摘要: 目的 探讨CDKL5在Rett综合征中与MeCP2相互作用的机制。方法 体外培养孕18d SD胎鼠皮质神经元,通过小RNA干扰技术(siRNA)敲低Cdkl5,分为干扰组(Cdkl5 shRNA)和对照组(control shRNA)。用Real time-PCR及Western blot法评估Cdkl5在mRNA和蛋白水平被敲低的效率;Cdkl5表达降低后Mecp2和Mecp2相关的下游靶基因表达变化。对Cdkl5 shRNA 转染后神经元用CCK8法检测吸光度值评估神经元活力;用Real time-PCR和Western blot法检测凋亡基因caspase3 和凋亡活性蛋白cleaved-caspase3评估神经元凋亡状态。结果 干扰组与对照组比较,Cdkl5在mRNA水平下降73%,在蛋白水平下降75% (p<0.05);Mecp2在mRNA和蛋白水平升高约2倍 (p<0.05);Bdnf XI在mRNA水平明显下降,Psd95在mRNA水平明显上升(p<0.05)。结论 建立稳定的Cdkl5基因敲低的原代皮质神经元模型,并初步提示CDKL5可能通过对MeCP2的调控诱导了下游靶基因的变化。
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