基础医学与临床 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (4): 370-375.
刘恩令 周玉秀 糜若然 钱其军
En-ling LIU, Yu-xiu ZHOU, Ruo-ran MI, Qi-jun QIAN
摘要: 目的 构建携带血管抑素的腺病毒载体,并对其对血管内皮细胞增殖及迁移的抑制作用进行研究。 方法 采用基因重组及克隆技术,构建携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,PCR鉴定,50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。直接感染台盼蓝染色排除法、MTT及体外趋化实验检测血管抑素K1-5对内皮细胞增殖及趋化的抑制作用。 结果 经50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,病毒滴度为1.5×109pfu/ml。按需要扩增一定量后,进行纯化,病毒滴度达1.1×1010pfu/ml。直接感染台盼蓝染色排除法及MTT法检测表明,血管抑素K1-5的腺病毒能抑制血管内皮细胞增生,并对其具有杀伤力。趋化实验表明,血管抑素K1-5能使血管内皮细胞趋化能力减弱,抑制血管形成。 结论 我们成功构建了携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,并经直接感染台盼蓝染色排除法、MTT及体外趋化实验证明,血管抑素K1-5能明显抑制血管内皮细胞增殖及迁移,为进一步体内实验,研究对血管形成的抑制作用奠定了基础。