中国药学杂志

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    中药沉香的研发和应用专刊
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    2-(2-苯乙基)色酮类化合物的生物活性及其生物合成研究进展
    肖梦君, 高志晖, 魏建和
    2019, 54(23): 1909-1918. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.001
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    2-(2-苯乙基)色酮类化合物仅分布在少数植物中,具有神经保护、抗菌和抗炎等多种生物活性,是沉香的特征性成分和主要活性成分,具有广阔的药用前景和应用价值。笔者对2-(2-苯乙基)色酮类化合物的神经保护活性、抗肿瘤细胞毒活性、抗菌活性和抗炎活性等生物活性、构效关系及生物合成途径的研究现状进行综述和展望,以期为筛选药用2-(2-苯乙基)色酮类化合物和对其生物合成途径的解析提供参考,并指出了目前生物合成研究中存在的问题。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    白木香转录因子AsWRKY25的分子克隆与表达分析
    孙佩文, 唐小琳, 吕菲菲, 余翠翠, 王彬彬, 高志晖, 金钺, 徐艳红, 魏建和
    2019, 54(23): 1919-1925. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.002
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    目的 克隆和表达白木香(Aquilaria sinensis)转录因子基因AsWRKY25并进行特性分析,为深入研究其生物学功能奠定基础。方法 以白木香愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模版,采用聚合酶链式反应技术(PCR)克隆基因CDS全长;通过生物信息学工具和软件分析编码蛋白的生物学特性,通过组织特异性表达分析不同组织中的基因表达模式。构建pET-28a-AsWRKY25原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3) 中进行原核诱导表达及鉴定。结果 从白木香愈伤组织中克隆到了AsWRKY25转录因子基因,其CDS全长1 728 bp,编码575个氨基酸;该序列密码子优化后连接到pET-28a表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达,其适合诱导条件为1 mmol·L-1 IPTG,37 ℃连续培养6 h。组织表达分析结果表明,AsWRKY25在白木香的沉香层中的表达量最高,在根、茎、枝中的表达量最低。结论 成功克隆并表达了白木香WRKY类转录因子AsWRKY25, 该转录因子可能参与了沉香的伤害诱导形成过程。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    应用于多个沉香属物种鉴定的DNA条形码序列筛选
    康勇, 刘杨, 杨云, 冯剑, 郑希龙, 魏建和
    2019, 54(23): 1926-1932. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.003
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    目的 本实验旨在从常用DNA条形码序列中筛选出有效的序列,从而实现沉香属内常见物种的快速鉴别。方法 本实验以8个不同国家5种常见的沉香属物种为材料,对其核基因ITS2,叶绿体基因matK、rbcL和trnH-psbA的序列特征进行评估,并通过构建系统进化树分析不同序列及组合对沉香属物种的鉴别效率。结果 4种序列均具有较优的PCR扩增成功率及测序成功率,其中matK序列变异位点和SNPs最多,trnH-psbA最少,Barcoding gap检验结果表明,鉴定效果最优序列依次是matK>ITS2>rbcL>trnH-psbA,matK片段具有明显的遗传变异间隔区域;通过计算平均节点支持率及同质性检验, matK+ITS2+rbcL组合构建进化树可将多个沉香属物种分别聚为一支,且具有最高的节点支持率;基于Taxon DNA的BBA方法验证,matK序列与其他序列组合的鉴定效果最好。结论 使用DNA条形码技术鉴定沉香属物种,单一片段中鉴别成功率最高的为matK序列,应用matK+ITS2+rbcL的序列组合可以实现沉香属不同物种的准确鉴别。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    海南产和广东产沉香木中真菌的多样性分析
    陈旭玉, 杨云, 刘小敏, 刘杨, 冯剑, 肖梦君, 魏建和
    2019, 54(23): 1933-1938. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.005
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    目的 研究海南产和广东产沉香木中真菌的组成及差异。方法 利用Illumina HiSeq测序平台对沉香木中真菌基因组测序并进行生物信息学分析。 结果 海南省内各地区沉香木中真菌的菌落结构接近,广东省内沉香木的真菌菌落结构接近。广东产和海南产沉香木中真菌组成存在明显差异,海南产沉香木真菌多样性和丰富度高于广东产沉香木的真菌。子囊菌亚门Ascomycota为沉香木的优势门,担子菌亚门Basidiomycota次之。子囊菌亚门是海口、万宁、乐东、儋州和东莞沉香木真菌的优势种群,担子菌亚门是化州沉香木真菌的优势种群。伞菌纲Agaricomycetes为广州化州沉香木的优势种群。粪壳菌纲Sordariomycetes为东莞和儋州沉香木的优势种群。座囊菌纲Dothideomycetes为海口、乐东和万宁地区沉香木的优势种群。Pleosporales分别为东莞、海口、万宁和乐东地区沉香木真菌的优势目,Trechisporales为化州沉香木真菌的优势目,Polyporales为儋州沉香木真菌的优势目。Lignosphaeria为海口和万宁沉香木真菌的优势属,Perenniporia 和Pyrigemmula分别为儋州和乐东沉香木真菌的优势属,Phaeoacremonium为化州和东莞沉香木真菌的优势属。不同地区沉香木的优势种群不同。结论 海南产沉香木真菌多样性和丰富度高于广东产沉香木,不同地区沉香木真菌分布有差异。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    伤害诱导白木香愈伤组织形成倍半萜过程中活性氧的产生和积累
    吕菲菲, 孙佩文, 刘培卫, 杨云, 肖梦君, 徐艳红, 魏建和
    2019, 54(23): 1939-1944. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.006
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    目的 探索伤害诱导白木香(Aquilaria sinensis)愈伤组织形成倍半萜过程中活性氧(reactive oxygen species,ROS)组分过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2),超氧阴离子(superoxide radical ion,O2-),羟基自由基(hydroxyl radical,OH-)对伤害刺激的响应强度。方法 GG-MS分析白木香愈伤组织受伤害后倍半萜合成,荧光显微观察H2DCF染色后细胞内总ROS分布情况,生化反应检测细胞内H2O2、O-2和OH-含量变化。结果 伤害处理愈伤组织细胞后,两种倍半萜合成并积累。ROS作为信号分子在白木香伤害诱导结香过程中爆发并积累,细胞内DCF荧光逐渐增强,3 d达到最高点后降低。H2O2、O-2和OH-含量显著增加,H2O2和O-2对伤害响应早于OH-,H2O2和O-2在3 d时达到最大值后降低,OH-在5 d后才达到最大值。结论 ROS各组分作为信号分子均响应于伤害刺激,且各组分响应强度差异可协同调控白木香愈伤组织防御反应促进倍半萜合成。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    通体结香技术产沉香色酮类成分分离及其抗炎作用
    余章昕, 王灿红, 郑威, 陈德力, 杨云, 刘洋洋, 魏建和
    2019, 54(23): 1945-1950. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.007
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    目的 研究通体结香技术产沉香中的2-(2-苯乙基)色酮类成分及其抗炎活性。方法 综合运用多种现代色谱分离方法对提取物进行分离,并通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构;结合脂多糖介导的RAW 264.7细胞模型评价部分化合物的抗炎活性,同时通过酶联免疫方法检测TNF-α的分泌水平。结果 从通体香中分离得到1个新化合物(7′R)-2-[2-(7′-羟基苯基)乙基]色酮 (1), 此外还有9个类似物,分别鉴定为: 6,7-二甲氧基-2-[2-(7′-羟基苯基)乙基]色酮 (2), 6-羟基-2-[2-(7′-羟基苯基)乙基]色酮 (3), 8-氯-6-羟基-2-(2-苯基乙基)色酮 (4), 8-氯-6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基苯基)乙基]色酮 (5), 8-氯-6-羟基-2-[2-(3′-羟基-4′-甲氧基苯基)乙基]色酮 (6), 7-羟基-6-甲氧基-2-(2-苯基乙基)色酮 (7), 6-羟基-7-甲氧基-2-[2-(4′-羟基苯基)乙基]色酮 (8), 6-羟基-2-[2-(3′-甲氧基-4′-羟基苯基)乙基]色酮(9), 6-羟基-2-[2-(3′-羟基-4′-甲氧基苯基)乙基]色酮 (10)。活性实验结果发现,化合物1, 4, 6, 9对 LPS 诱导RAW264.7 细胞释放TNF-α炎症因子具有显著抑制作用,IC50值分别为13.30,8.53,7.72和10.87 μg·mL-1。结论 化合物1为新化合物,首次报道化合物4的晶体结构;化合物1, 4, 6, 9具有显著抗炎作用。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    沉香精油通过抑制p-STAT3和IL-1β/IL-6产生抗炎作用
    高小力, 张倩, 霍会霞, 朱枝祥, 赵云芳, 屠鹏飞, 李军
    2019, 54(23): 1951-1957. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.008
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    目的 沉香是常用名贵药材,因具有多种药效且药用资源稀缺,是目前研究的热点。沉香精油(Chinese eaglewood essential oil, CEEO)是其主要有效成分,本实验旨在研究CEEO的抗炎作用及分子机制。方法 采用小鼠耳肿胀实验和大鼠足肿胀实验评价CEEO的抗炎活性;通过脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞模型研究CEEO对白细胞介素(IL)-1β、IL-6等的影响;采用Western blot方法研究CEEO对大鼠组织蛋白p-STAT3,p-IκBα/p-NF-κBp65的影响;通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法分析CEEO的化学成分。结果 CEEO (60~960 mg·kg-1, ig)剂量依赖地抑制二甲苯所致耳肿胀(P<0.001),最高抑制率为73%;CEEO (680 mg·kg-1, ig)明显抑制角叉菜胶所致足肿胀(P<0.001),最高抑制率为51%。ELISA和RT-PCR结果显示,CEEO(10、5、2.5 μg·mL-1)显著抑制IL-1β和IL-6的产生及其mRNA水平(P<0.001),最高抑制率分别为68%和39%,64%和52%。Western blot结果显示,CEEO(680 mg·kg-1, ig)明显抑制p-STAT3蛋白的表达,抑制率为21% (P<0.05)。通过GC-MS鉴定了沉香中的117个化合物,其主要成分为倍半萜类(68.83%)。结论 本实验首次发现中国沉香精油灌胃给药具有显著的抗炎活性,其机制可能是通过降低p-STAT3的过表达,进而抑制前炎症细胞因子IL-1β和IL-6的产生和释放,从而抑制炎症的发生与发展。沉香精油的抗炎作用可能与其所含的主成分倍半萜有关。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    沉香挥发油成分-靶点预测研究
    王灿红, 王帅, 彭德乾, 余章昕, 刘洋洋, 杨云, 郭鹏, 魏建和
    2019, 54(23): 1958-1964. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.009
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    目的 通过网络药理学研究方法,预测沉香挥发油化学成分-疾病治疗靶点。方法 首先,采用GC-MS对沉香挥发油成分测定分析,构建化合物数据库;其次,采用虚拟计算对数据进行吸收、分布、代谢、排泄(ADME)和作用靶点预测;最后,对预测所得的潜在靶标进行分类并与已知睡眠障碍、焦虑及抑郁相关疾病的治疗靶点进行比对分析,预测沉香疾病治疗靶点,并构建化合物-治疗靶点-疾病网络。结果 沉香挥发油可以通过配体-受体相互作用、cAMP信号、5-羟色胺能神经、胆碱能神经、多巴胺能神经等多条信号通路发挥神经调节作用;同时筛选到 11 个化合物对 30个治疗失眠、焦虑和抑郁相关靶点有潜在作用。结论 沉香挥发油对睡眠障碍、焦虑及抑郁等神经系统疾病具有潜在的预防和治疗作用,这为沉香挥发油镇静安神及作用机制的深入研究开发提供理论依据和数据支撑。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    通体结香技术产沉香提取物急性毒性和遗传毒性研究
    侯文成, 王灿红, 杨云, 刘洋洋, 魏建和
    2019, 54(23): 1965-1969. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.010
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    目的 研究评价通体结香技术产沉香(通体香)乙醇提取物用于保健食品研发剂量下(生药量0.60 g·d-1),对哺乳动物的急性经口毒性与遗传毒性。方法 以SPF级SD大鼠为模型,限量法24 h内2次给予大鼠灌胃总剂量10 g·kg-1·bw-1后,连续饲喂观察14 d,以细菌回复突变(Ames)试验、哺乳动物红细胞微核试验和体外哺乳动物染色体畸变试验综合测试通体香乙醇提取物用于食品加工的遗传毒性。结果 限量法给予大鼠最大量10 g·kg-1灌胃后,14 d的观察时间内大鼠活动正常,无中毒或其他不良表现,属无毒级别;在实验剂量条件下,通体香提取物的3项遗传毒性实验中,细菌回复突变数、红细胞微核率和哺乳动物染色体畸变率与阴性对照相比均无显著性差异(P>0.05),与阳性对照相比差异显著(P<0.01)。结论 通体香提取物在实验剂量下对大鼠无急性毒性,也无遗传毒性。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    通体结香技术产沉香提取物对SD大鼠的慢性毒性研究
    侯文成, 王灿红, 冯剑, 杨云, 刘洋洋, 魏建和
    2019, 54(23): 1970-1975. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.011
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    目的 为研究评价通体结香技术产沉香(通体香)的慢性毒性。方法 本研究参考《中国药典》沉香用法用量,对SD大鼠连续90 d分别饲喂药用剂量组(1 262.4、631.2和157.8 mg·kg-1)和食用剂量组(150、105和45 mg·kg-1)的通体香提取物,并连续记录大鼠的体重增加量和食物利用率,90 d后,处死大鼠,采集大鼠血液和尿液,检测血液指标、血清生化指标和尿液指标,并对大鼠重要内脏器官进行解剖称重和病理学组织检查。结果 以通体香提取物连续饲喂SD大鼠90 d,大鼠体重增重、食物利用率、血液学指标、血清生化指标、尿液指标和内脏器官重量与对照组相比无显著性差异(P>0.05),组织学检查结果表明,雄、雌大鼠实验组与对照组均有部分病变,但药用剂量组和食用剂量组高剂量组的病变例数与对照组相比均无显著性差异,说明病变的发生与通体香提取物无关。结论 通体结香技术所产沉香对实验动物安全无慢期毒性,即作为药用和食用均无慢性毒性。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    通体结香技术产沉香提取物致畸、致突变毒性研究
    侯文成, 王灿红, 杨云, 刘洋洋, 魏建和
    2019, 54(23): 1976-1979. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.012
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    目的 考察通体结香技术产沉香(通体香)提取物用于保健食品研发剂量下(生药量0.60 g·d-1),对SD大鼠怀孕期间的致畸和致突变毒性。方法 试验通过对妊娠6~15 d的大鼠进行45、105、150 mg·kg-1通体香提取物灌胃,观察并记录孕鼠活动情况,测量并记录孕鼠体重,妊娠20 d后处死大鼠,解剖并记录观察胎仔存活率、吸收数等,并对胎仔进行解剖观察,记录胎仔畸形类型和数量。结果 通体香提取物45、105、150 mg·kg-1·bw-1 3个剂量组喂养孕鼠,对孕鼠体重无影响,对胎仔黄体数、着床数、活胎数、吸收胎数和死胎数等于对照组相比均无显著性差异(P>0.05),对胎仔的畸变类型和数量均无影响,与对照相比无显著性差异(P>0.05)。结论 通体香提取物在实验剂量下对孕期大鼠及胎仔无致畸和致突变毒性。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    天然沉香和人工沉香的HPLC指纹图谱分析及比较
    许凌雯, 杨思惠, 陈晓颖, 周欣, 章卫民, 高晓霞
    2019, 54(23): 1980-1987. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.013
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    目的 建立沉香HPLC指纹图谱分析方法,并结合醇溶性浸出物与沉香四醇的含量比较分析天然沉香与人工沉香,为科学评价沉香药材品质提供新方法。方法 按《中国药典》(2015年版)进行醇溶性浸出物和沉香四醇的含量测定;采用Platisil ODS 98色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1,检测波长252 nm,柱温31 ℃,建立沉香HPLC指纹图谱。使用《中药指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)》软件建立共有模式,计算图谱相似度,共有峰相对峰面积进行主成分分析。结果 13批天然沉香的指纹图谱相似度为0.021~0.856,醇溶性浸出物含量为10.1%~31.0%,沉香四醇含量为0.04%~2.83%。11批人工沉香的指纹图谱相似度为0.079~0.453,醇溶性浸出物含量为10.3%~31.3%,沉香四醇含量为0.14%~1.02%。13批天然沉香和11批人工沉香分别各自聚为两组,对照药材聚在天然沉香组。天然沉香与人工沉香的指纹图谱相似度具有显著性差异(P<0.05),人工沉香指纹图谱相似度与醇溶性浸出物含量呈正相关(P<0.05)。结论 HPLC指纹图谱结合主成分分析可简便、快速地区分天然沉香与人工沉香,为全面评价沉香药材品质提供参考。
  • 中药沉香的研发和应用专刊
    中国及东南亚国家沉香树采用通体结香技术产沉香的质量比较
    杨云, 冯剑, 朱杰霄, 刘洋洋, 陈德力, 魏建和
    2019, 54(23): 1988-1994. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.014
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    目的 比较中国及东南亚国家沉香树采用通体结香技术产沉香的质量异同。方法 依据《中国药典》2015年版的沉香标准,分析和评价中国及东南亚国家11个产地的11批通体结香技术产沉香的性状、鉴别项、浸出物、含量测定、特征图谱,并测定总色酮类化合物含量。结果 11批通体结香技术产沉香样品的形态特征、薄层色谱、特征图谱均相似,所有样品中均观察到木间韧皮部、导管和射线等特征结构;国内6个产地的通体结香技术产沉香的浸出物及总色酮类化合物含量均高于东南亚国家的5个产地。与其他人工结香方法产的沉香相比,通体结香技术产的沉香的感官特征较为稳定,浸出物及总色酮类化合物平均含量明显较高,但沉香四醇平均含量略低于外周结香和火烙法结香的沉香。结论 从质量而言,通体结香技术优于传统结香方法,该技术不仅适用于中国的白木香树(Aquilaria sinensis)结香,也适用于东南亚国家的沉香树结香。通体结香技术产沉香的质量总体较优,但白木香树产的沉香质量优于东南亚树种产的沉香。
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    常用植物黏合剂物种基原鉴定、制香性能与燃烧性能评价
    弓宝, 杨云, 刘洋洋, 余章昕, 魏建和
    2019, 54(23): 1995-2000. https://doi.org/10.11669/cpj.2019.23.015
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    目的 明确5种市售常用植物制香黏合剂的基原物种及其制成沉香线香的性能。方法 收集市售常用植物制香黏合剂,利用DNA条形码技术进行基原鉴定;采用传统制香方法,选用5种黏合剂制作沉香线香(规格 φ:1.5 mm, L:18 cm),对其颜色、黏性、燃烧时间、燃烧速率、香味及灰分重量等指标进行研究。结果 5种常用植物黏合剂基原鉴定为:光榆(Ulmus glabra),潺槁树[Litsea glutinosa (Lour.) C. B. Rob]、普文楠(Phoebe puwenensis Cheng)、锈毛润楠[Machilus balansae (Airy Shaw) F. N. Wei and S. C. Tang]和恩德樟属(Endlicheria sp.)植物;线香性能研究表明,楠木黏粉的黏性最好、香味干扰最小,其制成的沉香线香燃烧时间最长,灰分重量最轻;燃烧性能研究表明,同等条件下,线香的直径越大,燃烧时间越长。结论 明确了5种常用植物黏合剂的基原物种,且楠木黏粉制香性能最优;线香燃烧时间与重量、长度及直径成正比。