摘要: 目的 构建RNAi表达载体,并检验其对基因的抑制效果,从而在细胞中研究SURVIVIN基因的功能。方法(1)PCR扩增小鼠肝组织中的MU6启动子,并将其连接到TA载体中,构建带有MU6启动子的RNAi载体ps,并构建重组质粒psSURVIVIN和对照载体psN。(2)将psSURVIVIN及psN分别转染入HeLa细胞中,经过稳定筛选细胞,流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响因素,Western-blot和细胞免疫荧光检测两组细胞SURVIVIN蛋白质表达情况。(3)Caspase-Glo(tm) 3/7 Assay Reagent检测两组HeLa细胞caspase 3/7的活性。结果:(1)细胞凋亡率psSURVIVIN组明显高于psN组与对照组;细胞阻滞在G0/G1期,(P<0.01)。(2)在HeLa细胞中,转染带有MU6启动子的抑制SURVIVIN基因表达的RNAi载体质粒(psSURVIVIN),SURVIVIN基因表达明显降低,(P<0.01)。其抑制率在70%以上。(3)psSURVIVIN组caspase 3/7的活性明显增强,(P<0.05)。结论: 构建的RNAi载体psSURVIVIN能有效的抑制SURVIVIN基因的表达,caspase 3/7的活性明显增强。