基础医学与临床 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (1): 70-73.
谢振华
Zhen-hua XIE
摘要: 目的 构建硫氧还蛋白和氧化/还原因子的融合荧光蛋白真核表达载体,并在293T细胞中得到表达和定位。方法 以RT-PCR方法从PC12细胞中克隆氧化/还原因子(APE/ref-1)的 cDNA ,然后亚克隆构建APE/ref-1- EGFP融合真核表达载体.以PCR方法将质粒pQE30-TRX上的硫氧还蛋白cDNA亚克隆到pDsred1-1质粒上,然后将硫氧还蛋白-DsRed融合基因序列亚克隆到pCMV5质粒上,构建硫氧还蛋白-DsRed融合真核表达载体.通过磷酸钙转染293T细胞,以荧光显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 成功构建了硫氧还蛋白-DsRed和APE/ref-1- EGFP融合表达载体,并在293T细胞中得到表达,APE/ref-1- EGFP融合蛋白定位在293T细胞核内;硫氧还蛋白-DsRed融合蛋白定位在293T细胞质和细胞核内。结论 为进一步研究硫氧还蛋白和APE/ref-1之间的动态相互作用奠定基础。