摘要: 目的 基于丙肝病毒(HCV)基因组保守区5’UTR的序列,设计一段相应的外部引导序列(EGS),鉴定其体外靶向切割活性及胞内抗病毒作用。方法 用计算机软件对HCV 基因保守区的5’非翻译区(5’UTR)序列与结构进行分析,选择针对HCV第67位胞嘧啶C与第68位鸟嘌呤G之间的位点,作为设计的靶位,设计相应的EGS(EGS-C67), 将该EGS导入HCV感染的Huh7.5.1细胞,通过Northern blot及Western blot试验检测HCV基因的表达,通过荧光定量PCR检测EGS-C67的抗病毒活性。结果 体外切割试验表明EGS-C67对HCV RNA片段具有明显的靶向引导活性。在宿主细胞内EGS-C67可显著抑制HCV基因的表达,可使Huh7.5.1细胞培养上清中HCV的滴度降低约150倍(p<0.01)。结论 EGS-C67作为一种新型抗HCV核酸分子,其成功构建为抑制HCV增殖提供了一种新的抗病毒策略。
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