摘要: 目的 构建有效针对小鼠C/EBP同源蛋白(CHOP)的shRNA真核表达载体,基因沉默后对Heap 1-6细胞凋亡的影响。方法 设计合成针对CHOP的shRNA靶序列及无同源性的shRNA序列作为阴性对照,退火后重组入pLKO.1-TRC载体,转化扩增后进行快速双酶切鉴定;慢病毒包装法转染293T细胞获得的病毒上清转染Heap 1-6细胞,用含嘌呤霉素的培养基连续筛选10获得稳定株,Western blot检测Caspase9和c-PARP蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期。结果 各shRNA载体构建成功;与阴性对照组相比,shCHOP组能显著抑制CHOP蛋白的表达(p<0.05);且CHOP基因沉默后明显降低了衣霉素诱导的细胞凋亡(p<0.05)。结论 CHOP基因沉默能减缓衣霉素诱导内质网应激产生的Heap 1-6细胞凋亡。
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