SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定

基础医学与临床 ›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (3): 278-282.

SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定

卡米拉.阿不里米提¹,仉红刚²,马可³,王琴³,张秋菊²,修瑞娟²

1. 北京协和医学院/中国医学科学院微循环研究所
2. 中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所
3. 北京协和医学院中国医学科学院微循环研究所

收稿日期:2011-12-06 修回日期:2011-12-23 出版日期:2012-03-05 发布日期:2012-02-27
通讯作者: 仉红刚 E-mail:zhanghg1966126@yahoo.com.cn
基金资助:
科技部社会公益专项

Further separating and identifying of differentially expressed proteins analyzed by SELDI

Received:2011-12-06 Revised:2011-12-23 Online:2012-03-05 Published:2012-02-27
Contact: ZHANG Hong-gang E-mail:zhanghg1966126@yahoo.com.cn

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨以SELDI蛋白质芯片筛选后的细胞差异表达蛋白的分离和鉴定方法及其意义。方法以经体外培养及10μmol/L褪黑素药物干预的内皮祖细胞差异表达蛋白质为研究对象，分别采用Tricine-SDS-PAGE和双向凝胶电泳方法进行差异蛋白分离及结果比较，以FT-MS二级质谱鉴定。结果经Tricine-SDS-PAGE分离后，选取分子量为53ku左右的趋势性差异表达蛋白进行FT-MS分析，质谱鉴定为微管蛋白-α3（吻合度评分为87）。经双向凝胶电泳分离后，于凝胶近酸性端、分子量在72～95ku之间区域，选取蛋白表达量较高的一点，质谱鉴定其为人热休克蛋白90-α（吻合度评分为91）。结论Tricine-SDS-PAGE对于大致35～62ku范围的蛋白分离较清晰、重复性好且样品用量少，2-DE对最低上样量有较严格要求，但它能提供分子量、等电点双重参数来更准确定位所感兴趣蛋白点，且对大分子量蛋白的分离效果更佳，经质谱鉴定结果理想。

关键词: SELDI, Tricine-SDS-PAGE, 双向凝胶电泳, 质谱

Abstract: Objectives To further separate and identify the differentially expressed proteins analyzed by SELDI, and discuss the methodology significance. Methods Endothelial progenitor cells cultured in the medium adding with melatonin in concentration of 10μmol/L were used to extract proteins and analyze by SELDI for preliminary screening differentially expressed proteins. Tricine-SDS-PAGE and 2-DE was chosen to separate the target proteins, respectively, and FT-MS was used to identify the proteins. Results α-tubulin and human heat shock protein 90-α were detected by FT-MS after separated by Tricine-SDS-PAGE and 2-DE, respectively. Conclusion Tricine-SDS-PAGE is preferred for separating proteins in the mass range 35～62 ku, while 2-DE is better for separating bigger proteins.

Key words: SELDI, Tricine-SDS-PAGE, 2-DE, FT-MS

中图分类号:

Q819

卡米拉.阿不里米提仉红刚马可王琴张秋菊修瑞娟. SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定[J]. 基础医学与临床, 2012, 32(3): 278-282.

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