%0 Journal Article %A 李萌 %A 孙亮 %A 朱磊 %A 于传飞 %A 王文波 %A 武刚 %A 张荣建 %A 崔永霏 %A 王兰 %T 以Delta样蛋白3为靶点的抗体偶联药物质量研究 %D 2019 %R 10.11669/cpj.2019.24.004 %J 中国药学杂志 %P 2018-2027 %V 54 %N 24 %X 目的 建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3(DLL3)单抗-MPVP-PBD的质控方法。方法 本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利用CE-SDS和SEC-UPLC测定大小异质性;利用iCIEF分析电荷异质性;分别利用HIC-HPLC和LC-MS对药物抗体偶联比(drug-to-antibody ratio,DAR)进行测定;利用RP-HPLC测定游离小分子药物含量。结果 抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性EC50平均值为(4.02±0.22)ng·mL-1,RSD为5.47%;结合活性EC50平均值为(12.67±1.09)ng·mL-1,RSD为8.60%;非还原CE-SDS 完整IgG峰面积百分比为(25.58±0.15)%、HHL为(36.56±0.24)%、轻链为(14.61±0.13)%等,RSD均小于2%;还原CE-SDS 重链和轻链峰面积之和为(96.97±0.31)%,RSD为0.32%;SEC-UPLC主峰面积为(98.68±0.05)%,多聚体(1.32±0.05)%,RSD均小于5%;iCIEF 主峰面积为(68.19±0.68)%,主峰等电点(8.28±0.01),RSD均小于2%;LC-MS测定DAR为2.08(完整相对分子质量水平)和1.73(轻重链水平);HIC-HPLC测定DAR为(1.86±0.03),0-药物为(19.49±0.28)%,1-药物为(11.21±0.20)%,2-药物为(48.64±0.68)%,3-药物为(5.21±0.40)%,4-药物为(15.44±1.19)%,RSD均小于10%; LC-MS测定了偶联位点占有率;RP-HPLC测定游离小分子药物为(23.20±0.82)%,RSD为3.53%。结论 本实验初步建立了抗体偶联药物抗DLL3单抗-MPVP-PBD的质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可作为其常规检测方法,为我国相关抗体偶联药物的质量检测提供了参考依据。 %U http://journal11.magtechjournal.com/Jwk_zgyxzz/CN/10.11669/cpj.2019.24.004