摘要: 目的 构建靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒并探讨其对胃癌细胞增殖的调节作用。 方法 根据siRNA原理设计4对靶向CIP2A的siRNA序列,克隆到真核表达载体pGPU6/GFP/Neo中(shRNA-1、2、3和4)。脂质体转染人胃癌细胞系BGC-823,Real-time PCR 和Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒,CCK-8法检测对胃癌细胞增殖的影响。 结果 4个靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒经限制性酶切和测序证实基因已正确插入,转染效率可达到70%以上。转染后24、48 和72 h,4个质粒均明显降低BGC-823细胞内CIP2A mRNA 和蛋白的表达。相较于其它3个重组质粒,shRNA-1的抑制作用更为显著,且对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用 (P<0.05) 。 结论 成功构建的靶向CIP2A的shRNA真核表达质粒,可有效抑制胃癌细胞CIP2A的mRNA和蛋白表达,并抑制胃癌细胞的增殖,为今后研究CIP2A在胃癌中的作用机制奠定了基础。
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