RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用

基础医学与临床 ›› 2017, Vol. 37 ›› Issue (4): 473-478.

RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用

孔祥玉¹,王爽¹,王彦²,徐畅²,王芹²,刘强²,杜利清¹

1. 北京协和医学院放射医学研究所
2. 中国医学科学院放射医学研究所

收稿日期:2016-11-24 修回日期:2017-01-12 出版日期:2017-04-05 发布日期:2017-03-24
通讯作者: 杜利清 E-mail:duliqing2004@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目;天津市应用基础与前沿技术研究计划（一般项目）

Lethal action of RI-1 on MSH2-deficient colorectal cancer cells

Received:2016-11-24 Revised:2017-01-12 Online:2017-04-05 Published:2017-03-24

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨RAD51抑制剂RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用及可能的作用机制。方法 Western blot法筛选MSH2差异表达的结直肠癌细胞系，MTT法检测不同结直肠癌细胞系对RI-1（10、20、30、40或50 μmol/L）的敏感性；构建针对MSH2基因的重组shRNA慢病毒表达载体并感染HT29细胞。RI-1（40 μmol/L）处理细胞，流式细胞术检测细胞凋亡的变化；单细胞凝胶电泳实验分析细胞内DNA损伤情况；细胞免疫荧光法检测γ-H2AX foci的形成。结果与对照组相比MSH2缺陷的HCT8细胞有明显细胞凋亡现象（P<0.01）；HCT8细胞和HT29Shmsh2细胞尾部DNA含量、尾长和尾距均较对照组明显增加（P<0.05）；HCT8细胞和HT29Shmsh2细胞内γ-H2AX foci的形成数量较对照组明显增加（P<0.01）。结论 RAD51抑制剂RI-1可能通过增加细胞内DNA损伤参与RI-1对MSH2缺陷肿瘤的杀伤作用。

关键词: 关键词： RI-1，结直肠癌细胞，RAD51基因，MSH2基因

Abstract: Objective Toexplore the lethal action and possible mechanism of RI-1, a RAD51 inhibitor, on MSH2 deficient colorectal cancer cells. Method The expression of MSH2 protein level was assessedby Western blot , andthe sensibility of human colorectal cancer cells to RI-1 （10, 20, 30, 40and 50 μmol/L）was measuredby MTT method. Lentivirus vectorsMSH2-shRNA and Neg-shRNA (negative control) were constructed and transfected into HT29 cell. Apoptosis and DNA damage of cellstreated with RI-1（40 μmol/L）were detectedby flow cytometryand Single cell gel electrophoresis respectively. In addition, the formation of γ-H2AX foci was analyzed by immunofluorescence. Results Compared with control, MSH2-deficientHCT8 cellshad obviously apoptosis（P<0.01）；in HCT8 and HT29Shmsh2 cells,tail DNA%, tail length, tail moment and olive tailmomentweremarkedly increased（P<0.05）,and the number ofγ-H2AX focuswere increased（P<0.01）.Conclusions RAD51 inhibitor RI-1 selectivelykilled MSH2 deficient colorectal cancer cells by increasing DNA damage.

Key words: Key words: RI-1 colorectal cancer cell RAD51 MSH2

中图分类号:

孔祥玉王爽王彦徐畅王芹刘强杜利清. RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用[J]. 基础医学与临床, 2017, 37(4): 473-478.

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