目的 评价肿瘤患者血液来源的混合活化杀伤(mixed activated killer,MAK)免疫细胞在免疫缺陷小鼠体内的安全性及生物分布特征。方法 使用免疫缺陷NOG小鼠,尾静脉注射给予MAK细胞9次,末次给药后持续观察28 d,考察小鼠临床症状、体质量和摄食量变化、血液学和血清生化指标、细胞因子指标和组织病理学变化特点,同时伴随考察MAK在外周血及各组织脏器分布特征。结果 MAK细胞对小鼠临床症状、注射部位、体质量和摄食量无明显影响,小鼠血清可检测到人源干扰素-γ,MAK细胞体外输注可导致小鼠外周血淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、白细胞数升高,嗜碱性粒细胞百分比降低,全身多数组织脏器可见混合细胞聚集。给予MAK细胞28 d后,小鼠全身多数组织出现MAK细胞的大量扩增。结论 MAK细胞在免疫缺陷NOG小鼠体内增殖并引起机体免疫应答反应,未见明显毒性反应风险。本研究数据可为相关产品非临床安全性评价提供借鉴。

目的 评价嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞U87在荷瘤免疫缺陷小鼠体内的临床前安全性。方法 使用NCG小鼠皮下接种人原位胰腺癌细胞BxPC-3构建移植瘤模型,并在此基础上单次给予细胞U87(每只动物2×10⁶个和10×10⁶个细胞),持续观察至给药后第84天。考察小鼠肿瘤清除情况、存活率、临床症状、体质量变化、血液学指标、血清生化指标检测、淋巴细胞亚群分类、人源细胞因子指标和组织病理学变化特点。结果 单次尾静脉给予荷瘤NCG小鼠U87可明显延长小鼠生存期,甚至可完全清除肿瘤负荷。作为其药效学作用,U87可导致人源IFN-γ水平升高,以及多组织/脏器的混合细胞聚集,未见与U87相关的局部刺激性和明显系统毒性。U87在高剂量下可导致过度免疫反应,对动物GLU、TG、TP、ALB、PLT及RET数值产生一定影响。当体内肿瘤消除后,上述异常指标有所恢复。每只动物给予2×10⁶个CAR-T(自给予细胞后第8周起)和10×10⁶个CAR-T(自给予细胞后第4周起)剂量下均可导致轻度GvHD相关的组织病理学改变,且该变化与T细胞增殖水平相关联。未见与U87相关的肿瘤形成。结论 U87在BxPC-3荷瘤NCG小鼠体内未见明显免疫毒性和致瘤性的相关风险,且呈现一定药效学作用。本研究结果为靶向实体瘤的毒理学评价提供借鉴。

目的 采用重度免疫缺陷NPG小鼠模型对细胞因子诱导的杀伤性(CIK)细胞治疗产品进行毒性研究,考察多次给药后的毒性反应,为临床应用提供安全性依据。方法 采用NPG小鼠,设主实验组和卫星组两个大组,每大组分为溶媒对照组、低剂量组(每只小鼠给予2×10⁶个细胞)和高剂量组(每只小鼠给予3×10⁷个细胞)。每两周给药1次,共给药6次,恢复期28 d。实验期间,主实验组动物进行临床症状观察、体质量和摄食量测定,并于给药期结束和恢复期结束后解剖采血,进行血液学和血清生化检查、细胞因子检测、脏器称重和病理学检查。卫星组动物于首次给药和末次给药前、给药后3 h、1、3、10 d以及恢复期结束后采血,进行细胞表型分析,以考察CIK细胞的分布情况。结果 在低剂量组重复给药6次,小鼠未见明显毒性反应,仅个别动物出现弓背、摄食量下降和葡萄糖(GLU)、总胆固醇(CHO)升高等症状,血液中仅在首次给药后1 d和末次给药后个别时间点(3 h、10 d、29 d)检测到少量CIK细胞。高剂量组重复给药6次,小鼠血液中可检测较高水平的CIK细胞,血清中γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素10(IL-10),白细胞介素2(IL-2)等具有肿瘤杀伤作用的细胞因子升高,同时小鼠出现明显的移植物抗宿主反应(graft-versus-host disease,GvHD),表现为动物临床症状、体质量、摄食量、血液学和血清生化等多个指标的变化、动物多脏器发生混合细胞聚集和GvHD相关的病变。结论 NPG小鼠重复给予CIK细胞,在每只小鼠给予2×10⁶个细胞的剂量(临床拟用剂量)下动物未见显著的毒性反应;在每只小鼠给予3×10⁷个细胞剂量下动物出现与异种细胞移植相关的GvHD反应,未见其他相关的毒理学反应。该结果为CIK细胞进入临床试验奠定了基础。

目的 评估肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在NOG小鼠体内的分布及清除情况。方法 研究共使用84只NOG小鼠,分为溶媒对照组和受试物组,单次尾静脉注射给予小鼠TIL,在给药后不同时间点采血和解剖,取脏器,采用流式细胞术和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测细胞在血液和不同脏器的分布情况。结果 给药后1~2 d,血液中CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺细胞数量达到峰值,同时qPCR检测结果显示,TIL主要分布于肺、血液、肝脏等组织,其他组织分布较少,给药后42 d,大部分组织基因拷贝低于定量下限。结论 NOG小鼠单次尾静脉注射TIL,主要在肺脏、血液、肝脏中分布,并且在体内存续时间不超过42 d。