基础医学与临床 ›› 2018, Vol. 38 ›› Issue (5): 589-593.
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钟顺顺1,李凯2,杨阳1,缪时英3,王琳芳3,宋伟4
摘要: 目的 利用CRISPR/Cas9 技术构建QKI 基因敲除的GC1-spg细胞系,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响。方法 利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI基因的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免疫印迹(Western Blot)和基因测序鉴定出GC1-spg敲除QKI基因细胞系;正常培养野生型和敲除细胞系,利用细胞计数试剂盒(CCK8)检测增殖曲线和荧光定量PCR(q-PCR)检测减数分裂相关基因变化,从而研究QKI蛋白在GC1-spg增殖与分化中的重要作用。结果 本研究成功构建出QKI基因敲除GC1-spg细胞系,与对照组相比,QKI敲除细胞系的增殖明显下降(*P < 0.05),减数分裂相关分子标志基因表达量明显降低(*P < 0.05)。结论 QKI蛋白可以影响GC1-spg的增殖和分化,因此QKI蛋白可能通过影响增殖和分化而影响精子发生。
中图分类号: