基础医学与临床 ›› 2009, Vol. 29 ›› Issue (2): 188-192.
蔡文杰 王铭洁 张宇玲 琚立华 朱依纯
Wen-jie CAI Ming-jie WANG Yu-ling ZHANG Li-hua JU Yi-chun ZHU
摘要: 目的 构建显性负突变存活素质粒。方法 从大鼠心脏微血管内皮细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,利用巢式PCR扩增存活素基因全序列,并引入酶切位点,利用重叠PCR对存活素基因进行定点突变,然后与带绿色荧光的真核表达载体pEGFP-N3进行重组,经测序鉴定后转染细胞,观察对细胞凋亡的影响。结果 用巢式PCR扩增出含存活素基因的496 bp产物,和引入酶切位点后的452 bp产物。通过重叠PCR 3次PCR反应,得到452 bp大小的定点突变产物。重组载体经测序鉴定表明插入片段无误,转染细胞后能发出明亮的绿色荧光, Hochest染色显示细胞凋亡比空质粒对照组显著。结论 成功构建了显性负突变存活素质粒。
中图分类号: