目的 筛选适合树脂类药材血竭鉴定的DNA条形码序列,探索血竭药材鉴定的新方法。方法 提取41份药材和基原植物样本的基因组DNA,对药材样本基因组DNA的7条候选条形码序列进行PCR扩增及测序。采用软件CodonCode Aligner V4.2对测序峰图进行校对拼接,应用MEGA 5.0软件计算种内种间遗传距离(Kimura 2-parameter),构建邻接树(Neighbor-joing tree,NJ Tree)。 结果 血竭药材的trnL(UAA) 内含子的P6环序列可以成功扩增并得到高质量序列,而其他6个候选序列均不能成功扩增,难以用于鉴别。血竭的trnL(UAA) 内含子的P6环序列长度为45 bp,麒麟竭的种内最大K2P遗传距离远小于麒麟竭与品剑叶龙血树的种间最小K2P遗传距离,NJ树显示血竭与其混伪品各自聚为一支,可明显区分。结论 trnL(UAA) 内含子的P6环序列可作为血竭药材的DNA条形码鉴定序列,成为血竭药材真伪的鉴定依据。
目的 应用ITS2序列对降香药材及其混伪品进行DNA条形码鉴定。方法 以降香药材及其常见混伪品为研究对象,PCR扩增降香及其混伪品的ITS2序列并进行双向测序,利用软件MEGA5.0对ITS2序列的长度、GC含量等分析比对,基于K2P模型计算遗传距离,通过中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接树(NJ树)法对降香药材及其混伪品进行鉴定。结果 降香药材的ITS2序列长度为216 bp,GC含量为68.5%,种内无变异位点,降香与其混伪品的种间最小遗传距离为0.009,大于降香种内最大K2P距离。结论 中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接树均可以准确区分降香药材及其混伪品。
目的 采用ISSR分子标记对来自36个不同产地金钱草种质资源的遗传多样性进行分析。方法 从45条ISSR引物中筛选出10条进行PCR扩增,扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增结果采用POPGENE32软件进行遗传参数统计分析,采用NTSYS2.10软件UPGMA法进行亲缘关系聚类分析,构建聚类图。结果 10条引物共扩增出91个位点,其中80个为多态性位点,总多态位点百分率(PBB)87.91%;观测等位基因数(Na)1.879 1,有效等位基因数(Ne)1.381 7;Nei′s遗传多样性指数(He)0.239 0, Shannon信息指数(I) 0.374 5。36份供试材料遗传相似系数变化范围为0.69～0.97。在相似系数为0.76时可将36份样品分为6类。聚类结果显示,较小地理范围内的样品亲缘关系较近,在聚类图上聚为一类;而通过聚类分析不能严格的将来自不同产地的样品区分开。结论 金钱草种质资源具有较为丰富的遗传多样性,基于ISSR划分的组群与地理分布没有明显相关性。
目的 建立一种准确、快速的凉茶药材凉粉草与其混伪品的DNA条形码鉴定方法。方法 本实验收集凉粉草及其混伪品共5个物种和4个变种的55份样本,提取基因组总DNA,通过PCR扩增和CodonCode Aligner软件拼接注释获得完整的ITS2序列,然后应用种内种间K2P遗传距离和系统进化NJ树分析进行物种鉴定。结果 凉粉草ITS2序列长度为232 bp,种内遗传距离为0,远小于其与混伪物种间的最小遗传距离0.210 2~0.310 9;NJ树结果表明,凉粉草独成一支,与其混伪品均可准确区分。结论 基于ITS2序列的DNA条形码技术能够准确有效地实现凉粉草与其混伪品的快速鉴别,保障凉茶药材凉粉草的使用安全。
目的 基于中药材DNA条形码分子鉴定法鉴定市售地骨皮药材及其混伪品。方法 本实验对象共计137份,依照中药材DNA条形码分子鉴定法标准操作流程(DNA barcoding SOP)获取各样本ITS2序列,构建地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库,对市售地骨皮药材及饮片进行鉴定。结果 地骨皮药材ITS2序列长度为212~230 bp,能够明显区分地骨皮药材及其混伪品。50%市售药材及饮片能够获得可用于分析的条形码序列,应用地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库鉴定结果显示所得序列均为枸杞。结论 ITS2序列能够作为地骨皮药材及其混伪品鉴定的DNA条形码,本实验所建立的地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库能够用于市售地骨皮药材及饮片的鉴定。
目的 利用COI序列对中药材蟾皮及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究,为蟾皮药材的快速准确鉴定提供新的技术手段。方法 收集16个不同地区的蟾皮药材、基原动物及其混伪品总计6个种54份样本,提取总DNA,进行PCR扩增及双向测序,测序结果采用CodonCode Aligner V 4.2进行拼接校对,运用MEGA5.0进行比对分析,计算种内及种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统发育树。结果 蟾皮两个基原物种的种内最大K2P遗传距离均远远小于其与混伪品的种间最小K2P遗传距离。NJ树图显示,蟾皮药材的两个基原物种及其混伪品分别聚为独立一支,得到了很好区分,并显示出良好的单系性。结论 应用COI序列作为DNA条形码能够准确有效地鉴别中药材蟾皮及其混伪品。
目的 建立HPLC一测多评法测定冬虫夏草中3种核苷类成分尿苷、鸟苷和腺苷的含量。方法 以腺苷为内参物,建立腺苷与尿苷和鸟苷之间的相对校正因子。分别采用一测多评法和外标法对冬虫夏草中的3种核苷类成分进行测定。结果 通过对测定结果进行比较分析,发现一测多评法和外标法所得的结果没有显著性差异。结论 本实验建立的一测多评法准确可靠,可用于冬虫夏草中核苷类成分的质量评价。
中药注射剂报道最多的不良反应是“过敏反应”,其症状包括皮肤黏膜红肿、瘙痒;腹痛、恶心;胸闷、呼吸困难以及血压下降等,严重时可发生休克或死亡。笔者通过对中药注射剂临床不良反应特点以及临床前实验研究结果的分析,提出中药注射剂的不良反应主要是以类过敏反应为主的观点。类过敏反应与过敏反应性质和产生机制不同,二者不宜混淆,否则会对临床应采取的处理措施以及基础研究方向产生误导。笔者还探讨了中药注射剂类过敏反应(PARs)风险防控途径。
胰腺癌是全世界公认的高度恶性疾病之一,其年发病率几乎等同于死亡率。然而关于胰腺癌的治疗目前尚缺乏有效的治疗措施。吉西他滨联合白蛋白结合型紫杉醇被认为在胰腺癌的治疗过程中能取得较好的疗效,因此笔者对吉西他滨联合白蛋白结合型紫杉醇在治疗Ⅱ/Ⅲ期胰腺癌的现状进行综述。这些研究显示,吉西他滨联合白蛋白结合型紫杉醇可以有效提高患者的总生存率和无进展生存期,为胰腺癌的晚期治疗带来了一线曙光。
目的 探讨新型苯并噻唑衍生物BD759抑制T细胞增殖的作用机制。 方法 流式细胞术检测T细胞增殖、CD25表达及细胞周期。酶联免疫吸附法测定BD759对活化T细胞分泌白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-10、白细胞介素-17A及干扰素-γ等细胞因子的影响。 结果 BD759抑制抗人CD3和CD28mAbs刺激的T 细胞增和混合淋巴细胞反应,IC50分别为(3.5 ± 0.7) 和(3.3 ± 0.9) μmol·L-1。BD759对人静息T细胞和外周血单个核细胞无细胞毒性。BD759不抑制活化的T细胞表达CD25和分泌细胞因子白细胞介素-2 、白细胞介素-4及白细胞介素-10,但显著抑制白细胞介素-6、白细胞介素-17A和干扰素-γ的产生,并且阻滞细胞周期于G0/G1期。 结论 新型苯并噻唑衍生物BD759不影响T细胞的活化,但通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制活化的T细胞增殖,并抑制白细胞介素-6、白细胞介素-17A和干扰素-γ等促炎细胞因子的分泌。BD759有望作为先导化合物,开发用于自身免疫性疾病与器官移植的新型药物。
目的 探讨仙茅苯甲酸酯类酚苷对维甲酸致大鼠骨质疏松症的作用。方法 3月龄SD雌性大鼠灌胃给予70 mg·kg-1·d-1的维甲酸造模2周,造模结束后给予雌二醇(E2,1 mg·kg-1)、淫羊藿总黄酮(TF,100 mg·kg-1 )、仙茅苯甲酸酯类总酚苷(COP,6,18和54 mg·kg-1)、仙茅乙醇提取物(COE,3 000 mg·kg-1)4周。利用双能X线骨密度仪测右侧股骨的骨密度;全自动生化分析仪测定血清和尿液中Ca、P、肌酐(creatinine,Cr)含量及碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性。以Elisa试剂盒测定血清中骨钙素(BGP)和脱氧吡啶啉(DPD)的水平。结果 SD雌性大鼠灌胃给予70 mg·kg-1·d-1的维甲酸2周可显著降低大鼠股骨的骨密度,增加尿液中Ca与肌酐的比值和血清抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。雌二醇、淫羊藿总黄酮和仙茅苯甲酸酯类总酚苷不仅可显著增加维甲酸骨质疏松大鼠的骨密度,降低尿液中Ca与肌酐的比值和抗酒石酸酸性磷酸酶活性,抑制骨吸收;还可调节维甲酸模型大鼠血清中骨钙素的水平,增加碱性磷酸酶的活性,促进骨形成。结论 仙茅苯甲酸酯类酚苷可通过抑制骨吸收、增加骨形成减少维甲酸骨质疏松大鼠的骨丢失。
药用辅料是药品重要的组成部分,药用辅料的质量直接关系到整个药品的安全性、有效性,《中国药典》标准是药用辅料质量控制的核心,2015年版《中国药典》与2010年版《中国药典》最大的变化之一就是药用辅料标准与通则合并成为单独第四册,新版药典收载的药用辅料品种将成倍增加,新技术、新方法得到了广泛应用,注射级药用辅料的标准日趋严格,功能性指标的设立令人耳目一新。本文将通过2015年版《中国药典》药用辅料标准的变化解读未来我国药用辅料行业的趋势,以及这些趋势对我国整个药品行业的影响。
