中国药学杂志
    
           首页  |  期刊介绍  |  编 委 会  |  投稿指南  |  期刊订阅  |  广告服务  |  会议信息  |  联系我们  | 
�й�ҩѧ��־ 2013, Vol. 48 Issue (2) :90-95    DOI:
���� ����Ŀ¼ | ����Ŀ¼ | ������� | �߼����� << | >>
����������������������-Fc��CHO-DG44ϸ���������¶��Ż��о�
���ƣ�л������գ��±�����������л���ᣬ��ʢ
���ϴ�ѧ��a.����ҽҩ�о��������أ�b.�㶫ʡ���﹤��ҩ���ص�ʵ���ң�c.����ҩ����ҹ������ģ�d.ҩѧԺ������ 510632
LEI Yun�� XIE Kui�� HONG Gang�� CHEN Bao-qiong�� YANG Yi-li�� XIE Qiu-ling�� XIONG Sheng

Download: PDF (0KB)   HTML (1KB)   Export: BibTeX or EndNote (RIS)      Supporting Info
ժҪ Ŀ�� �Ż�����������������������-Fc��TNFR-Fc���ںϵ��׵�����CHO-DG44ϸ���������¶ȣ��������ϸ����������¶ȷŴ������´�����IJ��﴿�ȼ����ԡ����� ��������������ʽ���������й������ѳ�ϸ��������37 �桢37 ��ת31 �桢31 �� 3�ֲ�ͬ���¶��£�ÿ��ȡ�����ϸ���ܶȡ�ϸ�����ʡ�������Ũ�ȡ�����Ũ�ȡ��������������������-Fc�ںϵ���Ũ�ȣ���ѡ����ѵ������¶ȶ������й������ѳ�ϸ�����зŴ�10��50��200 mL��2 L�������������������徭Protein A�׺�ɫ����������������SDS-PAGE��SE-HPLC��WST-8���������������������-Fc�ںϵ��׽�����Է������������Ⱥ�������Լ�⡣��� �о����֣�37 ��ת31 ���ת�¶������������ڱ��ָ��ܶȻ�ϸ����ͬʱά��ϸ�����ʣ��ӳ��������ڣ���������������������������-Fc�ںϵ��ײ��������Ҹ�ת�¶��������տɳɹ���Ӧ��������CHOϸ���Ĺ�ģ�Ŵ������С���������������������������-Fc�ںϵ�����Է�������ԼΪ150��103��������93%���ϣ�������Լ����ʾ����к������������������Ӧ���ϸ����ЧӦ������ ��ȵ�һ��37 ������������37 ��ת31 ���ת�¶��������տ������������CHO-DG44ϸ�����������������������-Fc�ںϵ��ױ�������Ҹù��վ��пɷŴ��ԣ���Ϊ�ù��յĸ����ģӦ�õ춨�˻�����
Service
�ѱ����Ƽ�������
�����ҵ����
�������ù�����
Email Alert
RSS
�����������
����
�
���
�±���
������
���
��ʢ
�ؼ����� ������������   �������������������-Fc�ںϵ���   �¶�   ��ģ�Ŵ�     
Abstract�� OBJECTIVE To optimize the culture temperature of recombinant CHO-DG44 cells expressing tumor necrosis factor receptor-Fc fusion protein and to determine the bioactivity of expressed protein at the best culture temperature. METHODS Recombinant CHO cells were batchly cultured at three different temperatures (37 �棬37 �� shifting to 31 �� and 31 ��). Samples were daily tested for cell densities�� viabilities�� glucose concentration�� lactic acid concentration and TNFR-Fc fusion protein concentration�� then the best culture temperature was chosen to scale up the fermentation volume��10�� 50�� 200 mL�� and 2 L��. TNFR-Fc fusion protein was purified with Protein A affinity chromatography��determined for relative molecular mass��purity and neutralizing activity by SDS-PAGE��SE-HPLC and WST-8 separately. RESULTS The culture condition of 37 �� shifting to 31 �� resulted in the maximum viable cell density��high viability and long culture time of the cells as well as high TNFR-Fc protein productivity��and this culture procedure could be successfully applied to the scale-up of recombinant CHO cells. The purified fusion protein��with a relative molecular mass about 150 000�� reached the purity of more than 93% and neutralized the cytotoxic effect of TNF��. CONCLUSION Compared to the traditional culture temperature of 37 �棬the culture temperature of 37 �� shifting to 31 �� can obviously improve the TNFR-Fc fusion protein output by recombinant CHO-DG44 cells. And this technique can be applied to scale-up�� which will lay a foundation of large scale industrial production.
Keywords�� tumor necrosis factor,   TNFR-Fc fusion protein,   temperature,   scale-up     
�ո�����: 2012-07-30;
��������:�����ش���ҩ����������Ŀ��2012ZX09103301-033��2012ZX09202301�������ϴ�ѧ���������봴�»���ܳ��˲�����������Ŀ��1161-1206���������ģ�Ʊ���������������ҩ����о���2010U1-E00541��
���߼��: ���ƣ�Ů��˶ʿ�о��� �о����򣺿�����ҩ�� ��ͨѶ���ߣ���ʢ���У���ʿ���о�Ա����ʿ����ʦ �о��������\��ҩ��Tel����020��85222706-311 E-mail��xiongsheng@jnu.edu.cn
���ñ���:   
����, л��, ��յ� .����������������������-Fc��CHO-DG44ϸ���������¶��Ż��о�[J]  �й�ҩѧ��־, 2013,V48(2): 90-95
LEI Yun, XIE Kui, HONG Gang etc .Optimization of the Culture Temperature of Recombinant CHO-DG44 Cells Expressing Tumor Necrosis Factor Receptor-Fc[J]  Chinese Pharmaceutical Journal, 2013,V48(2): 90-95
��
[1] YOON S K�� HONG J K�� CHOO S H�� et al. Adaptation of Chinese hamster ovary cells to low culture temperature�� Cell growth and recombinant protein production. J Biotechnol�� 2006�� 122 (4)�� 463-472.
[1] κ�dz�;�����;���ٺ�.��������ˮ�������Ʊ������ڽ���ų��е���ЧӦ�о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2012,22(9): 693-695
[2] ���������������־����������ά��.�����Ԥ����Դ���ȱѪ�ٹ�ע�����˵�Ӱ��[J]. �й�ҩѧ��־, 2012,47(21): 1711-1715
[3] ���;������;����;��һ��;л��;������;�±���;л����;�鰶;��ʢ.���˱�Ƥ������������2��Դ������¡�������й������ѳ�ϸ���еı����������Բⶨ[J]. �й�ҩѧ��־, 2012,47(11): 884-888
[4] ������ �߿� ������ �԰�־ ���� ���� ��С�� ����־ �.����ע��rAAV2/rTNFR��Fc�Դ���ԭ�����ʪ�ؽ���ģ�͵���������[J]. �й�ҩѧ��־, 2011,46(7): 507-511
[5] ���� �ƾ� ��ӭ�� ����Ӣ ��Ⱥ .�����������������ӵ����յ�����ͻ�����ȶ����о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2010,45(23): 1842-1846
[6] ��ܽ�� ��ǿ�� ��ƽ л�˼�.���з���͡Ӱ��ԭ���Ը�Ѫѹ����ѭ��Ѫ������ϸ����֢���ӱ����ٴ��о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2010,45(2): 144-146
[7] ������ κ���� ����ѩ ���� ���绪.��Ҷ�����ƶ�ox-LDL�յ���U937ϸ�������֢���ӵ�Ӱ��[J]. �й�ҩѧ��־, 2010,45(10): 743-746
[8] ������ ��鲨 �γ� ������ ��ѧ��.����ø�����Ƽ�����������ת�᳦�������TRAIL��ҩ���о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2010,45(1): 19-22
[9] ������ ;���� ;������ ;���� ;���� ;�´�Ϊ . ��������Ƥ��ע�仺���������Ʊ����������ͷ���Ϊ�о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2009,44(24): 1882-1887
[10] ����;��СӨ;����;������;����;�Ų���;����÷ . ��յϸ��ע��Һ�����������������˴�������΢Ѫ����Ƥϸ���������ӵ�Ӱ��[J]. �й�ҩѧ��־, 2009,44(23): 1791-1795
[11] ����;�����;����ʤ;�����.�θ�ע��Һ�Դ���ȱѪ�ٹ�ע�����˵ı�������[J]. �й�ҩѧ��־, 2009,44(13): 993-996
[12] ������;���վ�.����ɳķ407�¶�������ԭλ�������о���չ[J]. �й�ҩѧ��־, 2009,44(04): 245-248
[13] �γɾ�;��־��;����;���Ǹ�;������.������¶��������������о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2008,43(15): 1157-1161
[14] ��׿;��Ա;�޸���;�����;�����.��ѩ���ն�С��֬������ʹ����������MPO��NO��TNF-��Ӱ���о�[J]. �й�ҩѧ��־, 2008,43(10): 751-753
[15] �ﺣ��;������;���ܴ�;�컪��;�Ա.¹�϶��Ŀڷ�Һ�Դ��������Թؽ��׵��������ü������[J]. �й�ҩѧ��־, 2008,43(07): 502-506
Copyright 2010 by �й�ҩѧ��־