摘要: 目的 利用生长分化因子(GDF-5)联合地塞米松(Dex)诱导大鼠BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法:用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞随机分成6组:BMSCs组、BMSCs+Dex组、BMSCs+GDF-5组、BMSCs+GDF-5+Dex组、BMSCs+ GDF-5+ Dex+SB216763组和BMSCs+GDF-5+Dex+ XAV-939组。连续诱导培养14d,倒置相差显微镜观察细胞形态,Alcian blue染色检测细胞的蛋白聚糖,RT-PCR检测成软骨分化相关基因Aggrecan、Col2、Sox9、Col1,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Dvl1、Gsk3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达。结果:与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5+Dex组能够使诱导的细胞蛋白聚糖分泌明显增加;Aggrecan、Col2、Sox9基因表达明显增加(P<0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P<0.05);β-catenin mRNA及蛋白表达水平也增加(P<0.05)。与BMSCs+GDF-5+Dex组相比,添加SB216763组蛋白聚糖,Ⅱ型胶原基因和蛋白表达增加(P<0.05);相反,添加XAV-939组相应的成软骨分化基因及蛋白表达下降(P<0.05)。结论:GDF-5联合地塞米松(Dex)可诱导大鼠BMSCs成软骨分化,Wnt/β-catenin信号通路可能在其中发挥促进作用。
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