( 497 )  

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目的 探讨HIV-1早期感染者γδ T细胞是否具有清除HIV-1储藏库的能力。方法 入组HIV-1早期感染者16例，分离外周血单个核细胞，体外采用唑来膦酸（5 μmol/L）加IL-2（1 000 IU/mL）扩增γδ T细胞。乳酸脱氢酶（LDH）法检测γδ T细胞对储藏库细胞（J-Lat Full Length Clone10.6）的细胞毒作用；流式细胞计量术检测扩增前后γδ T细胞的表型和储藏库细胞中GFP的荧光强度。结果 唑来膦酸加IL-2在体外刺激γδ T细胞快速且大量扩增（P<0.001）。γδ T细胞对储藏库细胞具有较强的细胞毒作用，储藏库细胞中GFP的平均荧光强度显著减弱（P<0.05）。扩增后γδ T细胞表现出细胞毒性NK细胞样表型，HIV-1感染者CD56+Vδ2 T细胞的比例较健康对照显著增加（P<0.05）。结论 γδ T细胞具有清除HIV-1储藏库的能力，基于γδ T细胞的自体或异体过继免疫治疗有望成为清除储藏库，治愈HIV-1感染的一种新策略。

miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮层神经元的迁移

刘佳辰 许琪

2017, 37(7):  959-962. 

摘要 ( 186 )   PDF (1129KB) ( 702 )  

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目的 通过胚胎在体电转染技术在胚胎小鼠大脑皮层神经元中过表达miR-130b，探讨其对神经元迁移的影响。方法 利用miR-130b过表达载体，在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染，并于E17.5处死母鼠，取胚胎进行冰冻切片，于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况。结果 过表达miR-130b的小鼠胚胎，大脑皮层神经元的迁移速率上升，最终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1%，远高于对照组的22.1%；且停留在VZ/SVZ层的神经元（7.9%）远低于对照组（69.3%）。结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移。在未来的研究中需要进一步探索其深层机制。

IFN-γ促进红系终末分化

崔申申 解学敏 王南宇 吕湘

2017, 37(7):  963-969. 

摘要 ( 200 )   PDF (1965KB) ( 507 )  

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目的 探索IFN-γ对体外红系终末分化的调节作用。方法 用Real-time PCR法检测IFN-γR1/R2在hemin诱导K562细胞红系分化过程中的表达变化。以IFN-γ处理hemin诱导的K562细胞和人脐血CD34+细胞来源的红系细胞，用Real-time PCR检测红系分化标志物CD235a和CD71表达。用联苯胺染色展现IFN-γ处理的K562细胞中血红蛋白含量，通过Western blot 和Real-time PCR检测红系相关转录因子GATA1和NFE2的表达。结果 Hemin诱导下分化的K562细胞中IFN-γR1/R2 mRNA先减少后增高，IFN-γ促进K562及造血干祖细胞红系分化晚期CD71及CD235a的表达，增加联苯胺阳性染色率。IFN-γ对红系分化的促进作用具有时间依赖性。机制研究表明IFN-γ可促进红系关键转录因子NFE2的表达。结论 IFN-γ促进K562细胞及人脐血造血干祖细胞的红系终末分化。

尾加压素Ⅱ促进大鼠心肌胶原蛋白表达及乳鼠心肌成纤维细胞的增殖

刘文媛 韩清华 刘青华 王瑾

2017, 37(7):  970-974. 

摘要 ( 182 )   PDF (2289KB) ( 436 )  

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目的 探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠心肌纤维化的影响。方法 腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷大鼠心力衰竭模型，大鼠分为假手术组、造模4、8和12周组。利用Western blot分析心肌组织中UⅡ、G蛋白偶联受体(GPR14)、胶原Ⅰ、Ⅲ及蛋白激酶A（PKA）的表达。体外培养乳鼠成纤维细胞，分为对照组、UⅡ处理组、 UⅡ+KT5720处理组及 UII+SB-611812组。镜下观察及CKK-8法检测细胞增殖。结果 模型组大鼠心肌组织中UⅡ、GPR14、col-Ⅰ、col-Ⅲ蛋白及PKA的表达显著增加，且呈时间依赖性。UⅡ促进乳鼠成纤维细胞（CFs）的增殖(P<0.05)，而KT5720、SB-611812可抑制UⅡ对乳鼠成纤维细胞的促增殖作用。结论 UⅡ及其受体系统促进大鼠心肌纤维化的发生发展。

寻常型银屑病患者AMSCs的分离培养和免疫调控功能鉴定

尹秀平 朱榕嘉 庄晨 程晓菲 韩钦 宋坪 赵春华

2017, 37(7):  975-981. 

摘要 ( 157 )   PDF (5042KB) ( 344 )  

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目的 对比寻常型银屑病患者和健康人来源的脂肪间充质干细胞（AMSCs）的表型、周期、成脂和成骨分化能力及免疫调控功能差异，探索患者AMSCs在银屑病发病机制中的作用。方法 体外分离培养AMSCs，用流式细胞计量术检测AMSCs的细胞表型和周期；用油红O和碱性磷酶染色鉴定AMSCs的成脂和成骨分化能力；用PCR和ELISA检测AMSCs表达抑炎或促炎因子；通过基因表达谱芯片筛选两组AMSCs的免疫差异表达基因。结果 健康人和银屑病患者AMSCs均高表达CD29、CD44及CD73 和低表达CD45、CD31及HLADR。而且，都可分化成骨细胞和成脂细胞，但银屑病组AMSCs增殖趋缓（P＜0.05），成脂分化能力较强。银屑病组较对照组AMSCs表达或分泌的抑炎因子IL-10、IDO及TGF-β等下降（P＜0.05），而TNF-α及IFN-Y等促炎细胞因子增强(P＜0.05)。银屑病组AMSCs的JAK-STAT通路与对照组比明显下调（P＜0.05）。结论 寻常型银屑病患者AMSCs较正常人的增殖和成脂分化能力出现异常，免疫抑炎调控能力减弱，推测可能与JAK-STAT免疫相关通路下调有关。

雌激素替代治疗对中年卵巢切除大鼠大脑白质、海马内髓鞘及Lingo-1蛋白的影响

李桃 罗艳敏 肖倩 綦英强 晁凤蕾 黄维 唐勇

2017, 37(7):  982-987. 

摘要 ( 221 )   PDF (2512KB) ( 354 )  

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目的 检测经短期雌激素替代治疗(ERT)后中年卵巢切除大鼠大脑白质及海马内髓鞘相关指标及Lingo-1的表达，探讨雌激素对髓鞘作用的可能机制。方法 24只中年雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术(OVX)后，随机分为安慰剂治疗组(OVX+Veh组)和雌激素替代治疗组(OVX+E组)。ERT 1个月后，Morris水迷宫检测大鼠空间学习和记忆能力。从各组大鼠随机选取10只，透射电子显微镜观察大脑白质及海马内髓鞘的超微结构；Western blot检测大脑白质及海马内髓磷脂碱性蛋白(MBP)及Lingo-1的含量；免疫组化方法检测 Lingo-1在大脑白质及海马的分布。结果 OVX+E组大鼠在定位航行实验中的潜伏期显著短于OVX+Veh组大鼠(P < 0.05)； OVX+Veh组大鼠大脑白质和海马存在显著的髓鞘结构变性；OVX+E组大鼠大脑白质和海马中MBP的含量均显著高于OVX+Veh组(P < 0.05)，而OVX+E组大鼠大脑白质和海马中Lingo-1的含量及分布均显著低于OVX+Veh组(P < 0.05)。结论 1个月的ERT对中年卵巢切除大鼠的认知功能及大脑白质和海马内的髓鞘具有明显的保护作用，这种保护作用可能与雌激素下调大脑白质和海马内Lingo-1的表达有关。

寨卡病毒NS4A蛋白影响小鼠大脑皮层神经元的迁移

韦智钟 阴彬 彭小忠 刘伟

2017, 37(7):  988-993. 

摘要 ( 182 )   PDF (4410KB) ( 332 )  

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目的 在体研究寨卡病毒（Zika virus）NS3、NS4A蛋白对大脑皮层神经元迁移的影响。方法 通过cDNA末端快速扩增技术（RACE）及反转录PCR测定Zika病毒SZ01株基因组的开放阅读框，确定NS3、NS4A蛋白编码序列，构建融合Flag标签的pCIG蛋白表达载体。通过子宫内电转技术在E13.5 d小鼠的大脑皮层的神经前体细胞中表达病毒蛋白。免疫组化检测Flag标签、TBR1与GFP，观察表达NS3、NS4A蛋白的细胞在E18.5 d大脑皮层中的分布，评估Zika病毒蛋白对大脑皮层神经元迁移的影响。结果 1）NS4A的氨基酸序列与NCBI数据库一致，NS3存在一处氨基酸位点突变。2）Flag标签荧光信号与GFP荧光共定位，提示GFP可以指示病毒蛋白在皮层中的表达。3）TBR1荧光显示在体表达NS4A后，神经元的分布与pCIG对照组及表达NS3相比有显著差异（p<0.001）。结论 在体表达Zika病毒的NS4A蛋白可能影响神经元迁移。

上调Keap-1抑制Nrf-2核转运降低Skov3/DPP顺铂耐药

邓晶荣 邵林

2017, 37(7):  994-999. 

摘要 ( 177 )   PDF (669KB) ( 524 )  

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目的 分析Keap-1/Nrf-2通路在耐顺铂(cis-pt)的卵巢癌细胞Skov3/DDP中的活化状态，及其对细胞耐药的影响。方法 构建pFlag-CMV-Keap-1过表达载体。细胞分4组：空白、cis-pt、Keap-1过表达及cis-pt联合Keap-1过表达组；Western blot检测Keap-1，Nrf-2蛋白表达及亚细胞定位；流式细胞术分析细胞的凋亡；DHE探针检测胞内活性氧簇（ROS）积累效应。结果 相比Skov3，Skov3/DDP细胞中Keap-1水平明显下调（P<0.05），Nrf-2在细胞核中含量增多（P<0.05）；过表达Keap-1后，Keap-1水平明显增加（ P<0.05）；细胞核中Nrf-2含量明显减少（P<0.05）；20 mg/L顺铂能够明显诱导凋亡，24及48 h的凋亡率分别为24.36%和53.81%，显著高于未过表达Keap-1组（P<0.05），并激活caspase-3及PARP；DHE过表达Keap-1联合顺铂能够明显诱导ROS在细胞内累积。结论Nrf-2能够在药物刺激时降低ROS保护细胞， Skov3/DDP细胞中Keap-1表达下调导致Nrf-2活化入核，可能与药物作用时ROS的毒性作用降低及细胞耐药有关。

中性粒细胞/淋巴细胞比值对血流感染的诊断价值

申丽红 陈永德 朝浩鹏 宋文琪 田晓怡

2017, 37(7):  1000-1003. 

摘要 ( 431 )   PDF (594KB) ( 352 )  

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目的 探讨5项感染标志物对血流感染的诊断价值。方法 随机选取望京医院血培养阳性的血流感染患者110例为研究组，血培养阴性的细菌感染患者30例为对照组。在血培养的同1天抽取静脉血，检测全血细胞计数和C反应蛋白（CRP）。比较两组白细胞（WBC）、中性粒细胞（NEU）、淋巴细胞（LYM）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLCR）和CRP的差异。结果 血流感染组WBC、NEU、NLCR、CRP均显著高于对照组（P＜0.05），而LYM显著低于对照组（P＜0.05）。5项感染标志物中，NLCR和LYM诊断血流感染的受试者工作特征曲线下面积（ROC-AUC）分别为0.808和0.756。当NLCR取临界值为9.33时，敏感性为63.6%，特异性为93.3%；LYM小于等于0.97为临界值时，敏感性为58.2%，特异性为86.7%。进一步，在血培养阳性患者中，革兰氏阴性菌所致的血流感染组的NLCR高于革兰氏阳性菌血流感染组，NLCR在区分血流感染的类型中具有重要的临床意义。结论 NLCR优于其他常规感染指标，有助于血流感染的诊断。

GC-MS衍生化法检测先天性畸形羊水中的非极性氨基酸

任利红 刘刚 徐红兵 罗蓉

2017, 37(7):  1004-1009. 

摘要 ( 244 )   PDF (515KB) ( 347 )  

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目的 利用气相色谱质谱(GC-MS)衍生化法对孕先天性畸形儿孕妇羊水中的非极性氨基酸，包括丙氨酸（Ala）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、脯氨酸（Pro）和苯丙氨酸（Phe）进行定量检测；探讨疾病组与正常组孕妇羊水中非极性氨基酸的差异及其意义。方法 取100 μL羊水上清液，加入甲醇去蛋白后提取上层清液吹干，进行MSTFA衍生化，利用GC-MS检测并分析检测结果。结果 该方法具有良好的灵敏度、精密度、准确度以及回收率。在最优化的检测条件下，被检测氨基酸最低检出限为0.12~0.38 mg/L，线性范围为0.5~10 mg/L， 添加回收率为91.12%~104.41%，日内及日间相对标准偏差（RSD）为0.84%~9.33%。用建立的方法对17例疾病组和13名正常组孕妇的羊水样本进行测定，统计分析结果表明，疾病组孕妇羊水中亮氨酸和异亮氨酸含量显著降低（P<0.01），其余3种氨基酸水平无明显差异。结论 本方法经方法学验证，可作为羊水中氨基酸含量的测定方法，具有良好的应用前景；亮氨酸的减少可能参与了先天性畸形的发生。

人腹膜假黏液瘤原代细胞培养和鉴定

张海红 张保华 王亚南

2017, 37(7):  1010-1014. 

摘要 ( 217 )   PDF (2968KB) ( 333 )  

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目的 体外培养和扩增腹膜假黏液瘤原代细胞，为腹膜假黏液瘤的研究及药物筛选提供基础。方法 用胶原酶消化法分离5例腹膜假黏液瘤样本并进行原代细胞培养，然后用染色体核型分析鉴定培养的细胞是否为肿瘤细胞；再用PAS染色检测细胞中性黏多糖；3D细胞培养模拟肿瘤在体内的状态；HE染色观察3D细胞的组织形态；裸鼠成瘤实验检测原代细胞的致瘤性。结果 腹膜假黏液瘤细胞原代培养5例均成功；2D培养的细胞贴壁增殖，形态为多边形鹅卵石样排列，可传代到18代；染色体核型分析显示大多数细胞是亚二倍体核型的肿瘤细胞；细胞PAS染色阳性，说明培养的原代细胞内含有黏液；3D培养的类器官与体内肿瘤组织形态相似；裸鼠成瘤率低，且形成的肿瘤与患者PMP相似度不高。结论 腹膜假黏液瘤原代细胞可在体外培养和扩增。

mTOR负调控miR-27a并通过靶向降低GP73抑制人肝癌细胞侵袭

盖晓晨 汤步富 刘芳铭 吴玉婷 王芳 张宏冰

2017, 37(7):  1015-1020. 

摘要 ( 195 )   PDF (1416KB) ( 567 )  

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目的 探索mTOR促进肝癌细胞侵袭能力机理。 方法 使用q-PCR方法检测miR-27a和GP73表达；将miR-27a的mimic转染GP73高表达的M97H细胞中，并将miR-27a inhibitor转入GP73低表达HepG2细胞中，q-PCR和Western blot观察GP73的表达；使用荧光素酶报告基因系统验证miR-27a在GP73的3UTR区的结合位点；将miR-27a mimic转染GP73高表达的M97H细胞和GP73低表达的HepG2细胞，Transwell实验观察细胞的侵袭。 结果 mTOR下调miR-27a，并上调GP73的表达；miR-27a下调GP73的表达，抑制miR-27a则上调GP73；GP73是miR-27a的靶基因；miR-27a显著抑制M97H细胞的侵袭，但对HepG2细胞无抑制效果。结论：mTOR负调控的miR-27a靶向GP73抑制肝癌细胞的侵袭。

miR-144在雷帕霉素诱导的SKOV-3细胞中的表达及对Beclin- 的调控作用

盛红娜 王艳丽 吴璠 赵采云 李晶

2017, 37(7):  1021-1025. 

摘要 ( 188 )   PDF (690KB) ( 325 )  

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目的 检测雷帕霉素诱导细胞后4种miRNAs的表达情况，并进一步研究miR-144与Beclin-1基因的靶向调控作用。方法 对SKOV-3细胞分别进行雷帕霉素（50 μg/L，反应2 h）及3-甲基腺嘌呤（10 nmol/L、反应12 h）处理，RT-qPCR检测各组细胞miR-17、miR-20a、miR-144及miR-155的表达；Western blot检测雷帕霉素组Beclin-1蛋白的表达；双荧光素酶报告系统、Western blot及RT-qPCR，验证miR-144与Beclin-1之间的靶向调控关系。结果 与正常对照组相比，雷帕霉素组SKOV-3细胞的miR-17、miR-144及miR-155的表达水平显著上调（P<0.05）;3-MA组SKOV-3细胞的miR-17、miR-20a及miR-144的表达水平显著下调（P<0.05）；雷帕霉素组Beclin-1的蛋白表达明显低于正常细胞组（P<0.05）。miR-144可靶向作用Beclin-1的3’非翻译区（3’UTR），且抑制其表达；miR-144能明显抑制Beclin-1蛋白及mRNA的表达。结论 miR-144可靶向抑制Beclin-1基因的表达，并参与调控SKOV-3细胞自噬的过程。

骨膜蛋白siRNA转染抑制ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞系损伤

袁东 周栋 张安平 李志勇 张亚敏 宋润泽

2017, 37(7):  1026-1030. 

摘要 ( 180 )   PDF (681KB) ( 248 )  

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目的 探讨骨膜蛋白（Postn）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞系（HAECs）损伤的影响及其作用机制。方法 将HAECs随机分为4组：对照组、ox-LDL组、Postn siRNA组和negative siRNA组。RT-qPCR检测mRNA水平；Western blot检测蛋白表达；MTT检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；EMSA检测NF-κB的DNA结合能力。结果 与对照组相比，ox-LDL组骨膜蛋白的mRNA和蛋白水平显著提高（P < 0.05）；细胞增殖能力降低（P < 0.05）；细胞凋亡率升高（P < 0.05）；VCAM1、ICAM1、E-selectin、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白表达水平显著上调（P < 0.05），且NF-κB的DNA结合能力提高（P < 0.05），Postn siRNA转染能够逆转以上结果。结论 Postn siRNA转染能够抑制ox-LDL诱导的内皮细胞损伤，这可能与抑制NF-κB信号通路有关。

下调HIPK2基因表达促进顺铂诱导的肾小管上皮HKC细胞凋亡

李佳垚 吴洁 邱玲

2017, 37(7):  1031-1036. 

摘要 ( 157 )   PDF (963KB) ( 319 )  

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目的 探讨HIPK2对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）凋亡的影响。方法 构建顺铂诱导的HKC细胞凋亡模型，实时荧光定量PCR和Western blot检测HIPK2的表达；设计合成2条HIPK2 siRNA干扰片段，通过脂质体转染HKC细胞，建立HIPK2干扰的细胞株；实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HIPK2 mRNA和蛋白的表达；再用顺铂处理细胞，AnnexinV/PI检测细胞凋亡；Western blot检测Bax表达的影响。结果 顺铂呈剂量依赖性诱导的HKC细胞凋亡过程中HIPK2 mRNA和蛋白表达水平均明显下调（p<0.05）；转染小干扰RNA后可显著降低HIPK2在HKC细胞内mRNA和蛋白的表达（p<0.05），且HIPK2表达降低后会促进顺铂诱导的HKC细胞凋亡。结论 HIPK2可抑制顺铂诱导的HKC细胞凋亡。

luminal A 型乳腺癌组织中长链非编码RNA ENST00000460164的表达及对细胞周期的影响

周琳 喻修为 陶凯 杨诚诚 刘胜春

2017, 37(7):  1037-1041. 

摘要 ( 177 )   PDF (635KB) ( 277 )  

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目的 明确lncRNA-ENST00000460164在人luminal A型乳腺癌组织中的表达及作用。方法 用RT-qPCR检测ENST00000460164在17例配对的luminal A型乳腺癌及癌旁组织中的表达。将pll3.7-ENST00000460164-shRNA及pll3.7空载体转染MCF-7细胞，用流式细胞计量技术和Western blot检测转染后MCF-7细胞周期及其关键蛋白cyclin D1和p16INK4A的表达。结果 长链非编码RNA ENST00000460164 在luminal A型乳腺癌组织中呈高表达趋势；在MCF-7细胞中敲低ENST0000460164后，G1期明显延长，S期明显缩短（p<0.05）；G1期关键调控蛋白cyclin D1表达水平明显降低，p16INK4A表达明显上调（p<0.05）。结论 ENST00000460164 在luminal A型乳腺癌组织中是高表达状态；ENST00000460164可能通过调控cyclin D1或者p16INK4A的表达改变细胞周期。

基于癌基因组图谱挖掘胃癌预后相关基因

张潇怡 王晓月

2017, 37(7):  1042-1046. 

摘要 ( 239 )   PDF (1819KB) ( 406 )  

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目的 利用癌基因组图谱数据库中的大量胃癌基因组数据，在高频突变或肿瘤组织高表达的基因中挖掘与临床分化和预后相关的基因。方法 从癌基因组图谱数据集中下载胃癌基因组的突变数据，基因表达数据以及病例样本的临床信息资料。筛选并统计出现有害突变频率较高的基因，并比较这些基因在不同分化程度病例中的突变次数。同时利用DESeq2对基因表达数据进行差异表达分析，对于在肿瘤组织中高表达的基因做生存分析，使用Log-rank检验并做FDR校正，筛选出mRNA表达量与胃癌预后相关联的基因。结果 突变分析得到PIK3CA和APC的有害突变频率在不同分化程度的胃癌存在差异（Fisher exact test: p<0.05）。差异表达分析得到2 040个在肿瘤组织中上调的基因，2 357个在肿瘤组织中下调的基因。生存分析得到8个对胃癌预后有影响的基因，1个为保护因素，7个危险因素。结论 本研究通过挖掘癌基因组图谱中的胃癌数据集，得到了ANGPT2、MMP10和WISP3等与胃癌分化及预后相关的基因，为接下来的研究提供了线索和依据，也为临床治疗提示了新的预后指标。

研究短文

柚皮苷减轻大鼠心肌缺血∕再灌注损伤

刘丹 张永慧 费慧芝 李小山 冯晓灵

2017, 37(7):  1047-1048. 

摘要 ( 174 )   PDF (246KB) ( 258 )  

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初步分析儿童出现CK-MB活性倒置的原因

韩秀翠 潘岩享

2017, 37(7):  1049-1050. 

摘要 ( 186 )   PDF (354KB) ( 347 )  

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短篇综述

坏死性凋亡与肿瘤

王莲子 李涛

2017, 37(7):  1051-1054. 

摘要 ( 287 )   PDF (319KB) ( 629 )  

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坏死性凋亡是不依赖于caspase激活的一种细胞程序性死亡方式，其激活主要依赖于坏死性小体的形成。坏死性凋亡的调控受到多种因素响，RIPK1既可启动坏死性凋亡，也可抑制坏死性凋亡；caspase-8是坏死性凋亡的重要负反馈调节蛋白；CHIP是新发现的坏死性凋亡调控蛋白。坏死性凋亡的触发为对经典凋亡途径抵抗的肿瘤提供了新的治疗策略。

肿瘤过继性细胞免疫治疗的研究进展

王如岭 吴永娜 王黎明 李莹 严祥

2017, 37(7):  1055-1058. 

摘要 ( 602 )   PDF (333KB) ( 510 )  

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过继性免疫细胞能调节并增加肿瘤患者的免疫功能，有效克服肿瘤免疫逃逸机制。细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、自然杀伤细胞（NK）、肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、树突状细胞（DC）、T细胞受体修饰的T细胞（TCR-T）和嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR-T）分别以不同的机制直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。

尿酸在果糖导致代谢综合征中的可能作用

张可悦 曾学军

2017, 37(7):  1059-1063. 

摘要 ( 328 )   PDF (919KB) ( 426 )  

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过量摄入果糖会导致代谢综合征并升高血尿酸水平。其代谢特点与葡萄糖不同，果糖代谢过程中导致的尿酸升高，可能通过诱导氧化应激、调节蛋白激酶活性和改变血管活性物质含量等途径在果糖诱导的代谢综合征中发挥重要作用。

医学教育

加强新型医学模式的人文教育

孔祥溢 王任直

2017, 37(7):  1064-1066. 

摘要 ( 140 )   PDF (289KB) ( 386 )  

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随着生产力发展水平和科学技术的不断进步，医学模式作为某个特定历史时期人民对健康和疾病现象的认识，先后经历了一系列与其发展水平想适应的模式，即神灵主义医学、机械医学、生物医学和生物-心理-社会医学等四个模式。在生物-心理-社会医学模式的背景下，当代医生的职业素质面临着新的要求和挑战。本文论述在当今中国医疗环境下，加强医学人文知识学习的必要性、重要性，以及如何顺应医学模式的转变。