针对干扰素-γ的新型核酸适配体的筛选及鉴定

基础医学与临床 ›› 2013, Vol. 33 ›› Issue (6): 661-665.

针对干扰素-γ的新型核酸适配体的筛选及鉴定

曹蓓蓓¹,胡燕²,段金红¹,许丹科³,王琛²,杨先达⁴

1. 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所
2. 国家纳米科学中心
3. 南京大学化学化工学院
4. 中国医学科学院基础医学研究所

收稿日期:2013-03-22 修回日期:2013-04-24 出版日期:2013-06-05 发布日期:2013-05-29
通讯作者: 杨先达 E-mail:ayangmd@gmail.com
基金资助:
自发性高血压大鼠心、脑、肾和肠系膜微动脉缝隙连接特性的比较研究》国家自然科学基金（国家自然科学基金）;科技部重大科学计划

Identification of a novel DNA aptamer against IFN-γ

Received:2013-03-22 Revised:2013-04-24 Online:2013-06-05 Published:2013-05-29
Contact: Xian-da YANG E-mail:ayangmd@gmail.com

摘要/Abstract

摘要： 目的: 研发能特异性结合干扰素-γ（IFN-γ）的DNA适配体，为发展IFN-γ的新型检测技术提供基础。方法: 体外合成全长为59个碱基并含有21个随机寡核苷酸的单链DNA文库，以IFN-γ蛋白为靶标，利用指数富集的配体系统进化技术（SELEX），从单链DNA文库中筛选能够选择性结合IFN-γ蛋白的核酸适配体；流式细胞术检测富集进度、适配体与IFN-γ蛋白结合特性；MFold软件预测二级结构。结果: 经多轮筛选获得了能够识别IFN-γ蛋白的DNA适配体B3-8，其能够选择性地结合IFN-γ蛋白，而与血清白蛋白的结合较弱。经检测其Kd值为185 nmol/L。结论: DNA适配体B3-8能选择性地识别IFN-γ蛋白，在研发针对IFN-γ的新型检测技术方面具有应用潜能。

关键词: 适配体, SELEX, IFN-γ

Abstract: Objective: To develop IFN-γ DNA aptamer that may potentially serve as a binding ligand in novel aptamer-based IFN-γ detection. Methods: A single-stranded 59nt DNA library containing 21 random oligonucleotides was synthesized in vitro. A new aptamer B3-8 was developed by SELEX technique with IFN-γ protein as target. Flow cytometry was performed to monitor the enrichment of aptamer pool and to evaluate the binding properties of B3-8. The structure of B3-8 was predicted by MFold software. Results: The aptamer B3-8 bound to the IFN-γ with a Kd of nmol/L, and had minimal cross reactivity with BSA. Conclusions: B3-8 may have application potentials in IFN-γ assay.

Key words: aptamer, SELEX, IFN-γ

中图分类号:

R 979.1

曹蓓蓓胡燕段金红许丹科王琛杨先达. 针对干扰素-γ的新型核酸适配体的筛选及鉴定[J]. 基础医学与临床, 2013, 33(6): 661-665.

[1]	张宁毛爱红马瑾廖世奇张丽琼王晓清马君. HIV-p24核酸适配体的筛选[J]. 基础医学与临床, 2012, 32(9): 987-991.
[2]	王岩. SELEX技术及其在医学中的应用[J]. 基础医学与临床, 2007, 27(7): 834-840.