基础医学与临床 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (2): 144-148.
罗丝 杨克恭 刘长征 邓艳春 苏林 孔燕 陈松森
Si LUO, Ke-gong YANG, Chang-zhen LIU, Yan-chun DENG, Lin SU, Yan KONG, Song-sen CHEN
摘要: 目的 研究人造血增效因子hHSF C末端结构与其趋化活性的关系。 方法 用PCR方法合成编码3种hHSF C末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coli BL21(DE3)中进行表达。hHSF 1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-53经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。 结果 测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致, hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(50nmol/L,CI)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α 螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。 结论 hHSF C末端结构,特别是 α 螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。