小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性

基础医学与临床 ›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (9): 1009-1014.

小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性

何昀,刘东尧,温晟,李明勇,王强,华燚,魏光辉

重庆医科大学附属儿童医院

收稿日期:2011-10-20 修回日期:2011-12-28 出版日期:2012-09-05 发布日期:2012-08-28
通讯作者: 魏光辉 E-mail:ghwei@cqmu.edu.cn
基金资助:
骨髓间充质干细胞瘤化中STAT3信号通路过度激活的作用机制与规避研究

siRNA Represses MDR1 Gene Expression and Reverses Drug Resistance of VCR in L2RYC cell line

Received:2011-10-20 Revised:2011-12-28 Online:2012-09-05 Published:2012-08-28

摘要/Abstract

摘要： 目的研究携带多药耐药基因（MDR1）小干扰RNA（siMDR1）的真核表达质粒对L2RYC卵黄囊瘤细胞株中MDR1基因及蛋白表达的抑制效果，并观察siMDR1作用前后细胞对长春新碱（VCR）耐药性的变化。方法设计4对特异性针对大鼠MDR1的siRNA序列，分别与pSES-HUS质粒重组获得pSES-siMDR1真核表达质粒，通过脂质体转染到L2RYC细胞中，用实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后MDR1 的mRNA及蛋白表达。转染后的细胞中再加入不同浓度的VCR，用MTT法检测吸光度，并计算出各组半数抑制浓度（IC50）值。结果 4对siMDR1分别转染均能不同程度地抑制L2RYC细胞MDR1基因表达，pool组MDR1的相对表达量最低为0.396±0.080，MDR1蛋白表达也能被有效抑制，经不同siMDR1转染的细胞加入VCR后细胞增殖被抑制，IC50降低，pool组最显著为1.632±0.423 mg/L，与其余各组比较有明显差异（P<0.05）。结论 pSES-siMDR1真核表达质粒能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达，MDR1表达被抑制后L2RYC细胞对VCR的敏感性增加。

关键词: RNA干扰, 多药耐药基因, 卵黄囊瘤, 化疗, 长春新碱

Abstract: Objective To construct eukaryotic expression plasmids containing siMDR1, which can inhibit the expression of MDR1 in yolk sac carcinoma cells, and to study on the changes of vincristine resistance with MDR1 inhibition. Methods Four pairs of synthetical siMDR1 were reconstructed into pSES-HUS vector to obtain 4 pSES-siMDR1s, which were transfected into L2RYC, a rat yolk sac tumor cell line, by using Lipofectamine 2000, respectively. Then, the expression of MDR1 gene and protein were detected by real-time PCR and Western blot. MTT assay was performed to check the drug resistance of pSES-siMDR1 transfeced L2RYC cultured in the medium containing different concentration of Vincristine. Result The expression of MDR1 gene and protein in L2RYC were inhibited by four pairs of siMDR1s respectively, especially by pool siMDR1s. IC50 of vincristine in L2RYC was decreased with the inhibition of MDR1 expression and the most significant changes were observed in siMDR1s pool group. Conclusion Successfully constructed siRNAs which can inhibit the expression of MDR1. The sensitivity to vincristine was increased in L2RYC when MDR1 was repressed by siMDR1s.

Key words: RNAi, MDR1, Yolk sac tumor, chemotherapy, vincristine

何昀刘东尧温晟李明勇王强华燚魏光辉. 小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性[J]. 基础医学与临床, 2012, 32(9): 1009-1014.

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