基础医学与临床 ›› 2007, Vol. 27 ›› Issue (11): 1241-1245.
刘春喜 李大庆 张运 姜虹 王荣 王旭平
ChunXi Liu LI Da-Qing Yun Zhang Hong Jiang Rong Wang XuPing Wang
摘要: 内皮祖细胞(endothelial progenitor cells ,EPCs )的繁殖能力和归巢特性提示其作为基因转移载体的良好潜力,但能否在体外被修饰并有效表达目的基因,是基因修饰EPCs双重治疗血管病的技术策略能否实现的前提条件。本文从兔外周血中分离鉴定内皮祖细胞(endothelial progenitor cells ,EPCs ),PCR扩增人激肽释放酶(Kallikrein,tHK)目的基因,将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP-N3上,构建以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein ,GFP) 为报告基因的重组真核表达载体,并利用脂质体转染体外培养的EPCs,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察tHK-EGFP融合蛋白在细胞中的表达;用RT-PCR 方法验证tHK在mRNA水平的表达;用ELISA方法验证tHK蛋白水平的表达。结果表明,通过基因克隆方法成功构建了pEGFP-Kallikrein重组质粒载体,并且在EPCs 中稳定表达,表达的融合蛋白具有tHK 和EGFP 的双重活性,tHK基因修饰EPCs对于血管病治疗具有良好的前景。