摘要: 目的 构建PLCε基因的shRNA表达载体转染膀胱癌细胞T24株,观察其对T24细胞转移侵袭等恶性行为的影响。方法 设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中,构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体转染T24细胞后,RT-PCR、Western blot检测对T24细胞PLCε表达的作用;以侵袭小室、明胶酶谱分析及免疫组化检测其对T24细胞侵袭能力变化。结果 成功构建了针对PLCε基因的shRNA表达载体。RT-PCR检测显示,2个阳性重组质粒转染膀胱癌细胞T24,对其PLCεmRNA表达抑制率分别为76.0%,73.9%,Western blot检测显示:对PLCε蛋白表达抑制率分别为65.4%,64.8%。对T24细胞的侵袭转移能力, 阳性质粒P1和P2转染组穿膜细胞数分别为(25.8±6.2) 和P2转染组(26.8±5.8),明显少于空白对照组(34.8±6.9)(P<0.01)和阴性质粒HK-A转染组(33.8±5.7)(P<0.01);明胶酶谱及免疫细胞化学显示转染P1、P2均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于空白对照和HK-A转染组(p<0.01)。结论 通过阻断PLCε基因,能有效抑制膀胱癌T24细胞株中PLCε基因和其蛋白表达,并且对T24细胞的侵袭转移能力具有一定的抑制作用。
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