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2016年 第36卷 第1期    刊出日期：2016-01-05

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研究论文

重组豹蛙抗瘤酶促进大鼠肝癌RH-35细胞凋亡

许晓亚 靳伟 杨刚刚 张全义 吕中原 秦艳丽 徐存拴

2016, 36(1):  1-5. 

摘要 ( 822 )   PDF (932KB) ( 526 )  

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目的 研究重组豹蛙抗瘤酶（rONC）对大鼠肝癌RH-35细胞增殖和凋亡的作用。方法 用不同浓度的rONC处理体外培养的RH-35细胞，用SRB法检测细胞增殖；Hoechst染色法测定细胞活性；用流式细胞术检测细胞周期；用qRT-PCR和Western blot法检测相关基因和蛋白的变化。结果 rONC作用于RH-35细胞24h后呈时间和浓度依赖性,显著抑制增殖(P<0.05)，IC50为7.38?mol/L。rONC作用于RH-35细胞后，细胞核出现了显著的凋亡特征。G0/G1期的细胞比例显著上升（P<0.05），增殖能力减弱。rONC作用于RH-35细胞后，BAX mRNA和蛋白水平升高（P<0.05），而PCNA,CCNA2和BCL-2 mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）。结论：rONC可能通过上调BAX表达和下调PCNA,CCNA2和BCL-2表达，促进RH-35细胞凋亡，抑制细胞增殖。

重组慢病毒表达PML核定位信号缺失体抑制急性早幼粒白血病细胞系c-Myc蛋白表达

李浏 宋浩 钟梁 阳小群 蒋开玲 杨蓉 刘北忠

2016, 36(1):  6-11. 

摘要 ( 672 )   PDF (1183KB) ( 452 )  

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目的 构建携带 PML（?NLS）基因的重组慢病毒，研究其对 NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响。方法 以质粒 pCMV-HA-PML(?NLS) 为模板，PCR扩增PML（?NLS）基因，克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro, 与pHelper 1.0和pHelper 2.0 共转染293T细胞，包装病毒。收取病毒上清液，纯化后感染NB4细胞，荧光倒置显微镜观察感染效率， RT-PCR法检测PML（?NLS）mRNA的转录水平，Western blot 检测PML（?NLS）、β-catenin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达的变化。CCK-8实验观察细胞增殖。结果 成功构建PML（?NLS）过表达慢病毒，病毒感染NB4细胞，感染效率达82.74%，LV5-PML（?NLS）携带的PML（?NLS）能够在NB4细胞中稳定表达；感染LV5-PML（?NLS）的NB4细胞中β-catnin、γ-catenin 和c-Myc蛋白表达下降(P<0.05)；NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和空病毒载体组(P<0.05)。 结论 成功构建了重组慢病毒PML（?NLS），PML(?NLS) 过表达可促进NB4细胞体外增殖，并抑制c-Myc蛋白表达。

衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化

景鹏伟 胡文煦 宋小英 张岩岩 贾道勇 王亚平 王璐

2016, 36(1):  12-18. 

摘要 ( 666 )   PDF (1509KB) ( 528 )  

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目的 研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响，为阐释机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法 全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞，分为对照组和衰老组。衰老组：常规培养基内加入30mg/mL D-半乳糖作用48h。CCK-8法测定BMSCs增殖；流式细胞术分析细胞周期；β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察衰老BMSCs百分率；Western blotting检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养，集落计数检测髓系多向性造血祖细胞（CFU-Mix）增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量； DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平；酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 与对照组相比，D-半乳糖诱导BMSCs衰老，细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01)，增殖能力显著下降，SA-β-Gal染色阳性率升高(P<0.01)；衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P<0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs 内ROS、MDA氧化损伤指标上升， SOD抗氧化指标下降(P<0.01)；BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P<0.01)。结论 衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化能力，其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤，分泌活性因子改变有关。

IL-2抑制小鼠CD4+CD62L+T细胞分化为Th17细胞

周骏 王婷 姚瑞芹 曲学彬

2016, 36(1):  19-23. 

摘要 ( 659 )   PDF (885KB) ( 515 )  

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目的 研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。 方法 免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞，培养于抗体包被的培养板中培养3d，实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基，IL-2处理组在对照组基础上于培养体系中添加IL-2。CFSE染色检测细胞增殖，Annexin V-PI法检测细胞凋亡，ELISA检测培养上清中IL-17A的浓度，荧光定量PCR检测Rorγt mRNA的表达,流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比例以及Rorγt的表达。 结果 磁珠分选的小鼠脾脏CD4+CD62L+na?veT细胞纯度高于95%。与对照组相比，IL-2处理组细胞数目明显增多，增殖能力明显增强（P<0.05)，细胞凋亡比例降低（P<0.05)；IL-2处理组培养上清中IL-17A的浓度明显降低（P<0.05），且CD4+IL-17+细胞比例下降，其特异性转录因子Rorγt 的表达水平也显著降低（P<0.05）。结论 IL-2在CD4+CD62L+T分化为Th17的过程中，能够促进T细胞的增殖并且抑制Th17的分化。

前列腺素D2受体调节PGD2诱导的人气道黏液高分泌

陈灵修 冉丹华 黄华萍 韩忠 周向东

2016, 36(1):  24-29. 

摘要 ( 737 )   PDF (966KB) ( 458 )  

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目的 研究前列腺素D2(PGD2) 通过D类前列腺素受体2（DP2）对人气道上皮细胞黏液分泌的效应及其作用机制。方法 用PGD2刺激人气道上皮16HBE细胞，以DP2拮抗剂AZD6430、DP1拮抗剂BWA868C及三磷酸肌醇蛋白激酶（PI3K）抑制剂LY294002为干预因素，将细胞分为对照组、PGD2刺激组、PGD2刺激+AZD6430组、PGD2刺激+BWA868C组、PGD2刺激+LY294002组。ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-4和IL-13的蛋白含量，激光共聚焦技术检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC含量；Western blot检测DP2、DP1、PI3K和磷酸化AKT( p-AKT )表达水平；实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC mRNA表达水平。 结果 PGD2刺激后MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、DP2、PI3K和p-AKT表达显著高于对照组（P<0.05）；AZD6430拮抗组中MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、PI3K及p-AKT表达较PGD2刺激组明显减弱（P<0.05）；LY294002组TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC表达较PGD2组亦显著减弱（P<0.05）。结论 PGD2激活人气道上皮细胞的DP2受体，活化 PI3K/AKT引起黏液高分泌。

CGRP通过NOS/NO通路抑制低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡

段莉肖 雷寒 张羿 万彪 冯清平 黄玮

2016, 36(1):  30-34. 

摘要 ( 607 )   PDF (863KB) ( 454 )  

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目的 研究降钙素基因相关肽（CGRP）是否通过调节一氧化氮（NO）抑制低氧心肌细胞的凋亡。方法 选用H9c2细胞建立低氧损伤模型，CGRP和/或一氧化氮合酶（NOS）抑制剂（L-NAME）预处理细胞，检测低氧后细胞存活率，NOS、NO和凋亡相关蛋白表达水平。结果 低氧使心肌细胞存活率降低（P < 0.05），诱导性一氧化氮合酶（iNOS）表达明显增加（P < 0.001），内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）表达降低（P < 0.001），NO释放减少（P < 0.05），p53、caspase-3和细胞色素C（cytochrome C）表达升高（P < 0.05）；CGRP预处理后，心肌细胞存活率升高（P < 0.001），iNOS表达减少（P < 0.05），eNOS和p-eNOS表达增加（P < 0.05），NO的释放进一步降低（P < 0.05），凋亡相关蛋白活性下降（P < 0.001）；L-NAME处理后，iNOS（P < 0.05）和p53（P < 0.001）表达降低；L-NAME与CGRP共处理，与CGRP单处理比较，细胞存活率下降（P < 0.05），NOS表达降低（P < 0.05），p53、caspase-3和cyto C表达升高（P < 0.05）。结论 NOS/NO可能介导CGRP对低氧心肌细胞抗凋亡的调控作用。

重组慢病毒LV5-NE的构建及NE促进NB4细胞株增殖

杨蓉 钟梁 刘北忠 阳小群 蒋开玲 李浏 宋浩

2016, 36(1):  35-40. 

摘要 ( 599 )   PDF (1143KB) ( 523 )  

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目的 构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株，探讨NE（neutrophil elastase）对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响，为研究NE致白血病的可能机制奠定基础。 方法 以质粒pCMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE，将NE基因连接到穿梭载体pGLV10/U6/GFP/Puro后酶切验证，将序列正确的质粒与包装质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞。测定病毒滴度。实验分为空白组、LV5-NE组和LV5-NE组，病毒感染NB4细胞72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞。用Western blot检测NE在NB4细胞中的蛋白表达以及其切割作用；CCK-8法观察NB4细胞增殖能力；流式细胞术测定NB4细胞周期和凋亡；Western blot检测pAkt和Akt以及Bax和Bcl2蛋白表达。结果 成功构建表达NE的慢病毒LV5-NE，筛选得到纯NB4/LV5-NE细胞株，NE对NB4细胞的增殖有明显促进作用（P<0.05）。 结论 NE在NB4细胞株中稳定表达后中可促进NB4细胞的增殖，其增殖作用可能通过激活PI3K/Akt通路调节。

NLS-RARα通过激活AKT调节白血病NB4细胞的增殖

宋浩 李浏 钟梁 蒋开玲 阳小群 杨蓉 刘北忠

2016, 36(1):  41-46. 

摘要 ( 690 )   PDF (1055KB) ( 536 )  

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目的 构建携带NLS-RARα的重组慢病毒，感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响。方法 以质粒pCMV-HA-NLS-RARα为模板，PCR 扩增NLS-RARα基因，将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中，经DNA测序鉴定重组载体，用4质粒系统共转染293T 细胞，收集病毒上清，浓缩鉴定，测定重组慢病毒的滴度；重组慢病毒感染NB4细胞，经过嘌呤霉素筛选获得稳定转染NLS-RARα的NB4细胞株；CCK-8法检测NLS-RARα对NB4细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期和感染效率；Western blot分别检测NLS-RARα、t-AKT和p-AKT的表达。结果 NLS-RARα克隆入LV5的多克隆位点，慢病毒浓缩后滴度为2×108Tu/mL；感染效率为86.54%；NLS-RARα能够明显促进细胞增殖，S期细胞增多，G1和G2期细胞减少；NLS-RARα基因在NB4细胞中稳定的表达，同时p-AKT明显增高，用PI3K抑制剂LY294002处理后p-AKT明显降低。结论 NLS-RARα通过激活AKT促进白血病NB4细胞的增殖。

红景天苷对小鼠MSCs的增殖及其细胞周期的影响

秦文 李晓云 杨霄鹏 潘茜 赵红斌

2016, 36(1):  47-52. 

摘要 ( 600 )   PDF (1209KB) ( 439 )  

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目的 该研究探讨了不同浓度红景天苷通过ERK信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期变化的影响及机制。方法 实验分为对照组（D-MEM/F-12完全培养液）、不同浓度红景天苷（5~100 μg/mL）诱导组和阻断组（5~100 μg/mL+30 μg/L PD98059），利用CCK8法、流式细胞术及Western blot分别检测ERK信号通路阻断前后细胞抑制率、细胞周期及其相关蛋白的表达。结果 10 μg/mL诱导组和阻断组均能抑制细胞增殖，且5 μg/mL（P<0.01）、25 μg/mL（P<0.05）和100 μg/mL（P<0.05）诱导组对细胞抑制显著高于阻断组。25 μg/mL诱导组和阻断组G0/G1期细胞比例均增加，细胞周期阻滞于G0/G1期。诱导组和阻断组CyclinA和CyclinD1蛋白的表达与对照组比较均下调，p21蛋白的表达上调。阻断组CyclinA蛋白的表达与诱导组比较明显下调（P<0.01）；50和100 μg/mL诱导组与阻断组相比CyclinD1蛋白表达显著下调，p21蛋白的表达显著上调（P<0.01）。结论 红景天苷能通过调节细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠MSCs细胞的增殖和细胞周期的改变。

水通道蛋白1、5在大鼠急性肺损伤组织中的表达

陈国兵 连珠兰 占珠琴 吴谨准 白海涛

2016, 36(1):  53-57. 

摘要 ( 655 )   PDF (1175KB) ( 477 )  

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目的 探讨水通道蛋白1、5（AQP1、AQP5）在脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI）组织中的表达变化及意义。方法 将Wistar大鼠48只随机分为对照组（NC）和急性肺损伤（ALI）组，ALI组通过尾静脉注射脂多糖（LPS），分别于2、6、12和24h采集标本。HE染色观察肺组织病理；测定肺湿/干重比（W/D）、肺通透指数；ELISA检测血清肿瘤坏死因子α（ TNF-α） 、巨噬细胞炎性蛋白1α（MIP-1α）水平；Western blot、免疫组化和Real- Time PCR法检测肺AQP1、AQP5蛋白和mRNA变化。结果 与对照组比较，ALI组TNF-α、MIP-1α均有显著性升高（P<0.05），至24h点逐渐恢复。注射LPS后2h出现肺泡和间质水肿，炎性细胞浸润，以12h最明显；肺W/D比、肺泡灌洗（BALF）蛋白含量、肺通透指数均较对照组明显升高（P<0.05），12h点达峰值。ALI组各时间点肺AQP1及AQP5 mRNA及蛋白表达均较对照组明显下调（P<0.01），以12h点下降最明显。肺AQP1、AQP5 mRNA表达与肺W/D比、血清TNF-α，MIP-1α存在明显负相关。结论 脂多糖诱导大鼠急性肺损伤，其肺水肿的形成可能与AQP1、AQP5的表达下调有关。

葡萄籽原花青素减轻SHR肾脏功能和结构的损伤

王晓玲 陈艳玲 黄霜枝 唐剑涛 靳俊峰 吴秀香

2016, 36(1):  58-61. 

摘要 ( 803 )   PDF (1006KB) ( 595 )  

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目的 观察葡萄籽原花青素（GSP）对自发性高血压大鼠（SHR）肾脏功能和结构的影响及其可能机制。方法 8 周龄雄性SHR 24只随机分成4 组，每组6只：SHR组、GSP低剂量（50 mg/kg）和高剂量治疗组（200 mg/kg）、卡托普利阳性对照治疗组（30 mg/kg）。6 只同龄雄性Wistar-Kyoto大鼠设为对照组。治疗6 周后，测定尾动脉收缩压（SBP）；生化法检测血清尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）含量、肾皮质中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性；ELISA法检测血清胱抑素C（Cys C）含量；HE染色观察肾脏组织结构；Western blot法检测肾皮质中ERK1/2蛋白表达。结果 GSP能显著降低SHR SBP（P<0.01），改善肾功能参数、减少肾皮质中MDA含量及ERK1/2蛋白的表达（P<0.05），提高SOD和CAT活性（P<0.05），减轻肾脏结构损伤。GSP高剂量治疗组的作用尤为显著（P<0.01）。结论 GSP对SHR肾脏功能和结构损伤有缓解作用，可能与降低SBP、抑制氧化应激和下调ERK1/2蛋白表达有关。

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

王华侨 李天明 罗宏武

2016, 36(1):  62-67. 

摘要 ( 639 )   PDF (1462KB) ( 433 )  

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目的 探讨人羊膜上皮细胞（hAECs）上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组，其中对照组不加hAECs上清液，其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的hAECs上清液作用24h后，通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡；Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 hAECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡（P <0.05）；25%和50% hAECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组（P <0.05）。结论 hAECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。

HBSP减轻急性缺氧复氧大鼠心肌细胞损伤

林湧栾 刘映峰 缪绯 廖晨军 吴晓妍 张杰波 刘芃

2016, 36(1):  68-72. 

摘要 ( 579 )   PDF (1268KB) ( 453 )  

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目的：研究促红细胞生成素衍生肽（Helix B surface peptide，HBSP）对急性缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养H9C2乳鼠心肌细胞株,建立缺氧(3h)/复氧(3h)模型。实验分为对照组、缺氧/复氧组(A/R)、A/R +HBSP组。测定培养细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量；用Annexin-V与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率；分离细胞质与线粒体，用Western blot法检测线粒体内和胞浆中的细胞色素C蛋白的表达,用caspase试剂盒检测心肌细胞caspase-9及caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较, A/R组细胞存活率和线粒体内细胞色素C蛋白水平明显下降（P <0.01），而凋亡率、caspase-9、caspase-3活性及胞质内细胞色素C蛋白水平均显著升高（P <0.01）。结论:HBSP对缺氧复氧乳鼠心肌细胞具有明显的保护作用，其机制可能与抑制线粒体途径介导的细胞凋亡有关。

下调长链非编码RNA PVT1表达对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡及侵袭转移的影响

张行行 赵义 王珏 倪鑫 刘鑫 葛璐 徐岷

2016, 36(1):  73-79. 

摘要 ( 585 )   PDF (1803KB) ( 604 )  

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目的：研究下调长链非编码RNA PVT1的表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。方法：体外转染PVT1干扰序列siPVT1-1和siPVT1-2降低胰腺癌细胞株BxPC-3 PVT1表达，同时转染阴性对照siPVT1-NC作为对照组。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移；qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin和PVT1 mRNA表达；Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase 3）和上皮间质转化相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin）表达。结果：下调胰腺癌细胞BxPC-3 PVT1表达能明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和减少细胞侵袭转移数目（P<0.05）；E-cadherin蛋白和分子水平升高，N-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白和分子水平降低（P<0.05）；Bax和Caspase 3蛋白水平升高，而Bcl-2蛋白水平降低（P<0.05）。结论：下调长链非编码RNA PVT1表达能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移能力，促进胰腺癌细胞凋亡，且能够逆转胰腺癌细胞上皮间质转化。

维生素E在体内外具有的抗氧化作用

仓宝成 宫璀璀 王莉 何佩 赖泽仁

2016, 36(1):  80-84. 

摘要 ( 852 )   PDF (669KB) ( 842 )  

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目的 探讨维生素E在体内外的应激损伤。方法 体外实验：人肝RBL细胞系根据H2O2损伤及损伤前后给予维生素E分为4组，对照组(C)、H2O2损伤组(Ec)、H2O2损伤前(Eb)及后（Ea）给维生素E组；体内实验：将20只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组和大及小剂量维生素E组，每天进行一次35和15mg/kg溶液2mL灌胃，连续三天。体外实验应用MTT和TUNEL法检测细胞存活率和凋亡率，免疫印迹和免疫组化方法检测细胞中NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平；体内实验应用生化法检测3和6d后血浆内T-AOC、SOD、GSH和MDA的水平。结果 H2O2损伤组(Ec)细胞凋亡率增加(P<0.01)，细胞内Bax、HSP-70、NF-κB及caspase-3显著升高(P<0.01)，而Bcl-2显著下降(P<0.01)，维生素E干预后能显著缓解上述变化(P<0.01)，H2O2损伤前干预效果优于后干预。灌胃后3d血浆中T-AOC、SOD、GSH的水平增高，MDA降低(P<0.01)，6d后其相关指标变化更加显著(P<0.05)。结论 维生素E可通过调节人肝RBL细胞相关蛋白表达水平和Wistar大鼠血浆中抗氧化酶体系而发挥抗氧化作用。

病毒感染后RNF167的表达下调抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β

王知明 田雨

2016, 36(1):  85-88. 

摘要 ( 574 )   PDF (742KB) ( 603 )  

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目的 探讨RNF167对病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β的调控作用。方法 RNA病毒VSV和DNA病毒HSV-1感染小鼠腹腔巨噬细胞后，Western blot检测RNF167的表达水平。利用RNA干扰减少小鼠原代腹腔巨噬细胞中RNF167的表达后，病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞，实时荧光定量PCR法检测IFN-β的mRNA水平，ELIAS法检测细胞上清中IFN-β的浓度。Western blot 法检测IFN-β的转录因子IRF3的磷酸化（p-IRF3）水平。结果 VSV感染巨噬细胞4和8 h后，RNF167表达水平显著下降 (P < 0.01)，而HSV-1感染后RNF167的表达没有显著变化。si-RNF167降低小鼠腹腔巨噬细胞RNF167表达水平后，与对照细胞相比，感染RNA病毒后细胞中IFN-β的mRNA水平及上清中IFN-β水平显著下降（P < 0.01），p-IRF3水平也显著下降。而感染HSV-1病毒后上述指标均无差异。结论 RNF167能够特异性地调控RNA病毒感染的巨噬细胞中IFN-β的表达。

SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导软骨细胞内质网应激

谢静 杜敏 史栋梁

2016, 36(1):  89-93. 

摘要 ( 737 )   PDF (1224KB) ( 403 )  

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目的 探究SIRT1对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激的影响。 方法 分离人正常软骨细胞和骨关节炎（OA）软骨细胞，观察细胞形态，免疫细胞化学染色检测II型胶原表达，Western blot检测SIRT1表达。将培养的软骨细胞分为对照组（OA软骨细胞、正常软骨细胞）、正常软骨细胞组（衣霉素组、SIRT1过表达组和衣霉素+SIRT1过表达组）。24 h后，Western blot检测ERS相关蛋白（CHOP、p-eIF2α和ATF4等）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和Caspase-3等）以及p-p38的表达。ELISA检测NF-κB活性。 结果 与人正常软骨细胞相比，OA软骨细胞增殖缓慢，II型胶原和SIRT1表达均显著降低（P<0.05）。与正常软骨细胞对照组相比，OA对照组和0.5 mg/L衣霉素组CHOP、p-eIF2α、ATF4 和p-p38表达上调，NF-κB活性增加，Bcl-2表达明显下调，Bax和Caspase-3表达明显增加（P<0.05）。SIRT1过表达处理则显著逆转上述蛋白表达。 结论 SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激和细胞凋亡，并下调p38/NF-κB活化。

长链非编码RNA HOTAIR在宫颈癌患者组织及HeLa细胞中的表达和影响

郑婷华 王茜 杨小杰 韩炜 周钰昆 郑韦

2016, 36(1):  94-98. 

摘要 ( 574 )   PDF (827KB) ( 451 )  

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目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在宫颈癌患者组织中的表达及对宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 66例宫颈癌手术切除标本（包括癌组织和癌旁组织），实时荧光定量PCR检测HOTAIR的表达，分析其与临床病理特征的关系；用慢病毒介导shRNA干扰人宫颈癌细胞HeLa HOTAIR表达后，分别用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡。结果 HOTAIR在宫颈癌组织中的相对表达量为8.25±0.46，高于癌旁组织的3.60±0.26（P<0.001）；HOTAIR的表达水平与临床病理分期(P<0.05)、肿瘤大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)密切相关；HOTAIR的表达被干扰后，HeLa细胞增殖明显减慢，48、72和96h的抑制率分别为20%、24.6%和33.1%；细胞周期被阻滞于G0/G1期；HOTAIR干扰组细胞凋亡比例为12.37%±2.74，高于对照组的5.94%±1.27（P<0.01）。结论 HOTAIR在宫颈癌组织中显著高表达，可以作为宫颈癌预测、判断预后的分子标志物和潜在的治疗靶点。

ANKRD49在非小细胞肺癌的表达与意义

庞敏 郭民 袁丽蓉 郭睿 王海龙

2016, 36(1):  99-103. 

摘要 ( 786 )   PDF (983KB) ( 456 )  

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目的 探讨ANKRD49蛋白质在非小细胞肺癌中的表达及其与多种临床参数的关系。方法 收集75例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织，制成组织芯片后用免疫组织化学法检测ANKRD49在癌组织及癌旁组织中的表达，同时分析ANKRD49的表达与肺癌不同临床参数之间的关系。用免疫印迹技术分析ANKRD49蛋白质在人气道上皮细胞及多种不同肺癌细胞系中的表达。结果 ANKRD49在肺癌组织中的表达率为82.67%，显著高于癌旁组织的49.33% （P ＜ 0. 05）；ANKRD49在低分化肺癌组织中的表达为80%，高于高分化肺癌组织的42.6%（P ＜ 0. 05）；ANKRD49仅在肺腺癌细胞系A549和NCI-H1650中表达，而在人正常气道上皮细胞及其他肺癌细胞系中无表达。结论 ANKRD49可能参与非小细胞肺癌的发生发展过程。

DMRT1单倍体不足导致性发育异常

茅江峰 王曦 聂敏 伍学焱

2016, 36(1):  104-106. 

摘要 ( 854 )   PDF (416KB) ( 456 )  

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目的 增加对DMRT1基因单倍体不足导致性发育异常的认识，提高性发育异常疾病的诊断水平。 方法 描述1例染色体为46XY性发育异常患者的临床特点；对患者及其父母的静脉血进行淋巴细胞培养和染色体核型分析；抽取患者外周血，提取基因组DNA，进行微阵列比较基因组杂交技术（aCGH）扫描。结果 1）患者表现为女性外阴，超声未见子宫和卵巢组织；伴随发育延迟和运动迟缓；临床表现符合“9p缺失综合征”； 2）染色体结果：患者母亲46XX，t(7;9)(q35, p24)；父亲46XY； 患儿46XY,der(9)t(7;9)(q35,p24)； 3）aCGH扫描结果：患儿第7号染色体长臂部分位置（144741153-159098761）重复，长约14.37Mb；第9号染色体短臂部分（10001-9733061）缺失，长约9.72Mb，缺失部分包含EZH2、MNX1、 DMRT1、 DMRT2、 SHH、SMARCA2、GLDC、VLDLR、DOCK8和GLIS3基因；结论 DMRT1在性腺发育过程中发挥重要作用。母亲染色体发生平衡易位，因无遗传物质丢失，故不导致疾病发生。在产生配体过程中，因DMRT1单倍体剂量不足，导致子代睾丸发育障碍。

研究短文

青藤碱下调兔膝骨关节炎滑膜脂肪因子受体的表达

郑洁 王瑞辉 寇久社 杨威

2016, 36(1):  107-108. 

摘要 ( 503 )   PDF (433KB) ( 413 )  

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大蒜素抑制人多发性骨髓瘤H929细胞增殖

曾俊权 彭红颜

2016, 36(1):  109-111. 

摘要 ( 595 )   PDF (1092KB) ( 559 )  

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短篇综述

AXL在肿瘤转移和耐药中的作用及干预策略研究进展

刘会可 许海燕

2016, 36(1):  112-115. 

摘要 ( 826 )   PDF (513KB) ( 622 )  

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AXL是酪氨酸激酶受体之一，在恶性肿瘤细胞中高表达，并通过多种信号转导途径，尤其是与EMT形成正向反馈循环，促进肿瘤转移和耐药，成为肿瘤治疗的一个新靶点。通过抑制AXL的表达可有效逆转EMT和肿瘤转移与耐药。

TFEB调控脂质代谢稳定动脉粥样硬化斑块的新机制

仲昭宇 田野 杨力明 李弘

2016, 36(1):  116-120. 

摘要 ( 717 )   PDF (593KB) ( 667 )  

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TFEB作为一种新型转录因子，可由mTOR、细胞应激等自噬调节因子激活，介导自噬、溶酶体相关基因以及过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR α)、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的表达，促进脂质外排、抑制炎性因子释放。TFEB调节脂质代谢可作为一种新机制，起到抑制动脉粥样硬化进展、稳定斑块的作用。

库欣综合征所致高凝状态的研究进展

吴遐 高路 幸兵

2016, 36(1):  121-124. 

摘要 ( 566 )   PDF (508KB) ( 463 )  

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库欣综合征是高皮质醇血症所致的临床症候群，该病患者常合并高凝状态，其动静脉血栓事件、心血管病发生率乃至死亡率均高于普通人群。本文将介绍库欣综合征高凝状态的病理生理机制，并对临床上预防性使用抗凝药物提供指导。

免疫衰老与固有免疫细胞的相关研究进展

王敏

2016, 36(1):  125-129. 

摘要 ( 681 )   PDF (625KB) ( 1731 )  

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免疫衰老是人类衰老进程中的一项重要生物学变化，主要特征是免疫功能下降导致的进行性免疫缺陷，对固有免疫和适应性免疫均有影响。其对人类固有免疫的影响机制尚不完全清晰。在衰老进程中，固有免疫细胞的功能、表面分子、细胞因子分泌及其信号转导等方面有改变。

医学教育

临床课程前科研培训对医学本科临床诊断学学习的影响分析

焦洋 黄晓明 潘慧

2016, 36(1):  130-133. 

摘要 ( 555 )   PDF (616KB) ( 368 )  

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目的：比较和分析进行临床课程教学前进行科研培训对医学本科临床诊断学学习的影响。方法：选取同时在北京协和医学院接受临床诊断学学习的清华大学医学院（训练组）和北京协和医学院（未训练组）的八年制本科医学生。其中训练组医学生在进入诊断学学习前进行了为期2年的科研培训，而未训练组未接受科研培训，在医学预科教学后直接进入诊断学学习。两组共同学习结束后，分别评估和比较两组学生诊断学期末知识考试、检验诊断考试、经客观性结构化临床技能考试（OSCE）的标准化病人问诊考试及全身查体考试成绩。结果：训练组医学生共16例，平均年龄（23.5±0.5）岁。未训练组共70例，平均年龄（22.4±0.7）岁。训练组诊断学期末知识考试成绩显著高于未训练组（p<0.05），而检验诊断考试、问诊考试和查体考试成绩均无显著差异。结论： 临床课程前进行科研培训可能有助于诊断学知识的掌握。

北京协和医院临床住院医师对超声检查认识情况的调查分析

武玺宁 王娟娟 刘安雷 桂婷 张路 蔺晨 徐胜勇 戴毅 李建初 潘慧 张一休

2016, 36(1):  134-137. 

摘要 ( 884 )   PDF (520KB) ( 527 )  

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目的 调查临床科室住院医师对超声检查的了解及认识情况，为今后的超声工作及教学培训提供依据。方法 2014年12月对北京协和医院4个临床学系105名住院医师发放调查问卷，调查其对超声检查的理解程度、与超声医师沟通情况及超声检查在临床中作用的认识等。结果 共获得100份有效问卷。81%的临床住院医师对于超声检查指征略微或中等了解，而对检查结果为中等或相等接受程度者占91%；70%对床旁超声的检查指征略微或中等了解；住院医师与超声医师的沟通较少，90%认为超声检查在临床工作中是相当及非常重要的，而对于完整地为患者解释超声报告自信心中等者占59%。结论 了解临床需求并进行针对性培训有助于超声在临床工作中发挥作用。

临床医学专业“七转八”入学考试增加客观结构化临床考试实践探索

涂文记 杨萍 高小惠 潘慧 管远志 赵峻 徐薇薇 李琦

2016, 36(1):  138-140. 

摘要 ( 752 )   PDF (462KB) ( 586 )  

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目的 招收优秀的临床医学七年制医学生进入北京协和医学院临床医学八年制“七转八”项目学习。方法 在临床医学专业“七转八”项目入学考试中增加5个考站的客观结构化临床考试（OSCE）。结果 对考试成绩进行分析显示，OSCE的总成绩、笔试总分和沟通交流等项目近乎于正态分布，测试能力较好；SP问诊、查体和英语笔试没能区分出差异。考生的笔试成绩与各考站的相关系数在0.048～0.334之间。结论 2014年 “七转八”入学OSCE项目的设计是成功的，有必要在“七转八”入学考试增加OSCE。

医学院校研究生学位管理系统的开发和应用

常星 纪富存 潘慧 李莉 周欣

2016, 36(1):  141-144. 

摘要 ( 686 )   PDF (627KB) ( 411 )  

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开发和应用研究生学位管理系统作为研究生管理系统中的一个子模块，有利于优化工作流程，实现科学管理，提高办公效率。本文简要介绍了该系统的设计原则、管理权限设置及主要功能模块，并总结了该系统的特点和应用的意义。