摘要: 目的 克隆大鼠脑组织神经营养素3(NT-3)基因,原核诱导表达并纯化,制备高效价抗体,为研究其对周围神经损伤修复的影响奠定基础。方法 用RT-PCR 法扩增目的基因,依次克隆入pMD-18T载体及亚克隆入pRSET-A原核表达载体。导入大肠杆菌BL21 经 IPTG 诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定后用镍柱纯化。免疫家兔制备特异性抗体。结果 RT-PCR 得到777bp的片断,酶切鉴定及测序证实与GeneBank中大鼠NT-3 序列一致,成功构建了原核表达载体pRSET-A-NT-3。 导入 BL21 诱导得到一条约34kD 的新蛋白带。免疫家兔获得1∶64000 的高效价特异性抗大鼠NT-3 血清。结论 成功克隆了大鼠脑组织NT-3 基因,使其编码的蛋白质在原核细胞中顺利表达并纯化。制备了特异性抗体,为进一步研究其在周围神经损伤修复中的作用奠定了基础。