基础医学与临床 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (4): 377-382.
杨兵1,陈维贤2,文阳安1,黄世峰1,周倩云1,张莉萍1
YANG Bing 1,CHEN Wei-xin 2,WEN Yang-an 2,HUANG Shi-feng 2,ZHOU Qian-yun 2,ZHANG Li-ping 1
摘要: 目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞株,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果。方法 用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染入HepG2细胞系,通过G418筛选后分别经RT-PCR和免疫组化,对HBX的表达进行验证;化学合成靶向HBX的siRNA(即siHBX),转染入HBX稳定表达株,分别以RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测HBX mRNA表达水平,Western Blot检测HBX蛋白表达水平以验证siHBX对HBX基因的沉默效应,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 成功构建表达HBX基因的HepG2-HBX细胞株;siHBX可以高效特异抑制HBX表达,并抑制细胞周期进展。结论siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞株内HBX表达的策略,为后续HBV感染相关性肝癌的治疗奠定了实验基础。
中图分类号: