摘要: 目的 观察拟胚体(EB)贴壁时间对小鼠胚胎干细胞(ESC)心肌分化的影响并研究其机制。方法 用悬滴培养法促进ESCs形成EBs。EBs在不同的分化天数贴壁,观察搏动EBs百分比,RT-PCR检测Nkx2.5,GATA4和β-MHCmRNA表达,Westernblot检测Src家族酪氨酸激酶磷酸化水平。结果 分化第3,4天贴壁组搏动EB百分比及Nkx2.5,GATA4,β-MHC表达水平显著低于分化第5,6和7天贴壁组(P<0.05);EB贴壁能够使Src激酶磷酸化水平升高,Src激酶阻断剂PP2能够抑制贴壁诱发的Src激酶磷酸化水平升高(P<0.05);对于分化第4天贴壁组,在分化第4~6天使用PP2能够增加搏动EBs百分比及β-MHC表达水平(P<0.05)。结论 EB贴壁时间是影响ESC心肌分化的一个重要因素。在分化第4天或者之前贴壁可以显著抑制心肌分化,其机制可能是EB贴壁激活了Src激酶。
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