摘要: 摘要:目的 提高人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells, hiPSC)转化效率,缩短其产生周期,并避免引入外源基因。方法 利用GP2-293细胞包装Oct4,Sox2,Klf4和c-myc四种因子的逆转录病毒,对人成纤维上皮细胞(human fibroblast feeder cells, HFF)进行感染,在转化过程中加入SB431542,PD0325901和thiazovivin物质,待形态与胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESC)相似的克隆出现并长至足够大,进行独立培养,检测其标记蛋白,定向诱导分化能力和核型分析。结果 HFF经四种因子转化之后,在20天时出现形态与ESC克隆相似的hiPSC,比Yamanaka方法时间缩短了10天,效率提高约12倍。它们与ESC同样表达标记蛋白质Oct4,SSEA3,Tra-1-60和Tra-1-81;体外成功定向分化为心肌细胞。核型分析表明所获得hiPSC的染色体核型正常。结论 本课题所建立的hiPSC生成体系转化效率高、所需周期短,并成功诱导分化成具有节律性搏动的心肌细胞,为心血管疾病模型的建立和研究提供了实验基础。
中图分类号: