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2020年 第40卷 第1期    刊出日期：2020-01-05

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研究论文

CX3CR1通过调节Ca²⁺内流介导神经元凋亡影响缺血性卒中小鼠预后

刘畅, 张申, 周菲惠, 夏阳, 李智高, 王进昆, 汤志伟

2020, 40(1):  1-8. 

摘要 ( 272 )   PDF (3820KB) ( 449 )  

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目的 观察脑缺血后趋化因子受体1(CX3CR1)在神经元上的表达变化,并探讨其作用及机制。方法 将野生型C57/BL6小鼠和CX3CR1基因敲除小鼠,分别设置对照组(假手术组)和小鼠中动脉永久闭塞(pMCAO)模型,用磁共振成像(MRI)检测30 min后脑缺血范围和24 h后梗死面积;免疫荧光三重染色法检测凋亡;Western blot检测CX3CR1蛋白的表达。在体外,培养原代神经元,建立氧糖剥离(OGD)细胞缺血模型;用MTT法检测细胞存活率;免疫荧光检测神经元CX3CR1的表达;激光共聚焦显微镜观察神经元内Ca²⁺浓度变化。结果 在野生型小鼠中,与对照组和健侧相比,pMACO后,患侧CX3CR1表达显著升高(P＜0.05),且CX3CR1与凋亡蛋白caspase-3在神经元上共表达;与野生型小鼠相比,CX3CR1基因敲除小鼠pMACO 30 min后缺血损伤面积相似,但24 h后CX3CR1基因敲除小鼠梗死面积小于对照组(P＜0.05);在体外,原代神经元OGD后CX3CR1表达显著升高(P＜0.05),敲除神经元上CX3CR1,可减轻谷氨酸介导的兴奋性损伤,细胞存活率显著上升,同时观察到,敲除CX3CR1可降低谷氨酸介导的Ca²⁺ 内流到神经元的速度和总量。结论 缺血可诱导神经元CX3CR1的表达,且神经元CX3CR1可以通过调节Ca²⁺内流来介导神经元的凋亡。

miR-29a对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响

郭雄飞, 王挺, 汤立新

2020, 40(1):  9-15. 

摘要 ( 235 )   PDF (1111KB) ( 267 )  

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目的 探讨miR-29a对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)活力和凋亡的影响。方法 分离培养健康人FLS(n-FLS)和RA患者FLS(RA-FLS);Western blot检测n-FLS和RA-FLS中标志物CHI3L1蛋白表达;将miR-29a mimics、si-NFAT5及miR-29a+NFAT5转染RA-FLSs,转染48 h后,RT-qPCR检测miR-29a和NFAT5 mRNA表达;MTT法及流式细胞计量术分别检测各组细胞活力和凋亡率;Western blot检测p38、p-p38、cleaved-caspase3蛋白表达;通过双荧光报告基因检测系统检测过表达或抑制miR-29a后NFAT5表达,验证miR-29a和NFAT5的靶向关系。结果 与n-FLS比较,RA-FLS中CHI3L1蛋白表达明显升高(P＜0.05);过表达miR-29a或抑制NFAT5后,RA-FLS细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,p-p38表达明显降低,cleaved-caspase3表达明显升高(P＜0.05)。miR-29a与野生型NFAT5 3′UTR共转染组RA-FLS的荧光素酶活性明显降低,而anti-miR-29a与野生型NFAT5 3′UTR共转染组荧光素酶活性明显升高(P＜0.05);过表达miR-29a可明显下调RA-FLS中NFAT5表达,抑制miR-29a表达可明显上调NFAT5表达(P＜0.05);过表达NFAT5可减弱过表达miR-29a对RA-FLS活力和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 miR-29a可通过靶向NFAT5下调p38MAPK信号通路抑制RA-FLS活力及诱导细胞凋亡。

基于RNA-seq的db/db小鼠大脑皮质的转录组学分析

郭宝璐, 白涛, 郭杰, 刘萌萌, 杨彩红, 章毅, 范彦英

2020, 40(1):  16-23. 

摘要 ( 359 )   PDF (2320KB) ( 346 )  

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目的 通过对db/db和野生型(WT)小鼠大脑皮质组织全转录组学分析,探索参与调节2型糖尿病诱导的脑功能障碍的差异表达基因(DEGs)及相关通路和网络。方法 取雄性野生型WT和db/db小鼠各9只,在第8和24周检测小鼠的体质量和血糖,之后收集动物大脑皮质进行全转录组测序(RNA-seq),并进行DEGs,GO、KEGG及蛋白互作网络分析。结果 与WT组相比,db/db组大脑皮质发生变化的306个转录本中有178个表达上调,128个表达下调。 DEGs中,43个上调(如Clcnka和Trim17),59个下调(如Arih1和Nectin-3)。蛋白互作网络图中的13个枢纽基因均下调,且大多属于线粒体编码家族。同时,db/db小鼠在多项GO富集类别中具有显著差异,如细胞过程、细胞部分等。此外,KEGG功能富集结果显示DEGs在代谢、帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)等相关通路中高度富集,且这些富集通路中的DEGs主要影响了线粒体氧化磷酸化过程。结论 揭示了2型糖尿病与中枢神经系统损伤之间的关系及潜在的相关基因、通路及网络。

尼古丁促进高糖/高脂培养的大鼠心肌细胞系H9C2凋亡

刘雯霞, 刘彩红, 郭蕊, 孟芝君, 高佳, 王亚静

2020, 40(1):  24-29. 

摘要 ( 219 )   PDF (1578KB) ( 289 )  

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目的 研究在不同浓度尼古丁(Nic)条件下高糖/高脂(HGHL)对大鼠心肌细胞系H9C2凋亡的影响。方法 体外培养H9C2细胞,给予不同浓度Nic(6×10^-8、6×10^-7、6×10^-6mol/L)2 h后,HGHL(33 mmol/L葡萄糖和500 μmol/ L棕榈酸酯)培养24 h,CCK8法检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞活力;Western blot检测 Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3及caspase3的表达及ERK1/2、JNK和p38MAPK磷酸化水平;流式细胞计量术测定细胞凋亡和上清液ROS水平。结果 与对照组相比,HGHL和尼古丁联合HGHL均显著抑制细胞活力,增加上清液中LDH水平(P＜0.001);HGHL及Nic+HGHL细胞凋亡率显著增加(P＜0.001)及cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(P＜0.01);Bcl-2/Bax蛋白表达显著下降(P＜0.01);在Nic+HGHL 组,ROS水平表达最显著(P＜0.001);HGHL能激活MAPK磷酸化,Nic+HGHL组ERK1/2磷酸化水平显著升高(P＜0.01);ROS清除剂(NAC)能显著减少caspase3蛋白表达水平(P＜0.001)。结论 尼古丁、HGHL能导致H9C2细胞损伤并增加其凋亡,其发生与ROS及MAPK信号通路密切相关。

LncRNA HEIH通过miR-98-5p调节肺癌细胞增殖和凋亡

蒋庆锋, 于永魁, 程金华, 申思宁, 邢文群

2020, 40(1):  30-36. 

摘要 ( 215 )   PDF (810KB) ( 261 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系。结果 与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P＜0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高。因此,后续实验选择A549细胞为研究对象。沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P＜0.05)(MTT法);升高凋亡率(P＜0.05);抑制CCND1蛋白表达(P＜0.05),促进caspase-3蛋白表达(P＜0.05)。并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响。结论 沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡。

巯基化Ras相关蛋白7a抑制人肝癌细胞系HepG2.2.15中HBV复制

宋佳茹, 朱席琳, 伍晓盼, 刘英

2020, 40(1):  37-40. 

摘要 ( 200 )   PDF (767KB) ( 290 )  

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目的 探究人肝癌细胞HepG2.2.15中Ras相关蛋白7a (Rab7a)的巯基化机制及其对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 通过生物素转换实验检测H₂S对HepG2.2.15细胞中Rab7a巯基化水平的影响并验证Rab7a的巯基化位点;通过酶联免疫法、RT-qPCR和Western blot检测巯基化的Rab7a对HBV复制标志物水平的影响。结果 在HepG2.2.15细胞中H₂S可增强内源性Rab7a的巯基化水平(P＜0.01);NaHS(H₂S速释供体)可增强外源性Rab7a的巯基化表达,但其巯基化位点突变后则不受NaHS影响(P＜0.01);Rab7a巯基化后,可抑制HepG2.2.15细胞上清中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA及细胞内HBV-cccDNA、3.5kb RNA、total RNA和HBcAg蛋白的表达(P＜0.05)。结论 Rab7a的巯基化抑制HBV阳性细胞系HepG2.2.15细胞中HBV的复制水平。

3种不同来源CD146阳性间充质干细胞亚群的生物学特性比较

王巧玲, 张晓彤, 徐衍, 张乃月, 朱榕嘉, 赵春华

2020, 40(1):  41-47. 

摘要 ( 229 )   PDF (4587KB) ( 357 )  

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目的 比较脐带间充质干细胞(UCMSCs)、脂肪间充质干细胞(AMSCs)以及骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中CD146⁺细胞亚群的生物学特性。方法 用磁珠分选法分选不同组织来源的间充质干细胞,获得高纯度CD146⁺亚群;用流式细胞计量术分析表型;透射电子显微镜观察细胞结构;成脂诱导分化后油红O染色;RT-qPCR检测成脂相关基因LPL、C/EBPα和PPARγ表达;成骨诱导分化后ALP染色,检测成骨相关基因ALP、OPN和RUNX2表达;检测细胞干性基因及血管生成相关基因表达;检测细胞体外成管能力。结果 3种组织来源CD146⁺ MSCs具有相似的形态,表达除CD106外相似的细胞表面标志分子。与其他两种细胞比较,CD146⁺AMSCs表达更高的干性基因OCT-4、SOX2和NANOG。在相同的诱导时间,CD146⁺ UCMSCs成脂和成骨能力较其他两种来源的CD146⁺MSCs弱。3种组织来源的CD146⁺ MSCs均可表达血管内皮相关刺激因子BFGF、VEGF、Ang-1和EGF,但CD146⁺BM-MSCs具有更强的体外成管能力。结论 3种不同来源的CD146⁺MSC具有不同的生物学特性,为进一步研究不同组织来源的间充质干细胞的特定应用提供了基础。

姜黄素抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞系表型转化

陈民佳, 杜娟, 袁丹凤, 张蜀, 黄宏, 朱方强

2020, 40(1):  48-53. 

摘要 ( 223 )   PDF (2311KB) ( 321 )  

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目的 探讨姜黄素抑制TGF-β1诱导的肾纤维化的作用及分子生物学机制。方法 应用10 ng/mL TGF-β1单独或联合姜黄素(Cur)(6.25、12.5、25、50和100 μmol/L)共同作用人肾小管上皮细胞系(HKCs)72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态,免疫组化检测纤维细胞特异蛋白-1 (FSP-1)表达;同时,通过Western blot检测肾小管上皮细胞标志物E-cardhrin和细胞角化蛋白以及基质标志物波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达变化,以及AKT/mTOR信号通路关键蛋白的表达。结果 HKCs贴壁增殖,呈铺路石样外观。TGF-β1单独刺激能明显促进细胞由上皮样形态向纤维样细胞形态转化。当TGF-β1与姜黄素联合作用于HKCs时,姜黄素在12.5～50 μmol/L浓度时能明显对抗TGF-β1诱导的细胞形态转变而维持HKCs细胞铺路石样外观,同时,TGF-β1能明显抑制HKCs细胞E-cardhrin和角化蛋白基因表达(P＜0.05,P＜0.01),而促进FSP1阳性细胞显著增加(P＜0.05,P＜0.01);上调波形蛋白、α-SMA和I型胶原的表达(P＜0.05,P＜0.01);并且,AKT/mTOR信号通路关键蛋白Akt、mTOR、p70S6K、4E-BP1和eIF4E的磷酸化水平表达也显著增加(P＜0.05,P＜0.01)。而姜黄素能抑制TGF-β1诱导的HKCs表型转化,同时下调TGF-β1诱导AKT/mTOR信号通路关键蛋白的磷酸化水平(P＜0.05)。结论 姜黄素通过抑制Akt/mTOR信号通路对抗TGF-β1诱导的上皮细胞-间质细胞转化,可能是姜黄素抗肾纤维化的关键分子机制之一。

人穿孔素在sf9昆虫细胞中的表达和纯化

陈风晔, 刘孟雨, 周雅博, 梁晓雨, 黄波, 解静

2020, 40(1):  54-59. 

摘要 ( 315 )   PDF (1651KB) ( 395 )  

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目的 建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法。方法 在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素。使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析。采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质; 用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性。结果 纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性。与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下来的研究以及其他蛋白质的纯化提供一定参考。结论 以一种简单的方法在sf9昆虫细胞内表达并纯化出了有活性的人穿孔素。

靶向调控c-SKI的microRNA的筛选及验证

王娟, 李鹏, 吕忠英, 张颖, 曹桂秋

2020, 40(1):  60-66. 

摘要 ( 204 )   PDF (872KB) ( 196 )  

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目的 筛选和验证靶向调控c-SKI并与纤维化相关的microRNA(miRNA)。方法 生物信息学方法预测并结合文献报道,筛选出靶向c-SKI的候选miRNAs,RT-qPCR检测人心肌成纤维细胞(HCFBs)中候选miRNAs和c-SKI的表达,筛选出抑制作用最显著的miRNA;构建c-SKI-3′-UTR野生型(c-SKI-wt)和突变型(c-SKI-mut)载体,分别与miR-155a-5p/miR-17a-5p的模拟物、抑制剂及对照在人胚肾上皮细胞(HEK293T)中共转染,双萤光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性;接着,分别将miR-155a/miR-17a-5p mimics和inhibitor转染至人心肌成纤维细胞(HCFBs),Western blot检测各组细胞c-SKI的表达。结果 1)经筛选miR-155a-5p和miR-17a-5p对c-SKI的抑制作用最明显(P＜0.01);2)与NC组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组萤光素酶活性均显著下降(P＜0.05),miR-155a-5p/miR-17a-5p inhibitor组萤光素酶活性均明显增强(P＜0.05);3)与NC组相比,miR-155a-5p/miR-17a-5p mimics组中c-SKI蛋白表达显著下调,miR-155a-5p/miR-17a-5p inhibitor组中c-SKI的表达显著上调(P＜0.01)。结论 miR-155a-5p和miR-17a-5p可分别靶向结合c-SKI的3′-UTR,在HCFBs中负性调控c-SKI的表达。

IL-33对人永生化角质形成细胞系和模型小鼠银屑病样皮损的影响

段亚菊, 王文茜, 胡华, 付丹丹, 宋向凤, 田中伟

2020, 40(1):  67-72. 

摘要 ( 318 )   PDF (1772KB) ( 322 )  

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目的 观察白细胞介素-33(IL-33)对人永生化角质形成细胞系(HaCAT)和咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病样皮损的影响,并对其可能的机制进行探讨。方法 不同浓度IL-33刺激HaCAT细胞;CCK8法检测细胞增殖;Western blot 检测细胞中LC3、Beclin1和p-STAT3的表达。将BALB/c雌性小鼠随机分为:正常对照组、IMQ组(背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立银屑病样皮损模型)和IL-33处理组(腹腔注射IL-33)。Western blot检测皮损组织中自噬相关蛋白的表达。结果 与对照组相比,25 ng/mL的IL-33处理组促进HaCAT细胞的增殖作用最明显(P＜0.05),同时,IL-33可促进LC3、Beclin1和p-STAT3蛋白的表达(P＜0.05)。在小鼠银屑病样模型中,与正常对照组相比,IMQ组小鼠背部出现鳞屑和红斑伴有表皮增厚,而IL-33处理组与IMQ组相比小鼠背部皮损鳞屑、红斑及增厚更明显(P＜0.01)。IL-33处理组皮损中自噬相关蛋白的表达水平低于IMQ组(P＜0.05),p-STAT3蛋白的表达水平均高于正常对照组和IMQ组(P＜0.05)。结论 IL-33促进HaCAT细胞的增殖,诱导细胞自噬,加重咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的发生和发展,其机制可能是通过引起STAT3信号通路的活化而实现的。

低钾状态下泮托拉唑致小鼠缓慢型心律失常

李帅, 朱文根, 阎霞, 赖玮, 俞建华, 万蓉, 洪葵

2020, 40(1):  73-77. 

摘要 ( 199 )   PDF (561KB) ( 182 )  

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目的 探讨低钾状态下泮托拉唑(PPZ)致小鼠心律失常的机制。方法 将小鼠随机分为4组:对照组、PPZ组[20 mg/(kg·d),腹腔注射5周]、低钾组[FS组,用呋塞米(FS)复制小鼠低钾模型]和低钾泮托拉唑组(FS+PPZ组),每组各20只。第5周末监测各组小鼠心电参数(HR、PR间期、QRS间期和QTc间期)和自发性心律失常的发生。荧光定量PCR和Western blot检测超级化激活环核苷酸门控阳离子通道2和4(HCN2和HCN4)、电压门控性Na⁺通道α亚基(SCN5A)、L型Ca²⁺通道α1C亚基(CACNA1C)及T型Ca²⁺通道α1G亚基(CACNA1G)mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较,PPZ组HR降低和PR间期延长(P＜0.01和P＜0.05);与FS组比较,FS+PPZ组HR和PR间期均进一步降低和延长(P＜0.01和P＜0.05),有4只小鼠出现窦性停搏(P＜0.05)。PPZ组较对照组HCN4 mRNA和蛋白水平均表达下降(P＜0.01),FS+PPZ组较FS组进一步降低(均P＜0.01);PPZ组较对照组HCN2仅mRNA水平表达下降(P＜0.05),FS+PPZ组较FS组进一步降低(P＜0.01)。结论 在低钾状态下泮托拉唑可导致小鼠缓慢型心律失常,可能与HCN2和HCN4基因表达异常有关。

戊酸雌二醇改善多囊卵巢综合征大鼠氯米芬诱导的子宫内膜容受性

邵锐锋, 何驰华, 王莹

2020, 40(1):  78-82. 

摘要 ( 303 )   PDF (1246KB) ( 226 )  

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目的 探讨戊酸雌二醇(E₂V)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠氯米芬促排卵子宫内膜容受性的改善作用。方法 将大鼠分为对照组(0.9%氯化钠溶液灌胃)、PCOS模型组(50 mg/kg氯米芬灌胃)、E₂V低、中和高剂量干预组[(0.2、0.5、1.0)mg/kg E₂V+50 mg/kg氯米芬灌胃]。用ELISA检测血清性激素水平;观察子宫内膜形态学变化;用RT-qPCR和Western blot检测子宫内膜中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、同源框基因(Hox)A10、空通气孔同源框(Emx)2、整合素(integrin)α_vβ₃ mRNA和蛋白表达情况。结果 与对照组相比,PCOS模型组大鼠黄体生成激素/卵泡生成激素(LH/FSH)、睾酮(T)水平、Emx2 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P＜0.05),雌二醇(E2)水平、腺体面积、腺腔面积、子宫内膜厚度及腺/间质面积比、ER、PR、HoxA10、integrin α_vβ₃ mRNA和蛋白相对表达量均明显降低(P＜0.05);与PCOS模型组相比,E₂V低、中和高剂量干预组上述指标变化均相反(P＜0.05)。结论 E₂V可改善PCOS大鼠的氯米芬促排卵子宫内膜容受性,推测与上调ER、PR、HoxA10、integrin α_vβ₃ mRNA和蛋白表达,下调Emx2 mRNA和蛋白表达有关。

甲基莲心碱通过调控miR-29a-3p/AQP4表达抑制Aβ1-42致PC12细胞的损伤

曾利敏, 鲁召辉, 周丽平, 朱超霞

2020, 40(1):  83-91. 

摘要 ( 211 )   PDF (3515KB) ( 273 )  

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目的 探讨甲基莲心碱(Nef)在β淀粉样蛋白(Aβ1-42)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞PC12的作用及其分子机制。方法 将PC12细胞分为对照组、模型组(4 μg/mL Aβ1-42培养24 h)和干预组(低、中、高剂量甲基莲心碱)。MTT法检测PC12细胞存活;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测水通道蛋白4(AQP4)、Bcl-2和Bax表达量;qPCR检测细胞中miR-29a-3p和AQP4 mRNA表达。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告分析miR-29a-3p和AQP4的靶向关系。在模型组转染miR-29a-3p、si-AQP4,或转染anti-miR-29a-3p并进行高剂量Nef干预,考察其对Aβ1-42损伤PC12细胞存活和凋亡的影响。结果 与模型组相比,甲基莲心碱组细胞存活率和Bcl-2、miR-29a-3p表达明显升高,细胞凋亡率和Bax、AQP4 mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05)。AQP4是miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p过表达和抑制AQP4表达均显著提高PC12细胞存活率和Bcl-2表达量(P＜0.05),降低细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P＜0.05)。抑制miR-29a-3p表达逆转甲基莲心碱对Aβ1-42损伤PC12细胞存活、Bcl-2蛋白水平的促进作用,以及逆转甲基莲心碱对细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用。结论 甲基莲心碱通过miR-29a-3p/AQP4抑制Aβ1-42所致PC12细胞损伤,促进细胞存活,并抑制细胞凋亡。

土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

杨蒙生, 李丽, 刘雪峰, 杨小龙

2020, 40(1):  92-96. 

摘要 ( 217 )   PDF (1381KB) ( 199 )  

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目的 本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法 细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16 μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8 μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01);4和8 μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P＜0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P＜0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。

异丙酚通过miR-218抑制人食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭和迁移

高虹, 金慧, 刘春芝, 杨静远

2020, 40(1):  97-104. 

摘要 ( 211 )   PDF (4291KB) ( 252 )  

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目的 探讨异丙酚对人食管鳞癌细胞系KYSE150侵袭和迁移的影响及其机制。方法 以0、2.5、5和10 μg/L异丙酚处理KYSE150细胞,24 h后分别采用Transwell小室法和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR检测细胞中miR-218的表达;Western blot检测HMGB1蛋白的表达;生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR-218和HMGB1的靶向关系,观察miR-218对HMGB1蛋白的调控作用。采用脂质体法转染miR-218抑制剂或pcDNA3.1-HMGB1-GFP过表达载体质粒后,观察miR-218和HMGB1蛋白的表达以及下调miR-218或上调HMGB1表达对10 μg/L异丙酚处理的KYSE150细胞侵袭和迁移的影响。结果 异丙酚呈浓度依赖性地抑制KYSE150细胞侵袭、迁移和细胞中HMGB1蛋白的表达,并促进miR-218的表达(P＜0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-218的靶基因,miR-218可负向调控HMGB1蛋白的表达(P＜0.05)。下调miR-218表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P＜0.05);同时上调HMGB1表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P＜0.05)。结论 异丙酚抑制食管鳞癌KYSE150细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与miR-218靶向调控HMGB1有关。

临床研究

检测血液参数在常见小细胞性贫血患者中诊断鉴别的意义

张若曦, 李红敏, 伍洁, 韩冰

2020, 40(1):  105-109. 

摘要 ( 321 )   PDF (326KB) ( 267 )  

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目的 明确不同检测血液参数在常见小细胞性贫血患者鉴别诊断中的意义。方法 获取2017年10月至2018年9月在北京协和医院就诊的铁代谢相关疾病患者的血液标本,进行常规化验检查,同时检测网织红细胞血红蛋白含量(CHr)、铁蛋白(SF)、可溶性转铁蛋白受体(sTfR)、铁调素(hepcidin)等铁代谢相关指标,并比较其在不同疾病中表达的异同。结果 缺铁性贫血(IDA)26例,慢性病性贫血(ACD)12例,地中海贫血(TA)12例,伴环形铁粒幼细胞增多的难治性贫血(RARS)12例。另有17名健康对照(NC)。平均红细胞体积(MCV):IDA和TA明显低于对照(P＜0.01),且TA更低。平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC):ACD、IDA、TA、RARS均显著低于NC(P＜0.01),其中IDA最低。网织红细胞计数:除RARS外,其他3者均显著高于NC(P＜0.01),TA相较于ACD、IDA升高更为明显。CHr:ACD、IDA、TA较NC显著下降(P＜0.01)。SF在IDA患者中较NC显著下降(P＜0.01)且低于其他3种贫血,而ACD、RARS较NC显著升高(P＜0.01)。转铁蛋白饱和度(TS)中:ACD、IDA、TA相对NC降低(P＜0.01),而RARS相对NC显著升高(P＜0.01),且高于其他3种贫血。sTfR和sTfR指数(sTfR/log SF)在IDA患者中相较于NC显著升高(P＜0.01),且相对ACD、TA、RARS更高。ROC曲线分析显示:SF、sTfR指数对鉴别诊断IDA和ACD、TA、RARS具有较高的诊断准确性。结论 综合利用外周血检测的常规指标及铁代谢参数指标可以初步区分不同类型的小细胞贫血并辅助鉴别诊断。

基于Citespace软件的患者安全研究知识图谱分析

高晓星, 陈政, 杨莹莹, 潘慧

2020, 40(1):  110-114. 

摘要 ( 251 )   PDF (3004KB) ( 285 )  

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目的 使用知识图谱的方法总结梳理近10年患者安全相关研究概况,揭示该领域研究热点及方向。方法 利用Web of Science引文数据库检索近10年国际上发表的患者安全相关研究4 000篇,运用文献计量学及可视化软件Citespace对上述文献进行关键词、被引文献等共现分析及突破分析。结果 过去10年间患者安全研究最为活跃的国家/地区分布在美国、英国等发达国家,研究的关键词集中在照护、不良事件、卫生保健、差错和质量等问题上,近几年研究突破出现在态度调查、经验、知识及患者安全文化等方面。结论 2009至2019年国际上特别是西方发达国家在患者安全领域进行了一系列广泛而深入的研究,研究热点向患者安全文化等方面延伸,中国迫切需要积累患者安全的自身经验。

短篇综述

长链非编码RNAs调控骨稳态研究进展

范琳媛, 李红凌

2020, 40(1):  115-119. 

摘要 ( 256 )   PDF (424KB) ( 287 )  

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骨形成和骨吸收是骨稳态维持的两个重要过程,骨稳态失衡可导致多种骨代谢疾病的发生。长链非编码RNAs(lncRNAs)是一类几乎不具有编码功能的RNAs,在调节基因表达、生命发育及疾病发生发展中起重要调控作用。在骨代谢疾病中多种lncRNAs表达异常,lncRNAs 通过调节成软骨分化、成骨分化和骨基质矿化过程,调控骨的形成。并通过影响破骨细胞的分化和成熟,参与骨吸收过程的调节。

医学教育

独立值班考核制度在内科住院医师规范化培训中的应用

黄璨, 赵雪, 李晓青, 侍效春, 李航, 严晓伟, 张奉春

2020, 40(1):  120-123. 

摘要 ( 213 )   PDF (354KB) ( 336 )  

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目的 介绍北京协和医院内科创立的独立值班考核制度,分析该考核制度在住院医师独立值班能力评价和分层中的作用。方法 对北京协和医院内科2017年和2018年内科住院医师独立值班考核的结果进行统计,分析不同来源的住院医师在考试次数、通过考试所需时间和通过率方面的分布。结果 内科临床医学博士后、专业型临床硕士研究生和北京市基地规培住院医师在通过独立值班考核所需次数方面无差异;内科临床博士后通过考核用时最短,专业型临床硕士研究生次之,北京市规培住院医师用时最长(χ²=96.27,P＜0.05),可以进行初步分层;通过临床带教,大部分住院医师都能在实习6个月内通过独立值班考核,承担独立值班工作。结论 在内科住院医师规范化培训中,独立值班考核制度能够客观评价住院医师的值班能力,最大限度的保证临床安全。北京市基地规培住院医师通过考核时间较长,应注意加强临床教学、提高学员能力。

混合式教学法在本科生生物化学教学中的应用

阎敬, 胡博, 姜静宜, 王国丽, 冯晨, 王华芹

2020, 40(1):  124-127. 

摘要 ( 228 )   PDF (635KB) ( 330 )  

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目的 坚持“以本为本”为核心,在生物化学教学中,充分活跃课堂气氛,激发学生的学习兴趣,提高学生的学习自主性,逐渐建立意义建构的思维模式,提高教学效果。方法 采用临床病例导课法、以问题为导向的教学方法(PBL)与以授课为基础的教学方法(LBL)双轨教学法、“雨课堂”及思维导图归纳法等教学方法,并采用终结性评价与形成性评价相结合的考核方式。结果 混合式教学方法使课堂教学形式多样化、丰富化,并且能够提高学生的学习自主性,引导应试教育的灌输式记忆模式向意义建构的自主思维模式转变,将课堂以传授知识为核心转变为注重学习能力的培养。结论 混合式教学法能够提高学生的学习自主性与学习兴趣,构建自己的知识体系,为临床课程的学习打下扎实的基础。

ICU护士与患者家属沟通现状与培训需求的调查分析

李尊柱, 李真, 张媛媛, 刘金榜, 罗红波, 何怀武, 隆云

2020, 40(1):  128-131. 

摘要 ( 202 )   PDF (404KB) ( 324 )  

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目的 调查北京协和医院重症监护病房(ICU)护士与患者家属沟通培训的教学需求。方法 北京协和医院重症医学科对在科室内工作的143名护理人员发放问卷,对护士与患者家属沟通是否有负面经历、建立和谐关系的信心以及相关培训的需求程度进行评分。结果 共获得138份问卷,重症医学科46.4%的护士认为自己在工作中有时或经常遇到负面经历。仅有30.4%的护士对自己的沟通能力感到非常自信或者相当自信,83.3%的护士认为应当开展护士与患者家属沟通的相关培训。结论 沟通培训对重症医学科护士非常重要。

国内外医学人文教学方法比较

郭旭芳, 刘俊香, 刘辉, 何仲

2020, 40(1):  132-135. 

摘要 ( 216 )   PDF (392KB) ( 241 )  

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随着医学教育改革的深入,国际范围内医学人文课程的教学方法在不断创新和变革。积极借鉴国外医学人文教学新方法、新观念对于推进国内医学人文教育有着积极作用。本文对英美两国几所主要高等院校的医学人文课程教学方法与国内几所院校进行了对比,试图探讨在医学人文教育方面可以借鉴和思考的地方。

基于病案的教学查房结合PACS在影像科医师培养中的应用

裴新龙, 郎宁, 张祺, 袁慧书

2020, 40(1):  136-140. 

摘要 ( 227 )   PDF (342KB) ( 270 )  

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目的 探讨在影像科医师培养中,基于病案(CBL)的教学查房结合医学影像存储与通讯系统(PACS)对医师影像诊断能力培养的价值。方法 对2018年在北京大学第三医院放射科轮转CT的41名培训医师,应用PACS对其进行CBL教学查房,对照组为2017年轮转CT的39名培训医师(未进行CBL教学)。从PACS随机抽取每名医师书写的10份报告(报告时间为培训最后1个月),对开展CBL教学前后培训医师的报告书写质量评分并计算优良率。评分标准包括病灶征象描述全面准确、报告内容条理清晰规范、诊断结论逻辑清晰合理、能回答临床提出的问题、提出的下一步诊疗建议合理准确以及无漏诊。同时采用调查问卷的方式评价培训医师对CBL教学查房的主观感受,包括全面系统的认识疾病、提高临床思维能力、读片能力和学习兴趣、PACS对学习的帮助5方面,采用百分比表示。结果 1)进行CBL教学查房后,培训医师报告质量评分提高(P＜0.01)。2)培训医师对调查问卷5方面满意率分别为90.2％、68.3％、80.5％、75.6％和80.5％。结论 应用PACS进行CBL教学查房是培养影像科医师诊断能力的有效方法。

临床医学八年制本科生多阶段心理状况调查及分析

李宁宁, 李航, 侍效春, 姜忆南, 赵峻

2020, 40(1):  141-144. 

摘要 ( 223 )   PDF (343KB) ( 245 )  

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目的 通过调查不同学年八年制医学本科生的心理健康状况,分析其影响因素,以便提出改善学生心理健康的对策,提高学生的心理健康水平。方法 采用问卷方法对我校五至七年级本科医学生进行心理健康现况调查,并按照不同年级分组,分析组间差异。应用卡方检验、Fisher精确检验的统计学方法进行数据分析。结果 问卷回收率96.5%,合格问卷164份。14例学生(8.5%)有抑郁情绪,28例(17%)有焦虑问题。57例(34.76%)需要心理自评问卷的协助,110例(67.07%)需要抑郁及焦虑情绪疏导的帮助。六年级医学生对抑郁/焦虑情绪疏导的需求比例与五年级(82% vs 50%;P＜0.05)、七年级(82% vs 57%;P＜0.05)学生相比显著增高。86.67%的七年级学生曾进行心理问卷自评,高于五年级组(64.29%,P＜0.05),较六年级组无显著差异。结果 不同学习阶段的八年制医学生的心理健康状态存在差异,不同程度存在情绪调试障碍。需要多方面采用有效措施进行心理学支持及干预。