miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用

基础医学与临床 ›› 2016, Vol. 36 ›› Issue (8): 1124-1129.

miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用

王筝,邢译文,朱凤英,王静波

航天中心医院

收稿日期:2015-12-22 修回日期:2016-05-27 出版日期:2016-08-05 发布日期:2016-07-13
通讯作者: 王筝 E-mail:13718881814@163.com

Construction of miR-181b lentiviral vector and its targeting effect on MAPK1 gene

Received:2015-12-22 Revised:2016-05-27 Online:2016-08-05 Published:2016-07-13

摘要/Abstract

摘要： 目的构建miR-181b慢病毒过表达载体，探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用。方法分别构建pSicoR-miR-181b及pMIR-Report-MAPK1过表达载体，转染HEK-293T细胞后，用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测MAPK1mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系。结果成功构建了pSicoR-miR-181b及pMIR-Report-MAPK1重组质粒，miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平（P<0.05）,抑制miR-181b的表达后，MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调（P<0.05）。结论成功构建pSicoR-miR-181b慢病毒载体，并证实通过靶向作用MAPK1-3’UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达。

关键词: microRNA, miR-181b, MAPK1

Abstract: Objective To construct alentiviral vector of miR-181b andverify its targeted effect on MAPK1 gene. MethodspSicoR-miR-181b and pMIR-Report-MAPK1 over-expression vector were construsted.ThemRNA of MAPK1 was verified by real-time PCR testand the protein level of MAPK1 was verified by Western blot .To validate the targeted regulatory relationship between miR-181band MAPK1 3’-UTRthrough relative luciferase activity.ResultsTherecombinant plasmids of pSicoR-miR-181b and pMIR-Report-MAPK13'-UTR were constructedsuccessfully. And it was showed that over-expression of miR-181b suppressed the mRNA and protein expression level of MAPK1significantly(p<0.05),suppression of miR-181b expression increased the expression level of MAPK1 mRNA and protein significantly(p<0.05). ConclusionsThelentiviral vector containing miR-181b gene has successfully constructed.MiR-181b can suppress MAPK1 gene expression by targeting the specific sequence ofMAPK1-3'UTR.

Key words: microRNA, miR-181b, MAPK1

中图分类号:

R392

王筝邢译文朱凤英王静波. miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用[J]. 基础医学与临床, 2016, 36(8): 1124-1129.

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