基础医学与临床 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (7): 866-873.doi: 10.16352/j.issn.1001-6325.2025.07.0866
任久强, 李静, 李卓, 刘雪会*, 吕湘*
REN Jiuqiang, LI Jing, LI Zhuo, LIU Xuehui*, LYU Xiang*
摘要: 目的 建立由造血细胞中高活性的脾焦点形成病毒(SFFV) 启动子驱动的mCherry-GFP-LC3B慢病毒表达体系,并实现红系终末分化细胞自噬流的高效动态示踪。方法 构建pRSC-SFFV-mCherry-GFP-LC3B慢病毒质粒,包装慢病毒并感染人红系祖细胞系(HUDEP-2)及小鼠胎肝来源原代红系细胞;结合血清剥夺及氯喹干预模型,利用荧光成像、Western blot及流式细胞测量术分析红系终末分化细胞的自噬动态变化。结果 SFFV启动子在HUDEP-2(97% vs. 60%)及原代小鼠胎肝红系细胞(83% vs. 1%)中表达的阳性率均显著高于巨噬细胞病毒(CMV)启动子(P<0.01,P<0.001),且不影响正常分化。血清剥夺后,自噬溶酶体(红斑)数量增加,伴随LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高及p62蛋白下降;氯喹干预则导致自噬体(黄斑)累积(P<0.001),且抑制效应呈剂量依赖性(r2=0.92)。结论 SFFV驱动双荧光体系可高效实时示踪红系细胞自噬流动态,为红系分化及相关贫血性疾病的机制研究提供了高灵敏度工具。
中图分类号: