基础医学与临床 ›› 2009, Vol. 29 ›› Issue (1): 78-81.
路静 赵军 杨洪艳 黄幼田 郑智敏 赵明耀 董子明
Jing LU, Jun ZHAO, Hong-yan YANG, You-tian HUANG, Zhi-min ZHENG, Ming-yao ZHAO, Zi-ming DONG
摘要: 目的 建立简便高效的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外分离、培养、冻存方法,以获得大量HUVECs为相关医学基础研究及组织工程学提供良好细胞来源。方法 新鲜脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶消化,获得HUVECs,内皮细胞培养基(ECM)进行培养。倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学、RT-PCR检测VWF、CD144的表达。HUVECs加入10 %甘油的冻存液, 置于液氮保存4周,冻存复苏后Western blot检测VWF、CD144蛋白水平的表达。结果HUVECs体外生长2~3 d可铺满单层,细胞呈梭形,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;高表达VWF和CD144;冻存后复苏的细胞分裂增殖旺盛,蛋白水平高表达VWF、CD144。结论 脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可获取大量高纯度的内皮细胞,可作为相关研究良好的细胞来源。
中图分类号: