当期目录

2010年 第30卷 第4期    刊出日期：2010-04-05

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研究短文

抗出血性大肠杆菌Ο157:H7 单克隆抗体的制备及初步应用

杨璇 李学民 杨书豪 付庆

2010, 30(4):  0-0. 

摘要 ( 1703 )   PDF (415KB) ( 882 )  

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研究论文

同种异体骨髓间充质干细胞移植上调急性心肌梗死大鼠Cx43的表达

李金轶 钟国强 柯红红 何燕 温丽娜 韦卓 赵艳梅

2010, 30(4):  337-342. 

摘要 ( 1994 )   PDF (983KB) ( 955 )  

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目的　研究同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植心肌梗死(MI)大鼠后缝隙连接蛋白43(Cx43)在不同时期的动态变化。方法　建立大鼠MI模型。将同种异体MSCs用5-氮胞苷诱导成心肌样细胞并行荧光标记，经二次开胸注射入MI大鼠梗死区和梗死边缘区。各亚组分别于移植后4、8和12周在荧光显微镜下跟踪MSCs移植情况。同时用免疫组化分析Cx43表达与缝隙连接(GJ)分布。结果　MSCs体外诱导可分化为自发搏动的心肌样细胞，表达心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT) 和形成肌丝结构。MSCs移植后可长期存活并在4、8和12周有效上调缺血区Cx43的表达，改善GJ分布紊乱状态。在梗死区Cx43无特殊改变。结论　MSCs具有分化为心肌样细胞的可塑性，移植后上调MI后缺血区Cx43表达，改善GJ分布紊乱。

子痫前期患者系统性氧化应激反应的检测

钱中清 曾耀英 朱 斌 季煜华 何 芳

2010, 30(4):  343-347. 

摘要 ( 1899 )   PDF (945KB) ( 935 )  

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目的：研究子痫前期系统性氧化应激检测方法。方法 组织化学染色检测胎盘组织缺氧表现；用胞内活性氧（ROS）探针H2DCFDA，及全血染色方法检测中性粒细胞（PMN）胞内ROS水平；用H2O2 检测试剂盒检测血清中H2O2水平。结果 与正常妊娠胎盘组织比较，子痫前期患者胎盘组织合胞体细胞显著增多；血管破坏，结构不清，局部血管有纤维钙化特征；非孕妇女、正常妊娠妇女及子痫前期患者PMN胞内ROS水平分别为：45.61±12.2 ?mol/L；51.02±13.6 ?mol/L（p<0.01）；85.1±16.3?mol/L（p<0.01）；而血清H2O2浓度分别为：24.57±5.17 ?mol/L；26.61±3.25 ?mol/L；39.84±9.67。结论 对子痫前期系统性氧化应激进行定性和定量检测结果与疾病发生和发展一致。

MULT1转基因小鼠的基因型鉴定和表型的初步分析

康垒 崔莲仙 何维 马驰

2010, 30(4):  348-354. 

摘要 ( 305 )   PDF (1474KB) ( 1055 )  

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目的 对高亲和力NKG2D配体--MULT1转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析，并进行了MULT1的初步功能研究。方法 通过提取转基因小鼠的基因组DNA进行PCR，以鉴定转基因小鼠的基因型。提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR，检测其基因转录情况。应用流式细胞分析以及免疫组化对MULT1转基因小鼠多种组织细胞进行初步分析。结果 获得鉴定阳性的MULT1转基因小鼠3'S品系25只、4'S品系13只。3'S 和4'S品系的MULT1转基因小鼠的基因转录产物阳性，可用于进行下一步研究。MULT1主要表达在胸腺和小肠上皮间淋巴细胞（intestinal intraepithelial lymphocytes，iIELs），且在胸腺和iIELs表面的表达与小鼠的年龄有关，而在脾脏细胞上基本不表达。iIELs流式细胞仪分析结果显示，CD8+T细胞比例降低，而CD4+CD25+调节性T细胞比例升高。结论 经过基因型和表型的鉴定，表明已经成功构建MULT1转基因小鼠。对转基因小鼠表型的初步分析表明，MULT1可能与胸腺的发育、老化以及免疫调节相关。

大鼠肝纤维化组织内ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697和α-SMA表达增强

扈彩霞 郑加生 王玉珍 姜慧卿

2010, 30(4):  355-359. 

摘要 ( 1790 )   PDF (1410KB) ( 750 )  

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目的 探讨ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白及其mRNA在实验性大鼠肝纤维化形成过程中的动态表达及肌动蛋白细胞骨架的变化。方法 结扎胆总管制备肝纤维化模型，用免疫组织化学、Western blot与RT-PCR检测ROCK-I、α-SMA蛋白及其mRNA的表达，用特异性荧光染色检测肌动蛋白细胞骨架。结果 随着肝纤维化的发展，大鼠肝脏中ROCK-I及α-SMA阳性细胞明显增多；造模1~4周肝组织ROCK-I、α-SMA的阳性面积及ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白表达显著性高于正常组（P<0.05）；ROCK-I基因表达与α-SMA表达呈正相关(r=0.718，P<0.05)；随着造模时间延长，肝组织肌动蛋白荧光信号增强。结论 ROCK-I在肝纤维化发生过程中有表达上调和功能活化，可能通过诱导肌成纤维细胞表型形成而参与肝纤维化的发生。

HBV S基因反义锁核酸抑制病毒体外复制

邓益斌 张 梁 王燕菲

2010, 30(4):  360-363. 

摘要 ( 1972 )   PDF (502KB) ( 1061 )  

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目的　探讨乙型肝炎病毒S基因反义锁核酸（LNA）片段在HepG22.2.15细胞内抗病毒效果及有效LNA片段筛选。方法　设计合成互补于HBV S基因mRNA翻译起始区同一位点的4条不同序列长度LNA片段，以阳离子脂质体介导，作用于HepG22.2.15细胞株，采用ELISA法和实时荧光定量聚合酶链技术（FQ-PCR）分别监测24、48和72h细胞培养上清液中HBsAg和HBV DNA的含量；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法监测细胞代谢。结果　4条不同序列长度反义LNA均显著性抑制HBsAg表达和HBV DNA复制，72h后最高抑制率分别达72.43%和34.73%。HBsAg分泌量和HBV DNA的拷贝数均明显低于对照组（P<0.01）。LNA对细胞代谢无明显影响。结论　针对HBV S基因mRNA翻译起始区的反义LNA片段体外能显著抑制HBV表达，且抑制作用最强序列长度在15~25个碱基之间。

产朊假丝酵母尿酸酶与苛求芽孢杆菌尿酸酶特性的比较

武文明 段瑞娴

2010, 30(4):  364-368. 

摘要 ( 293 )   PDF (743KB) ( 745 )  

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目的 探讨产朊假丝酵母尿酸酶与苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶的特性。方法 复苏、培养新购进菌株以制备尿酸酶，利用硫酸铵分级沉淀法、DEAE-cellulose 52层析和制备PAGE纯化尿酸酶，使用纯化的尿酸酶测定其活力，表征并分析其亚基构成。结果 两种尿酸酶分子均为同四聚体，产朊假丝酵母尿酸酶的单肽链分子量和天然酶分子量分别为33.0 ku和134.0 ku，其最适pH值接近8.8，在pH 7.4时可保留50％以上活性，该酶的米氏常数(Km)为(32.8 ± 3.1)μmol/L (n=10)，黄嘌呤的抑制常数为 (4.8 ± 0.2) μmol/L (n=3)；而苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶则分别为35.7 ku和151.0 ku，最适pH 大于9.0，pH 7.4时酶活性保留不到30%，其Km为(204 ± 14)μmol/L (n=8)，黄嘌呤的抑制常数为(41±7)μmol/L (n=5)。结论 该研究对构建杂合药用尿酸酶以治疗高尿酸血症相关疾病具有重要的理论意义。

肝细胞生长因子减轻皮质神经元的缺氧/复氧损伤

胡智兴 耿菊敏 梁道明 吴兰鸥 郑春兰 罗海芸 陶剑

2010, 30(4):  369-373. 

摘要 ( 326 )   PDF (913KB) ( 807 )  

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目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧/复氧诱导大鼠皮质神经元凋亡的保护。方法 分离培养SD大鼠皮质神经元，经HGF(15、30和60 μg/L)预处理后被缺氧/复氧诱导凋亡，用MTT比色法检测细胞存活率；用Hoechst 33258染色法和流式细胞仪检测神经元的凋亡；用比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)和caspase- 3活性变化。 结果 与正常对照组相比，缺氧/复氧组神经元的细胞存活率显著下降，细胞凋亡率和caspase-3活性升高(均P＜0.05)；而HGF预处理12 h，可显著逆转缺氧/复氧所致细胞存活率降低，凋亡率增加，LDH 活性上升，caspase-3活性升高(均P＜0.05)，且这些效应与HGF剂量正相关。此外，HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通路抑制剂LY294002阻断。结论 HGF减轻缺氧/复氧所诱导的神经元凋亡可能与其激活神经元的PI3K/Akt信号通路，减少caspase-3表达有关。

缺碘致甲状腺功能减退大鼠肾脏抗氧化能力降低

许静 张云芬 张雅中 裴玉梅 房辉

2010, 30(4):  374-377. 

摘要 ( 275 )   PDF (664KB) ( 735 )  

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目的 研究甲减大鼠肾脏抗氧化能力的变化，探讨甲状腺激素水平对肾脏的影响。方法 Wistar大鼠随机分2组：甲减组（HT）和对照组（Control），2组大鼠通过不同碘含量饮食复制甲减动物模型；肾脏形态定量学观察；比色法测定肾脏组织丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）及生物膜Na+，K+-ATPase活性；RT-PCR方法测定肾脏Na+,K+-ATPase α1亚基的基因表达。结果 与对照组比较，HT组FT3、FT4、TT3、TT4显著降低(P<0.01)；肾小球萎缩；MDA含量和GPx活性显著升高( P<0.05)，而SOD和Na+，K+-ATPase活性显著降低(P<0.05)；Na+,K+-ATPase α1亚基的基因表达下降（P<0.05）。结论 甲状腺激素不足可导致肾脏抗氧化能力下降，肾小球萎缩。

表达突变SOD1的星形胶质细胞表现了对氧化应激的易损性

段伟松 卜 晖 郭艳苏 李忠尧 李春岩

2010, 30(4):  378-382. 

摘要 ( 281 )   PDF (1002KB) ( 815 )  

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目的　研究突变SOD1G93A星形胶质细胞是否表现了对氧化应激的易损性。方法　原代突变SOD1星形胶质细胞和野生型SOD1星形胶质细胞体外培养。实验细胞分为突变型组和野生型组；突变组和野生型组又分为对照组、血清剥夺组和EGCG干预组；使用5和10?mol/LEGCG分别干预；用MTT检测细胞的增殖能力；激光共聚焦检测ROS；用Western blot检测细胞中Nrf2及其介导的HO1和NQO1的表达。结果　与正常星形胶质细胞相比，含有突变SOD1星形胶质细胞MTT显著下降（p <0.01）。细胞中Nrf2表达下降了44%（p <0.01）。Nrf2介导的HO1和NQO1的表达水平也分别下降了43%（p <0.01）和40%（p <0.05）。5和10?mol/L EGCG使NQO1的表达水平分别升高了1.5和2.5倍（p <0.05）,也升高了Nrf2的表达并促进了Nrf2向细胞核中转移。结论 突变SOD1造成了星形胶质细胞对氧化应激的易受损性。

阿托伐他汀减轻肾性高血压大鼠血管重构

陈永宏 杨松 周建中

2010, 30(4):  383-388. 

摘要 ( 314 )   PDF (938KB) ( 673 )  

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目的 探讨内皮脂肪酶(EL)在高血压血管重构中的的作用及阿托伐他汀的干预效应。方法 用两肾一夹法建立肾性高血压大鼠模型，将21只大鼠随机均分为假手术组（Sham），肾性高血压组(RH)，阿托伐他汀组(ATV)，术后4周末开始用阿托伐他汀30 mg/kg·d连续灌胃8周。检测大鼠尾动脉收缩压(SBP)，光镜下观察血管结构并计算胸主动脉中层壁厚与内径之比(MT／LD)，免疫组化法检测EL与NF-κB的表达, 实时荧光定量RT-PCR检测EL mRNA表达。结果 RH组较Sham组SBP、MT/LD、EL、EL mRNA及NF-κB表达显著升高（P＜0.05），而高密度脂蛋白（HDL）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）水平显著降低（P＜0.05）。ATV组较RH组MT/LD、EL、EL mRNA及NF-κB表达显著降低（P＜0.05），TC、LDL水平明显下降，HDL水平显著升高（P＜0.05）。结论 阿托伐他汀可以减轻血管重构，其机制可能与抑制EL表达有关。

11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

林梅 张木勋 刘永健 张建华 余毅恺 帅红霞

2010, 30(4):  389-393. 

摘要 ( 306 )   PDF (877KB) ( 779 )  

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目的 观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氢酶1型（11β-HSD1）表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）的影响。方法 pSuper质粒为载体，构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886，转染NIT-1细胞，RP-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达。oligo886重组质粒对25mmol/L葡萄糖培养基中NIT-1细胞进行转染，测GSIS。结果 转染oligo886和oligo866质粒NIT-1细胞11β-HSD1mRNA下降（78.1±2.9）%和（51.7±2.7）%，11β-HSD1蛋白的水平下降（82.2±2.1）%和（56.5±2.0）%。oligo866转染25mmol/L浓度葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后，GSIS较对照组明显升高（P＜0.01）。结论 11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力，提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢，参与葡萄糖刺激胰岛素分泌。

移植胚鼠神经干细胞对大鼠脊髓损伤后红核神经元损伤作用的影响

孔令胜 聂冬丽 张军臣 张浩 许华

2010, 30(4):  394-397. 

摘要 ( 263 )   PDF (659KB) ( 742 )  

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目的 研究神经干细胞（NSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）后红核神经元的作用。方法5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）法标记处于对数生长期的NSCs，采用电控脊髓损伤打击装置制作大鼠脊髓损伤模型。实验分为3组：NSCs组、SCI组和假手术组（Sham组）。SCI后3d进行NSCs移植，用免疫组化法观察移植细胞的存活及迁移情况，用辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪技术标记红核神经元并用四甲基联苯胺（TMB）呈色反应显示红核脊髓束神经元的存活情况，用行为学（BBB）评分法观察大鼠瘫痪肢体的恢复情况。结果 在损伤脊髓区域可检测到Brdu标记的阳性NSCs，中脑HRP标记红核神经元数目明显多于SCI组(P<0.01)，BBB评分亦明显高于SCI组（均P<0.01）。结论 体外培养的胚胎大鼠NSCs在移植到脊髓损伤区域后可存活和迁移，对SCI后中脑红核神经元具有保护作用，从而促进了大鼠肢体功能的恢复。

用比较基因组杂交技术（CGH）检测肾癌染色体畸变

王坚 徐仁方 宋青峰

2010, 30(4):  398-400. 

摘要 ( 294 )   PDF (420KB) ( 757 )  

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目的 应用比较基因组杂交技术（CGH）分析原发性肾癌肿瘤组织中染色体异常变化，探讨肾癌细胞遗传物质的改变，揭示肾癌发生发展的内在本质及其与临床特征之间的关系。方法 采用CGH技术对12例肾癌组织提取的全基因组DNA进行检测，以了解肾癌全基因组的变化。结果 CGH技术检测的12例肾癌标本中均有染色体的畸变（扩增和/或缺失），常见的扩增区是（1p、4p、5q、7p、9p、16p），常见的缺失区是（3q、4q、6q、9q、14q、18q）。结论 原发性肾癌存在广泛的遗传物质不平衡现象，肾癌细胞染色体扩增和/或缺失可能是肾癌发生发展的基础。

棕榈酸诱导胰岛素瘤细胞MIN6细胞凋亡

王威 曹翠平 陈颖 张丹 韩玲玲 刘国良

2010, 30(4):  401-405. 

摘要 ( 326 )   PDF (797KB) ( 823 )  

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目的 探讨蛋白激酶B及其磷酸化在棕榈酸诱导的胰岛素瘤细胞株（MIN6）凋亡中的作用。方法 胰岛素瘤细胞株MIN6分别在含有不同棕榈酸浓度(0~0.5mmol/L)的DMEM高糖培养基中孵育,培养基中加或不加PI3K/PKB的阻断剂LY294002；TUNEL法观察凋亡并计数凋亡率；透射电镜观察MIN6细胞株超微结构；Western检测蛋白激酶B（PKB）及其磷酸化蛋白p-PKB(ser473)的表达；RT-PCR法检测BAX、BCL-2 mRNA的表达。结果 MIN6细胞凋亡随着培养基中棕榈酸浓度的增加而增加，LY294002可增强其凋亡程度；棕榈酸抑制MIN6细胞的PKB在473位丝氨酸位点的磷酸化，抑制BCL-2 mRNA的表达并促进BAX mRNA的表达。结论 棕榈酸可能通过抑制PKB磷酸化的激活而诱导糖尿病时胰岛β细胞的凋亡。

人TSLC1基因核心启动子的克隆和鉴定

高静 申林 明树红

2010, 30(4):  406-410. 

摘要 ( 327 )   PDF (561KB) ( 737 )  

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目的 克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区，用于开展其转录调控机制的研究。方法 用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段，连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细胞，检测细胞裂解液中的双荧光素酶活性，确定TSLC1基因的核心启动子区。结果 在人TSLC1基因启动子区的分段克隆中，ATG上游-68～-329bp片段在A549及NCI-H446细胞中均具有很强的启动活性，对TSLC1的转录起重要作用。结论 人TSLC1基因翻译起始位点ATG上游-68～-329bp区域可能为基因的核心启动子区。

临床园地

肢端肥大症患者垂体生长激素瘤切除术后身体组分的改变

吴勤勇 朱惠娟 顾锋 潘慧 邓洁英 史轶蘩

2010, 30(4):  411-414. 

摘要 ( 326 )   PDF (515KB) ( 700 )  

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目的 探讨肢端肥大症患者病情活动期与缓解后身体组分的变化与生长激素（GH）、类胰岛素生长因子-1（IGF-1）水平的相关性。方法 治疗前后患者做生长激素葡萄糖抑制试验（OGTT），测定GH谷值、空腹IGF-1水平；使用体脂分析仪测定身高、体重、脂肪百分含量（Fat%）、去脂肪量（FFM）和身体总水量（TBW）。结果 活动期男性患者体重指数（BMI）和FFM显著高于正常对照，Fat%则显著低于后者；缓解后，患者GH谷值和IGF-1水平明显下降，BMI仍显著高于正常男性，而Fat%和FFM分别呈现增加和减少的趋势，与GH谷值和IGF1水平的降低显著相关。活动期女性患者与正常女性比较，BMI、FFM显著高于后者，而两者Fat%无显著差异；缓解后，患者FFM逐渐减少，与GH 谷值显著相关，Fat%无明显变化。结论 肢大患者身体组分与正常人比差异显著。缓解后身体组分发生变化，与GH谷值、IGF-1水平密切相关。

肾上腺神经节瘤的CT表现

贺丹 秦明伟

2010, 30(4):  415-418. 

摘要 ( 335 )   PDF (994KB) ( 1015 )  

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目的 探讨肾上腺神经节瘤的CT表现特点及其诊断价值。方法 回顾性分析16例患者的临床病理及影像学资料,7例患者行CT平扫， 9例行CT平扫加增强,15例经手术病理证实，1例经穿刺活检证实为肾上腺神经节瘤。结果 16例患者CT扫描可见2例肿物为囊实性，14例为实性；5例肿物内伴有钙化；平扫CT值介于20～40HU左右，9例增强扫描后5例轻度延迟强化，4例强化不明显。结论 肾上腺神经节瘤CT扫描具有特征性，CT扫描对正确诊断肾上腺神经节瘤具有重要价值。

研究短文

氧化修饰减弱HDL上调人脐静脉内皮细胞ABCA1表达

刘芃 李公信 刘映峰 缪绯 徐琳 赵欢 张紫微

2010, 30(4):  419-420. 

摘要 ( 265 )   PDF (338KB) ( 675 )  

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷诱导肝癌细胞HepG2 RUNX3基因表达及增强药物敏感性

张雪妍 蒲春霞 张煦

2010, 30(4):  421-423. 

摘要 ( 289 )   PDF (469KB) ( 745 )  

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ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中表达

周红丽 靳蕊霞 韩亚荣 黄波

2010, 30(4):  424-425. 

摘要 ( 238 )   PDF (424KB) ( 769 )  

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短篇综述

新疆哈萨克族食管癌相关基因研究新进展

郭辉 丁剑冰 孙伟 张彤

2010, 30(4):  428-430. 

摘要 ( 291 )   PDF (487KB) ( 675 )  

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新疆哈萨克族是食管癌的高发民族，近年来在遗传基因方面的研究受到越来越多的关注。通过对P53、Rb等在食管癌发生发展过程中生物活性的研究，检测民族遗传易感性方面是否存在差异，为肿瘤的治疗和研究提供帮助。

中心体在肿瘤发生及治疗中的作用

薛丽 白玉杰

2010, 30(4):  431-433. 

摘要 ( 383 )   PDF (433KB) ( 1028 )  

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中心体维持细胞形态和染色体的准确分离，与损伤修复系统协同应对DNA损伤，维护基因组的稳定性。中心体结构或功能异常与非整倍体及肿瘤发生密切相关，抑制中心体蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡，将成为肿瘤治疗的新策略。

P2嘌呤受体亚型与冠心病的关系

聂永莉 张玉芹

2010, 30(4):  434-436. 

摘要 ( 301 )   PDF (417KB) ( 812 )  

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嘌呤受体包括P1受体和P2受体。本文综述了P2嘌呤受体的多个亚型与冠心病之间的关系,P2Y1、P2Y2、P2Y11和P2X7受体参与动脉粥样硬化斑块中的炎症反应,P2X3受体参与了心绞痛的伤害性反应,P2X4受体参与血管重塑和增强非梗死区心肌的收缩力,P2Y2和P2Y6与冠脉介入术后再狭窄的形成有关,P2Y11受体的多态性可增加心肌梗死的风险,P2Y1、P2Y12和P2X1受体则参与了血栓的形成。研制P2嘌呤受体各亚型特异性的激动剂和拮抗剂对开发治疗冠心病的新药具有重要意义。

γH2AX和ATM与内源性氧化剂所致DNA损伤关系的研究进展

赵晋 郭忠 马建秀

2010, 30(4):  437-441. 

摘要 ( 293 )   PDF (675KB) ( 778 )  

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本文综述了正常细胞及肿瘤细胞系中内源性氧化剂所致的磷酸化ATM (CAA) 和γH2AX (CHP)的形成与表达；同时综述了各种影响因子和生长条件对CAA和CHP表达的影响。