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    2014年 第34卷 第5期    刊出日期:2014-05-05
    研究论文
    将人的皮肤成纤维细胞直接诱导为神经干细胞
    贾伟丽 李默 吴剑宇 王淑艳 陈志国 张愚
    2014, 34(5):  579-582. 
    摘要 ( 815 )   PDF (835KB) ( 695 )  
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    目的 探讨将人的皮肤成纤维细胞诱导为神经干细胞。方法 将成人的皮肤成纤维细胞用带有Pax6报告基因和绿色荧光蛋白的慢病毒感染,并经历其病毒载体的抗性基因潮霉素筛选后的细胞作为初始细胞,转入在维持神经干细胞生长发育、分化、保持功能稳定性和可塑性中起非常重要作用的10个基因Sox2、Klf4、c-Myc、Tcf3、Ascl1、Brn2、Neurog2、Foxg1、Hes1和Id1,对经过重新编程表达GFP绿色荧光蛋白的细胞用流式细胞仪进行筛选,并对其进行免疫荧光染色和分化的鉴定。结果 转入基因后成功诱导为神经干细胞(iNSCs)。iNSCs能表达神经干细胞的标志性基因(Nestin),能分化为神经元(β Ⅲ- tubulin)和星形胶质细胞(GFAP)。结论 通过转入外源因子的方式可以将人的皮肤成纤维细胞诱导为神经干细胞。
    单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建人耳廓软骨
    康宁 刘霞 曹谊林 肖苒
    2014, 34(5):  583-588. 
    摘要 ( 707 )   PDF (2445KB) ( 462 )  
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    目的 探讨单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建正常人大小耳廓形态组织工程软骨的可行性。方法 分离40例小耳畸形患者残耳软骨细胞统计细胞提取率;MTT法检测细胞增殖能力、计算扩增效率;免疫荧光和PCR检测不同代数细胞的软骨表型。分别应用3例患者各自的残耳软骨细胞培养至P3~P4代,藻酸盐凝胶包埋接种于正常人大小耳廓形态的聚羟基乙酸/聚乳酸支架,体外成软骨诱导动态培养10周后行组织学染色观察。结果 残耳软骨细胞提取率为(3.90±1.27)×106/g;在增殖培养基中细胞增殖能力明显提高,至P4代扩增(328.4±50.4)倍(p<0.05);P3代细胞II型胶原、蛋白聚糖表达显著减弱,至P4代消失,I型胶原表达增强;体外培养10周,实验组形成了耳廓形态的类软骨组织,可见典型软骨陷窝,番红O、甲苯胺蓝及II型胶原染色阳性;对照组明显变形,未形成软骨结构。结论 单例先天性小耳残耳软骨细胞经体外扩增和动态诱导培养可在体外构建正常人大小耳廓软骨。
    黏着斑激酶在机械压力诱导的人气道上皮细胞黏液分泌中的作用
    李娜 李琪 Juliy M. Perelman Victor P. Kolosov 周向东
    2014, 34(5):  589-594. 
    摘要 ( 857 )   PDF (694KB) ( 604 )  
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    目的 探讨黏着斑激酶(FAK)在机械压力诱导的人气道黏蛋白(MUC)5AC分泌中的作用。方法 气液相界面培养人支气管上皮NHBE细胞,用Transwell压力实验装置间断性施压于NHBE细胞,黏着斑激酶(FAK)siRNA转染NHBE细胞,Western blot法检测FAK和p-ERK1/2蛋白含量,实时荧光定量PCR检测MUC5AC mRNA表达,ELISA法检测MUC5AC蛋白相对含量。结果 与空白对照组相比,机械压力能显著升高MUC5AC mRNA及蛋白含量及p-ERK1/2蛋白相对表达水平(均P <0.01)。FAK siRNA可显著降低机械压力所诱导的MUC5AC mRNA及蛋白含量的升高及p-ERK1/2蛋白表达(P <0.01),但与转染FAK siRNA对照组相比,机械压力+转染FAK siRNA组细胞表达MUC5AC mRNA及蛋白水平和p-ERK1/2蛋白相对水平仍然是增加的(P <0.05),PD98059能显著抑制机械压力所诱导的MUC5AC mRNA及蛋白表达水平的升高(P <0.01)。FAK siRNA联合AG1478作用于NHBE细胞则可显著抑制机械压力诱导的MUC5AC mRNA和蛋白表达(P <0.01)。AG1478单独作用能有效降低由机械压力所诱导的上述指标的升高(P <0.05),但与AG1478对照组相比差异仍具有显著性。结论 机械压力诱导的MUC5AC高表达的信号传导通路为ERK依赖的,FAK为ERK的上游信号分子。
    Orai2参与了HUVEC外钙敏感受体介导的Ca2+内流和NO生成
    王腊梅 钟华 赵慧 王静 庞丽娟 孙志萍 何芳
    2014, 34(5):  595-601. 
    摘要 ( 146 )   PDF (1620KB) ( 558 )  
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    目的 研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用。方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染入HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测Orai2 mRNA 和蛋白的表达。2)取2~5代HUVEC,分别以精胺激活CaR(钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活)、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(激活ROC及阻断SOC) 、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC及激活SOC)为细胞模型。实验分为3组:特异性质粒转染组(Orai2shRNA组),未转染组(空白对照组),空质粒组(vehicle组),用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO的生成。结果 1)与control组相比,shOrai2-71干扰后,Orai2 mRNA和蛋白的表达均明显降低,抑制率分别为75.75%和70.58%(P<0.05)。2)与对照组和空质粒组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai2shRNA转染组[Ca2+]i △ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05)。 结论:Orai2参与了HUVEC中CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成。
    慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖
    史晨辉 王维山 李长俊 张振东 郭风劲 陈安民
    2014, 34(5):  602-609. 
    摘要 ( 126 )   PDF (3753KB) ( 537 )  
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    目的 构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响。方法 根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA shRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列。各序列经慢病毒包装后,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞后,用RT-PCR和Western blot法分别检测uPA-siRNA对细胞内uPA mRNA和蛋白表达水平的抑制效果,用CCK-8法检测uPA-siRNA对软骨细胞增殖的影响。结果 成功构建4对uPA-shRNA序列并筛选出用于后续实验的高效靶向P2序列,各序列经慢病毒载体包装并成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数(MOI)为100时感染率达到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制软骨细胞中uPA基因及蛋白的表达,但P2沉默效果最好,基因抑制率达到70%,感染后软骨细胞的增殖受到促进。结论 成功构建高效靶向uPA-siRNA慢病毒载体,证实其可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因表达并促进软骨细胞增殖。
    外源性BMMSCs通过改善内源性BMMSCs成骨分化能力缓解去卵巢大鼠骨质疏松
    帅逸 于洋 邵秉一 常鹤然 张立超 廖立 金岩
    2014, 34(5):  610-614. 
    摘要 ( 133 )   PDF (1082KB) ( 451 )  
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    目的 观察系统注射骨髓间充质干细胞(BMMSCs)是否通过改善内源性BMMSCs成骨分化能力缓解去卵巢大鼠骨质疏松。方法 12只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、去卵巢(OVX)组、高剂量(High-dose)组和低剂量(Low-dose)组。建立OVX和Sham模型。术后24h,高、低剂量组分别经尾静脉注射1.5×107和0.375×107 cells/kg细胞。microCT扫描股骨近端。ALP和茜素红染色检测BMMSCs成骨能力,RT-PCR检测成骨相关基因。结果 1)OVX组的骨密度(BMD)和骨小梁数量(Tb.N)低于Sham组(P<0.05),OVX组内源性BMMSCs的成骨能力弱于Sham组(P<0.05)。2)高剂量组的BMD和Tb.N高于OVX组(P<0.05)。高、低剂量组内源性BMMSCs的成骨能力均强于OVX组(P<0.05),高剂量组强于低剂量组(P<0.05)。结论 系统注射BMMSCs通过改善OVX大鼠内源性BMMSCs的成骨分化能力,缓解OVX大鼠骨质疏松。
    A1AR在低盐刺激小鼠肾素分泌中的可能作用
    郝锦玲 刘琳 蒋兰萍 施潇潇 文煜冰 李荣山 陈丽萌
    2014, 34(5):  615-621. 
    摘要 ( 132 )   PDF (2629KB) ( 473 )  
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    目的 观察腺苷A1型受体(A1AR)基因敲除小鼠的病理生理特点及A1AR在慢性低盐刺激肾素分泌中的作用。方法 C57BL/6J品系A1AR基因敲除杂合子(A1AR+/-)小鼠,经繁殖及基因鉴定后,杂合子子代小鼠用于扩大繁殖,A1AR+/+小鼠(n=13)及A1AR-/-小鼠(n=14)用于实验。观察两组小鼠生长发育、基本生理情况(血压、心率、肾功能和血尿电解质)、肾脏病理和免疫组化观察肾脏局部肾素表达和检测血浆醛固酮水平(A1AR+/+组n=5 A1AR-/-组,n=5)。结果 低盐饮食后,A1AR-/-小鼠肾皮质肾素表达明显增加(P<0.05),全身醛固酮水平和24h尿钾排泄量显著高于A1AR+/+小鼠(P<0.05)。结论 A1AR可能参与了低盐刺激小鼠肾素分泌的过程。
    肿瘤pH微环境通过激活β-catenin/TCF4增强人乳腺癌肿瘤细胞的干性
    曹峰琦 陈翀 刘妍 白丽鹏 罗云萍
    2014, 34(5):  622-627. 
    摘要 ( 119 )   PDF (2082KB) ( 1035 )  
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    目的 探讨酸性微环境对于乳腺癌肿瘤干细胞干性的影响及其作用机制。方法 分别在pH6.8和7.4的环境下,培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231。用流式细胞术、PCR、Western blot、体外成球实验和细胞划痕实验分别检测肿瘤干细胞ALDHhigh细胞亚群的比率,干性基因SOX2、OCT4和Lin28b的表达,成球能力和肿瘤细胞迁移能力,同时检测相关信号通路的激活。结果 酸性微环境通过激活β-catenin/TCF4信号通路提高MDA-MB-231的ALDHhigh细胞亚群的比例(P<0.05),上调干性相关基因的表达(P<0.01),增强体外成球能力(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)。结论 酸性微环境能够上调干细胞比例,维持肿瘤干细胞干性特征,增加乳腺癌肿瘤细胞迁移能力。
    新型CD20核酸适配体的筛选及鉴定
    张李钰 胡燕 曹蓓蓓 段金虹 刘喆 杨先达
    2014, 34(5):  628-632. 
    摘要 ( 144 )   PDF (818KB) ( 621 )  
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    目的 研发能特异性识别CD20分子的DNA适配体,使其作为肿瘤靶向分子为非霍奇金淋巴瘤的新型靶向治疗奠定基础。方法 体外合成含有21个随机寡核苷酸、全长为59个碱基的DNA文库,以CD20胞外表位肽为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从文库中筛选CD20适配体;利用流式细胞术评估适配体的富集程度、适配体与CD20多肽,适配体与CD20阳性细胞的结合特性;用MFold软件预测适配体预计结构。结果 经多轮筛选获得了能识别CD20结构的全新DNA适配体CE4-1;它能特异性地识别CD20阳性淋巴瘤细胞,与白蛋白及CD20阴性细胞的结合较弱,与经胰蛋白酶处理的CD20阳性细胞的结合也减弱。 结论 该新型适配体能选择性识别CD20结构及CD20阳性细胞,在CD20阳性淋巴瘤的靶向诊疗方面具有应用潜能。
    高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白中和抗体及表位的鉴定
    蔡孟华 李铮 董鹏 吴瑞平 何维
    2014, 34(5):  633-637. 
    摘要 ( 121 )   PDF (884KB) ( 613 )  
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    目的 制备并鉴定中国境内流行的高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白(HA)的中和抗体及其表位。方法 选取9个HA候选抗原表位序列设计串联表位,利用表面线性表位抗体库(SEAL)专利技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体,酶联免疫吸附实验检测亚型及与合成肽结合的剂量依赖性,假病毒微量中和实验筛选中和抗体,免疫印迹法验证与不同毒株HA的结合。结果 共制备了23株单抗,其中亚型鉴定10株为IgG型;证明3株IgG3亚型的抗体具有高中和活性,均能与4种不同分枝HA结合;中和抗体识别肽为“LIKKNNAYPT”和“R/KSSFFRNVVW”且具有剂量依赖性。 结论 鉴定出3株分泌抗中国境内流行H5N1 HA的中和抗体,其对应的HA抗原表位为中和表位,可作为H5N1疫苗研制的候选表位。
    内质网应激反应通路小分子抑制剂协同抗癌药物对宫颈癌细胞的抑制作用
    聂萌 李闯 游燕 崔全才 王林
    2014, 34(5):  638-643. 
    摘要 ( 141 )   PDF (2603KB) ( 390 )  
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    目的 探讨UPR信号通路中重要小分子的抑制剂EerI和4μ8C在宫颈癌中的作用。方法 用免疫组化法检测GRP78/BiP、P97、Ubiquitin和IRE1α在正常宫颈鳞状上皮组织及不同临床分期宫颈癌组织中的表达;不同浓度的小分子抑制剂EerI和4μ8C处理宫颈癌HeLa细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡;抗癌药物BTZ和CDDP分别联合抑制剂4μ8C和EerI处理HeLa细胞,MTS法检测细胞的增殖。 结果 GRP78/BiP、P97、Ubiquitin和IRE1α在不同分期宫颈癌癌巢部位的表达水平较正常宫颈鳞状上皮细胞有显著升高(P<0.05),且随临床分期的不同其表达也存在一定差异;抑制剂EerI和4μ8C呈剂量依赖的方式抑制HeLa细胞生长,促进其凋亡(P<0.05);与单独用药处理相比,抑制剂EerI和4μ8C分别与硼替佐米(BTZ)和顺铂(CDDP)的联合作用均可显著提高HeLa细胞对两种抗癌药物的敏感性(P<0.05)。 结论 UPR通路小分子抑制剂与抗癌药物BTZ和CDDP联用具有协同抗癌活性,这为抗癌新药研发和逆转肿瘤耐药性提供了新的思路。
    核酸适配体修饰的铁纳米粒对HER2阳性乳腺癌的靶向热疗效应
    李凤武 胡燕 段金虹 许海燕 杨先达
    2014, 34(5):  644-647. 
    摘要 ( 189 )   PDF (972KB) ( 564 )  
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    目的 研发能提高HER2阳性乳腺癌热疗效应的核酸适配体-铁纳米粒子复合体(AptNPs),探索肿瘤靶向治疗的全新途径。方法 利用生物素和链霉亲和素的结合反应构建AptNPs,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,用流式细胞仪和相差显微镜检测AptNPs的靶向结合能力,MTS法测其对磁场下抗肿瘤热疗效果的影响。结果 通过生物素-亲和素反应构建了AptNPs,其平均直径为333.7 nm,对HER2阳性细胞有较强的结合,对HER2阴性细胞没有结合。此外,AptNPs可显著提升对HER2阳性细胞的热疗杀伤率(p<0.05),但对 HER2阴性细胞的热疗后杀伤率影响较小。结论 AptNPs能靶向性地提升针对HER2阳性肿瘤细胞的热疗效率,在研发新型肿瘤靶向热疗方面具有潜在应用价值。
    高强度聚焦超声治疗对肝癌细胞裸鼠移植瘤低氧诱导因子表达和细胞凋亡的影响
    付志豪 武伦 乔正荣 周世骥 李生伟
    2014, 34(5):  648-653. 
    摘要 ( 161 )   PDF (2799KB) ( 392 )  
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    目的 探讨高强度聚焦超声(HIFU)治疗后的残余肝癌组织中低氧诱导因子(HIF-1α)、P53和凋亡的变化及关系。方法 建立肝癌HpG2细胞株裸鼠移植瘤模型30只,采用CZF-Ⅱ型HIFU治疗仪治疗,随机分为对照组、治疗后1、3及5d和1及2周组。HE染色观察标本病理变化;TUNEL法检测残余癌组织凋亡及计算凋亡指数;免疫组化、Western blot和实时荧光定量 PCR技术检测HIF-1α、P53蛋白和mRNA水平。结果 治疗后有残余肿瘤细胞和大片坏死区域。与其他组相比,凋亡指数在3d组显著升高(P<0.05),在5d、1和2周组逐渐下降。HIF-1α和P53蛋白在各组中出现强弱不同的表达。HIF-1α和P53蛋白和mRNA在治疗后1~3天表达逐渐升高,在3d组显著高于其他组(P<0.05),在5d、1和2周组逐渐下降。结论 HIFU治疗肝癌细胞裸鼠移植瘤后可以促进残余癌细胞凋亡,此可能与HIF-1α、P53基因表达异常关系密切。
    白头翁皂苷—D诱导U87MG细胞凋亡
    李博 王元刚 李娟 汤海峰 程光
    2014, 34(5):  654-660. 
    摘要 ( 144 )   PDF (2404KB) ( 398 )  
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    目的 探讨白头翁皂苷-D对人脑胶质瘤细胞系U87的增殖抑制和促凋亡效应及其机制。方法 用MTT法检测细胞增殖抑制作用,并求得IC25、IC50和IC75,按浓度和时间分组,Annexin-Ⅴ/PI双染、流式细胞术和TUNEL/PI染色检测凋亡,Hoechst33342染色、透射电子显微镜、DNA-ladder检测细胞核改变,细胞免疫染色和Western-blot检测相关凋亡蛋白表达。结果 白头翁皂苷-D在14.016nmol/mL下对U87MG抑制率为94.034%(n=6, p<0.05);处理组细胞形态呈凋亡改变,细胞超微结构中发现自噬小体;处理组caspase-3、8、Bax和FasL表达上调(p<0.05),Bcl-2表达下调(p<0.05)。结论 白头翁皂苷-D对U87MG细胞有呈时间和浓度依赖的增殖抑制作用且通过FasL/Fas途径诱导其发生凋亡。
    Roux-en-Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾脏糖异生的影响
    文艺 冯犁 张少华 陈振宇 闫洪涛 陈涛 汤礼军
    2014, 34(5):  661-666. 
    摘要 ( 126 )   PDF (730KB) ( 500 )  
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    目的 研究胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾脏糖异生的影响,探讨其可能的降糖机制。 方法 建立2 型糖尿病大鼠模型,将大鼠随机分为:对照组,糖尿病模型组,假手术组和手术组。分别于术前及术后4周检测各组大鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和游离脂肪酸(FAA);术前及术后1、2和4周,检测各组大鼠空腹胰岛素,行口服糖耐量实验(OGTT),计算血糖浓度-时间曲线下面积(AUC)和胰岛素敏感指数(ISI)。术后4周,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 杂交技术检测肾脏组织中糖异生关键酶:葡萄糖6磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)的mRNA表达及蛋白含量。结果 术后4周,手术组大鼠较糖尿病模型和假手术组血脂相关指标降低(P<0.05),空腹血糖及OGTT 2h血糖值明显下降(P<0.05),AUC明显减小(P <0.05),ISI明显升高(P <0.05),手术组G-6-P和PEPCK mRNA的表达及蛋白含量较糖尿病模型组和假手术组均有降低(P<0.05)。结论 胃旁路术能显著降低糖尿病大鼠血糖,改善异常的糖耐量,其降糖机制可能与肾脏糖异生关键酶表达降低,肾脏糖异生减弱有关。
    1,25(OH)2D3抑制嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠TRPC6的表达
    肖厚勤 费沛 陈新河 胡兆雄 张永 刘双信 史伟
    2014, 34(5):  667-673. 
    摘要 ( 148 )   PDF (2287KB) ( 341 )  
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    目的 观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠肾脏TRPC6表达的影响。方法 大鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)和1,25(OH)2D3治疗组(Vit D),每组n=10。Mod组和Vit D组每10天尾静脉注射PAN100mg/kg建立PAN肾病模型。Vit D组每天给予1,25(OH)2D3 0.2μg/kg灌胃。在1和3月时分两批处死动物,检测24h尿蛋白、肾功能、血脂和血浆蛋白;PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变;RT-PCR、激光共聚焦检测TRPC6、synaptopodin及nephrin的表达和分布。结果 PAN肾病大鼠逐渐出现大量蛋白尿、大量腹水、高脂血症和低蛋白血症肾病综合征的表现。病理呈现肾间质水肿、炎性细胞浸润、大量的蛋白管型及局灶节段性肾小球硬化、肾小管萎缩和纤维化。与Mod组大鼠比较Vit D组大鼠24h尿蛋白显著减少[1月时,(338±120)mg vs(669 ±142)mg ,3月时(432±83)) mg vs (601±95) mg,P <0.01],肾小球硬化指数显著减轻[(2.3+0.6)vs (3.4+0.4), P<0.01],肾功能改善[Cr(40.2±3.4)ummol/L vs(53.4±6.3)ummol/L,BNU( 9.4±3.0)mmol/L vs(17.3±2.9)mmol/L,P <0.01];激光共聚焦显示PAN大鼠TRPC6 表达显著升高并与synaptopodin高度融合, Nephrin mRNA的表达显著降低;与Mod组大鼠比Vit D组大鼠TRPC6mRNA显著降低,nephrin的表达显著升高[在1月时,(0.42±0.10) vs(0.75±0.14);在3月时( 0.35±0.07)vs(0.68±0.10),P <0.01],Nephrin mRNA[在1月时(0.81±0.19) vs(0.33±0.09);在3月时( 0.77±0.10)vs(0.44±0.10),P <0.01]。结论 1,25(OH)2D3通过抑制PAN肾病大鼠TRPC6的表达来发挥肾脏保护作用。
    miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定
    刘玥 帅春 尹虹 宋艳斌 马文丽
    2014, 34(5):  674-678. 
    摘要 ( 142 )   PDF (831KB) ( 541 )  
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    目的 构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础。方法 以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,和慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定。用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平。最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。结果 成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P<0.05); K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P<0.05)。结论 成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用。
    利用96 孔板和RNR3调控的重组Lac Z基因酵母细胞对化学诱变原的筛选
    葛宜枝 王瑞鲲 王磊 谢云斌 刘星妍 李湘鸣
    2014, 34(5):  679-683. 
    摘要 ( 99 )   PDF (793KB) ( 485 )  
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    目的 建立化学致突变物的体外快速筛方法 方法 用PCR法从酵母基因组中扩增RNR3启动子,将其插入到pMP206/ERE报告载体,将该载体转入W303-1A酵母细胞。当化学诱变原作用于酵母细胞时,会诱导β-半乳糖苷酶表达,可对具有DNA毒性的化学物进行筛选。结果 许多可造成DNA损伤的化学诱变原可诱导RNR3的表达。使DNA发生烷基化的诱变原(甲磺酸甲脂和瘤可宁)、使DNA发生断裂的诱变原(顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素和福来霉素)、抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原(5-氟尿嘧啶、羟基脲和喜树碱)均可诱导RNR3的表达。 结论 RNR3调控的重组Lac Z报告基因酵母可用于对许多化学诱变原的筛选,筛选过程可在96孔板中进行,因而具有高通量性。
    LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中盐酸莫西沙星的含量及其药动学
    褚奇星 褚延乐
    2014, 34(5):  684-689. 
    摘要 ( 143 )   PDF (1312KB) ( 437 )  
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    目的 建立一种灵敏、快速、专属性好、选择性强的HPLC-MS/MS分析法用于测定Beagle犬血浆样品中盐酸莫西沙星的含量,研究其药动学。方法 用HPLC-MS/MS法测定血浆中盐酸莫西沙星的含量;以环丙沙星为内标,色谱柱为XTerra@MS C18 5μm, 2.1mm×150mm分析柱,流动相为甲醇-水(50:50,v/v),水相中含0.1%甲酸;流速为0.2mL/min,进样10μL。检测离子对分别为:莫西沙星m/z 402.1→m/z 384.3,内标环丙沙星m/z 332.2→m/z 314.2。结果 莫西沙星在10μg/L-2000μg/L的范围内线性良好,最低定量限10μg/L,准确度在87.8%-111.6%之间,日内、日间精密度(RSD)均≤11.6%,提取回收率>80%。犬口服给药,血浆中盐酸莫西沙星药时曲线呈两室模型,药动学参数t1/2、tmax、AUC0–t、AUC0–∞、CL分别为10.7h、2.1h、3943μg/L?h、4177μg/L?h和10.5L/h/kg。结论 分析方法操作简便、专属性强、灵敏度高,适用于Beagle犬血浆中盐酸莫西沙星含量测定及药动学研究。
    紫花前胡苷抑制哮喘小鼠气道炎性反应和NF-κB信号传导通路
    熊友谊 时维静 俞浩 张孝林
    2014, 34(5):  690-694. 
    摘要 ( 129 )   PDF (1274KB) ( 442 )  
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    目的 观察紫花前胡苷抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应作用。方法BALB/c小鼠被随机分为对照、模型、紫花前胡苷和地塞米松4组。除对照组外,所有小鼠腹腔注射和雾化吸入卵清蛋白以致敏和诱导气道炎性反应。于每次雾化前1h,给紫花前胡苷组灌胃10 mg/kg紫花前胡苷;给地塞米松组腹腔注射1mg/kg地塞米松。动物肺功能仪分析气道高反应性;细胞计数器和Diff-Quick染色计数支气管灌洗液中白细胞总数及分类;酶联免疫吸附法检测血清或BALF中炎性介质的水平;苏木精-伊红染色法观察气道病理改变;电泳迁移率和免疫印迹法检测肺组织NF-κВ信号通路中蛋白的活力和表达。结果 与对照组比较,模型组呈现明显的气道炎性反应,气道反应性显著增高 (P<0.05);血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增加 (P<0.01);细胞核P65、p-P65的水平显著增加(P<0.05);细胞质P65和IκBα显著减少,NF-κB DNA-结合力显著增加 (P<0.05)。与模型组比较,紫花前胡苷能够显著抑制气道炎性反应和气道高反应 (P<0.05);降低血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平 (P<0.01);抑制细胞核P65、p-P65水平 (P<0.05);增加细胞质P65、IκBα蛋白和减弱NF-κB DNA-结合力 (P<0.05)。结论 紫花前胡苷具有抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应。
    嗜铬细胞瘤10年307例围手术期麻醉临床分析
    裴丽坚 阮侠 黄宇光 罗爱伦 郭文娟 王蕾 王科研 张玉石 李汉忠
    2014, 34(5):  695-698. 
    摘要 ( 150 )   PDF (601KB) ( 517 )  
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    目的 总结近10年北京协和医院手术切除嗜铬细胞瘤麻醉手术经验。方法 北京协和医院1992-09-01~2012-08-31期间手术切除嗜铬细胞瘤461例,按照病历尾号随机采样307例进行回顾性分析。2002-09-01~2012-08-31手术治疗234例作为试验组;1992-09-01~2002-08-31手术治疗73例作为对照组。重点关注术前准备时间、麻醉管理、术中脏器损伤、术后ICU停留时间和术后住院时间等与围术期预后相关的指标近10年的变化。结果 近10年,腹腔镜手术切除嗜铬细胞瘤成为主要手术方式(84.1%),术前准备时间缩短8.9d,引流管拔除时间缩短3.4d,ICU停留时间缩短3d,术后平均住院日缩短8.4d,p<0.01。结论 围术期优化治疗策略,可以明显改善嗜铬细胞瘤切除术围术期预后。
    研究短文
    两种不同缓冲系统的多聚甲醛对鼠脑组化结果的影响
    杜志荣 张 琳 阴彬 彭小忠
    2014, 34(5):  699-700. 
    摘要 ( 170 )   PDF (1486KB) ( 2750 )  
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    P物质减轻高氧诱导新生大鼠肺损伤
    田名洋 李青 赵云红 马遵平 刘玉琴 许峰 黄波
    2014, 34(5):  701-703. 
    摘要 ( 130 )   PDF (997KB) ( 400 )  
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    木脂素促进人胃癌MGC-803细胞凋亡
    李红国 刘双萍 崔银姬 李柱虎
    2014, 34(5):  704-706. 
    摘要 ( 104 )   PDF (912KB) ( 761 )  
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    人重组蛋白胸腺素B10促进卵巢癌细胞系SKOV3凋亡
    曲连悦 蔡爽 姜明燕
    2014, 34(5):  707-708. 
    摘要 ( 104 )   PDF (414KB) ( 438 )  
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    肋间神经冷冻对开胸术后疼痛的影响
    刘红菊 何志斌 王慧 薛杨 刘薇
    2014, 34(5):  709-710. 
    摘要 ( 139 )   PDF (319KB) ( 430 )  
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    短篇综述
    微小RNAs在糖尿病肾病中的作用
    周敏 张晓良
    2014, 34(5):  711-714. 
    摘要 ( 116 )   PDF (508KB) ( 530 )  
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    糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症之一。目前关于糖尿病肾病的发生发展机制尚不十分明确。近年来研究发现,表观遗传学因素在其进展中发挥了重要作用,其中微小RNAs(microRNAs)在糖尿病肾病的发展中发挥了保持足细胞正常功能及细胞外基质动态平衡等多种功能。
    运动防治肥胖的分子机制
    彭茜 安振梅
    2014, 34(5):  715-718. 
    摘要 ( 126 )   PDF (515KB) ( 517 )  
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    运动能防治肥胖等代谢性疾病早已为人们熟知,但其机制一直不甚明了。直到irisin这种新的蛋白类激素被发现,方揭开运动?—PGC-1α—FNDC5/irisin—UCP1通路是运动防治肥胖等代谢性疾病的分子机制。
    血管外肺水及肺血管通透性监测在ARDS患者中的临床价值
    张瑜荣 邓立普 张小华
    2014, 34(5):  719-722. 
    摘要 ( 225 )   PDF (476KB) ( 627 )  
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    血管外肺水(EVLW)的改变可定量反映ARDS患者早期肺水肿的存在及严重程度,与预后呈显著相关,有利于急性呼吸窘迫综合征(ARDS)早期诊断及指导治疗以改善预后;肺血管通透性指数(PVPI)直接反映肺血管通透状态,可资鉴别肺水肿的原因,反映肺损伤程度,以及评价ARDS病人的预后情况。